三角褐指藻crtiso基因克隆与表达调控研究

为探索三角褐指藻岩藻黄素的生物合成与crtiso基因表达调控的关系,本研究通过转录组测序获得了三角褐指藻crtiso基因cDNA全长序列,并研究了乙酰水杨酸(ASA)、花生四烯酸(AA)、甲基茉莉酸(MeJA)和硫酸铈铵(ACS)4种诱导子不同浓度处理对三角褐指藻crtiso基因表达的影响。结果表明,三角褐指藻crtiso cDNA全长2 116 bp,开放阅读框(ORF)1 902 bp,编码635个氨基酸。crtiso蛋白为亲水性不稳定蛋白,相对分子质量67 803.00 Mr,理论等电点7.14,蛋白质二级结构中的主要构成元件是α螺旋、β折叠和无规则卷曲,并存在保守区域和结构域。系统进化树分析表明,三角褐指藻crtiso蛋白与海虹束毛藻亲缘关系较近。诱导子表达结果表明,ASA、AA、MeJA和ACS均能显著提高三角褐指藻crtiso基因的表达水平,当ASA、AA、MeJA和ACS质量浓度分别为10 mg·L~(-1)、0.1 mg·L~(-1)、50μmol·L~(-1)和0.2 mg·L~(-1)时,三角褐指藻crtiso基因表达量最高。相关性分析表明,三角褐指藻crtiso基因表达量与岩藻黄素含量呈线性关系,表明三角褐指藻岩藻黄素的生物合成是通过调控crtiso基因的表达来实现的,本试验结果为进一步研究岩藻黄素的合成代谢提供了重要的依据。     

琼胶寡糖诱导坛紫菜活性氧爆发

研究了琼胶寡糖诱导坛紫菜氧爆发的响应及其活性氧产生的位点。用琼胶寡糖诱导坛紫菜,以微呼吸测量系统检测坛紫菜氧消耗的变化;以对羟基苯乙酸(POHPAA)化学发光法检测坛紫菜的H2O2释放量;利用DCFH-DA染色观察活性氧在细胞上的定位;并利用实时定量PCR检测坛紫菜NADPH氧化酶基因Phrboh的差异表达;通过2-AMAC标记琼胶寡糖,观察其在坛紫菜的结合部位。结果显示,100μg/mL琼胶寡糖处理坛紫菜,出现两次呼吸爆发,分别在4min和10min左右,强度分别是基础呼吸的4倍和14.1倍;5min内出现H2O2的积累,15min达到峰值,比对照组高出近10倍。10μmol/LDPI可部分抑制H2O2的产生。3min内Phrboh的表达已上调,并持续近10min。DCFH-DA染色显示,活性氧主要产生在膜系统上。荧光标记琼胶寡糖的定位发现,坛紫菜细胞膜上存在琼胶寡糖的结合位点。综上所述,琼胶寡糖能识别细胞膜上的结合位点,并诱导坛紫菜膜系统上的H2O2爆发,H2O2的产生与NADPH氧化酶相关。     

褐藻酸降解茵诱发海带病烂的组织细胞学观察

用褐藻酸降解菌对海带进行人为感染,经培养使其产生烂斑,通过组织显微切片观察表明1、褐藻酸降解菌首先侵入内皮层,然后再逐渐侵入到外皮层、髓部和表皮,最终导致海带病烂.2、感染后内皮层伤害最重,其次是外皮层和髓部,表皮的伤害最轻.3、浸染海带内皮层的细胞中,有大量颗粒状储藏物质,其直径范围在1.5～4.0μm之间,平均直径为2.7 μm.形状为椭圆或圆形.     

