不同培养液对小鼠受精卵体外发育的影响

小鼠卵母细胞体外受精后通过比较4种培养液(M16、mCZB、HTF、mCZB*)对小鼠受精后胚胎发育的影响,以期建立最优的体外受精培养液系统。结果表明:受精卵在mCZB*、M16、mCZB、HTF培养液中2-4细胞发育率分别为60.26%、50.00%、48.72%和52.78%。mCZB*比其他3种培养液效果显著(P<0.05),其他3个培养液之间差异不显著(P>0.05)。在mCZB*、M16、mCZB、HTF培养液中囊胚发育率分别为44.37%、27.03%、26.28%和22.22%,各培养液处理组之间差异显著(P<0.05)。本试验提示mCZB*为小鼠体外受精胚胎发育的最佳培养液。     

山西黑猪肌细胞生成素基因部分序列的扩增

肌细胞生成素在肌细胞的分化过程中起着关键的正向调节作用。根据猪的肌细胞生成素的基因序列设计特异性的扩增引物,以山西黑猪为研究对象,通过PCR扩增,获得长度为1 493 bp的序列,经测序和基因的同源性比对得出山西黑猪的基因序列与家猪等动物有较高的同源性。结果表明:肌细胞生成素基因可能在山西黑猪肌肉组织发育过程中发挥重要的调控作用。为今后改良黑猪的肌肉品质奠定理论基础。     

紫杉醇-姜黄素介孔SiO_2/脂质复合递药系统体外释药研究

为了考察自制紫杉醇-姜黄素介孔SiO_2/脂质复合递药系统的体外释药行为,建立高效液相色谱法同时检测紫杉醇-姜黄素浓度;筛选适当增溶剂增加紫杉醇-姜黄素溶解度;反透析法考察各药物组的体外释药行为,绘制紫杉醇-姜黄素累积释药曲线并进行释药模型拟合。结果显示,不同药物组中紫杉醇-姜黄素释药行为表现出一定差异性,两种药物单药组累积释药量均高于混合组,自制递药系统累积释药量均高于裸药组。但紫杉醇不同递药系统组累积释药量由高到低分别为:MSNs>PLMSNs>LMSNs,姜黄素不同递药系统组累积释药量由高到低分别为:LMSNs>PLMSNs>MSNs。此外,PLMSNs组中紫杉醇-姜黄素释药行为均符合Hixon-Crowell释药模型。     

高含固率木质纤维素厌氧发酵物总DNA的4种提取方法比较

不同的样本特性和提取方法对获得微生物总DNA的质量有重要影响。文章基于高含固率木质纤维素厌氧发酵物腐殖酸、酚类物质含量高、质地均一性差、微生物浓度低的特点,研究了4种方法提取不同高含固率粪秸厌氧发酵物中微生物总DNA的效果。结果表明,常规的十二烷基磺酸钠法(sodium dodecyl sulfate,SDS)、十二烷基磺酸钠和溴化十六烷基三甲铵结合法(sodium dodecyl sulfate and cetyltrimethyl ammonium bromide,SDS-CTAB)和商业的粪便试剂盒法提取的DNA质量均较差,SDS法和试剂盒法未能获得聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增目的条带,SDS-CTAB法得到的条带较模糊;改进SDS-CTAB法获得的DNA杂质少、纯度高,具有较好的稳定性,A260/A280和A260/A230值分别为1.74~1.86和1.65~1.86,每克样品的DNA浓度在50 ng·μL^-1以上,电泳条带单一齐整、清晰明亮,PCR扩增的目的条带清晰度高,适宜后续分子生物学技术的分析。林格氏液洗脱、聚乙烯吡咯烷酮-40(Polyvinyl Pyrrolidone-40,PVP-40)洗涤液除杂以及裂解液和多种酶联合破壁是改进SDS-CTAB法获得该类专一性样本高质量微生物总DNA的关键步骤。     

水泥药浴池的修造方法

羊养殖业中药浴必不可少,主要介绍了水泥药浴池的修造方法,包括地点选择及各功能块的修建。     

十足目虹彩病毒(DIV1)环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用

本研究以十足目虹彩病毒(Decapod iridescent virus 1, DIV1)主要衣壳蛋白基因为靶序列设计引物，建立了DIV1的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测方法，并以pMD18-DIV1质粒标准品为模板对该方法的检测灵敏度、检测特异性等进行了评估。结果显示，此方法最适反应温度为64.4℃，优化后的25 μl反应体系中包含2.5 μl 10×Isothermal amplification buffer、4.0 mmol/L Mg2+、1.2 mmol/L dNTPs、6.4 U Bst 2.0 WarmStart® DNA聚合酶、0.8 μmol/L EvaGreen®和4.4 μl ddH2O。该方法检测灵敏度下限为3.54×102拷贝/反应；与虾肝肠胞虫(EHP)、致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)、对虾偷死野田村病毒(CMNV)、传染性皮下及造血组织坏死病病毒(IHHNV)、白斑综合征病毒(WSSV)、桃拉综合征病毒(TSV)和黄头病毒(YHV)等主要虾类病原没有交叉反应；具有较好的重复性和稳定性。以GeneFinder®替换EvaGreen®并将其预置于反应管内，结合上述扩增方法可实现对DIV1的现场快速高灵敏检测。本研究建立的DIV1-LAMP实时荧光定量和现场检测方法具有灵敏、特异和快速等特点，为近几年新发虾类病原DIV1的定性、定量以及现场快速检测提供了新的技术选择，有利于对虾养殖业中开展DIV1的监测、预警和防控。     

响应面法优化仙茅多糖酶解工艺及体外免疫活性

采用葡聚糖酶对仙茅多糖XMP-1进行酶解,并利用响应面法对酶解工艺进行合理优化。在单因素试验的基础上,采用星点设计模拟葡聚糖酶酶添加量、酶解温度、时间、pH值等4个因素对还原糖生成量综合影响的模型,得到最佳工艺条件,并验证模型的可靠性。通过小鼠巨噬细胞(RAW264.7)分析XMP-1 1～12 h酶解得到的12批产物的体外免疫活性。结果表明,最佳酶解工艺为酶添加量为56%,温度为52℃,酶解时间为12 h,pH值为6.0,此时还原糖生成量为0.201 0 mg/mL。优化结果可靠,与预测值的相对误差小于5%。不同时间段酶解产物对细胞无明显毒害作用,均能诱导RAW264.7细胞活化,释放TNF-α和NO,其中酶解5 h的效果最好。该研究可为仙茅多糖酶降解片段的制备提供理论基础,也可为仙茅多糖在食品领域进一步开发和应用提供科学依据。     

噁喹酸在健康和染病石斑鱼体内代谢规律比较

建立石斑鱼哈维氏弧菌人工感染模型,比较噁喹酸在健康和感染石斑鱼体内的药代动力学特征,结果显示,哈维氏弧菌腹腔注射感染对石斑鱼的半致死量(LD₅₀)为1.2×10⁵ g^-1鱼体重,在20 mg·kg^-1肌肉注射给药剂量下血药达峰时间从健康时的0.5 h延迟为感染时的1.0 h,达峰浓度从15.58 mg·L^-1降低为11.32 mg·L^-1,消除半衰期从26.451 h延长为55.247 h,血药浓度时间曲线下面积从351.625 mg·h^-1·L^-1减小为336.470 mg·h^-1·L^-1,这些结果表明感染哈维氏弧菌影响了石斑鱼对噁喹酸的吸收与代谢。11株哈维氏弧菌对噁喹酸的体外药敏实验结果显示,最低抑菌浓度(MIC)为0.5~2.0 mol·L^-1,表明哈维氏弧菌对噁喹酸的敏感性存在一定差异,但整体而言其MIC较低。药动学和体外药效试验结果表明,石斑鱼在哈维氏弧菌感染情况下采用20 mg·kg^-1体质量噁喹酸给药剂量其C_max/MIC>8,可达到较有效的治疗效果。     

仔猪溶血性葡萄球菌的分离鉴定及体外抑菌试验分析

剖解南昌某猪场死亡仔猪,呈现心肌炎、关节炎等症状,从其内脏分离得到病原菌ZGP-1、ZGP-2、ZGP-3。经过生化试验,分离菌鉴定为金黄色葡萄球菌;通过药敏试验,发现分离菌对头孢曲松、头孢唑啉高度敏感,对链霉素、甲氧嘧啶、强力霉素、乙酰螺旋霉素等完全耐药;通过体外抑菌试验,可知乳酸菌对分离菌ZGP-3有明显的抑制作用。临床可采用头孢曲松或头孢唑啉配合乳酸菌进行治疗,以缓解滥用抗生素所导致的耐药性问题。