温度对花鲈饥饿代谢的影响

用自制的密闭流水式呼吸仪,测定了温度对饥饿花鲈((Lateolabrax japonicus)的排氨率和耗氧率的影响.实验采用当年花鲈60尾,体质量(221.7±17.4)g.在10℃、15℃、20℃、25℃和30℃温度下,分析了其排氨率和耗氧率的变化规律,并通过氨商(AQ)分别探讨了蛋白质供能比例及内源氮排泄(ENE).结果认为,(1)排氨率和耗氧率均随温度的升高而升高,经Duncan法多重比较,两两温度之间差异显著(P<0.05);(2)高温30℃时的排氨率是低温10℃时的近9倍,内源氮排泄(ENE)占体蛋白质含氮量的比例也由10℃时的0.06%上升至30℃时的0.55%,表明蛋白质供能的绝对值随温度升高增加了9倍,而耗氧率增加了4.5倍,氨商(AQ)仅提高了近1倍,参与供能的蛋白质占能量底物的比例由11.84%上升至23.00%.因此,饥饿花鲈的能量消耗主要是由脂肪和碳水化合物提供;(3)Q10值的变化证明花鲈的排氨率比耗氧率对温度具有更高的敏感性,20～25℃时,Q10最小,印证了此温度为花鲈的最适生长温度.[中国水产科学,2008,15(3):500-505]     

琼胶寡糖诱导菜豆活性氧相关防御及机理初探

以琼胶寡糖作为激发子处理菜豆叶片,研究其诱导菜豆的抗性反应及作用机理.结果表明,100μg·mL-1的琼胶寡糖处理菜豆叶片下表皮,会促进菜豆叶片下表皮保卫细胞释放H2O2和气孔关闭.同时100μg·mL-1的琼胶寡糖喷施菜豆植株,能显著提高脂氧合酶(LOX)活性(P＜0.05),在3h达最高,并检测到具有抑菌作用的挥发性物质2,3-butanedione、2-methyl-butanoic acid、1-octen-3-ol和junipene含量增加.综上所述,100μ.g·mL-1的琼胶寡糖激发菜豆产生活性氧,并产生抗菌物质,进而增强其防御抗性.     

产纤维素酶海洋细菌的筛选鉴定和产酶条件优化

从宁波洋沙山海域采集样品,通过刚果红染色法共筛选到23株具有纤维素分解能力的菌株。根据复筛结果,选择其中一株高产碱性纤维素酶的海洋细菌MB117进行深入研究。经16S rDNA鉴定,MB117为交替假单胞菌属（Pseudoalteromonas sp.）细菌。发酵条件研究结果表明,MB117菌株培养的最适pH为7.0,1%接种量和10%装液量最利于产酶,低温有助于菌体生长和产酶。酶学性质研究结果表明,酶反应的最适pH为9.0,pH 7.0~10.0范围内酶活力均可保持在85%以上;MB117菌株CMCase不耐高温,酶最适反应温度为40 ℃。     

东海岱衢族大黄鱼资源变动的原因探析及重建策略

东海岱衢族大黄鱼历史上曾是我国近海特有的最重要底层经济鱼类之一,但现在是我国着力恢复与重建的重要对象.为阐明大黄鱼资源变动及其衰退的影响因素,揭示大黄鱼对栖息地的选择性及其资源难以恢复的原因,本研究以1950—2020年浙江省大黄鱼捕捞产量为样本,运用指标分析法,分析岱衢族大黄鱼资源种群数量变动与敲罟作业、围捕"中央渔...     

碳纤维索道技术在浅山丘陵区原生态大苗开发利用上的应用

城市化进程的快速推移,使得城市园林绿化工程的重要性日趋凸显。在城市园林工程施工中,苗木的重要性不言而喻。然而受到多种因素的影响,我国的苗木施工还存在这样那样的问题,严重影响到园林绿化工程最终的质量水平。因此本文在简要概述我国苗木生产现状的基础上,提出了碳纤维索道技术在苗木开发中的应用,仅供参考。     

丰水期长江感潮河口段网采浮游植物的分布与长期变化

于2009年6、8月对长江口门至江阴的河口段浮游植物进行了拖网采集,共检出浮游植物6门99属239种。其中:硅藻123种,甲藻19种,绿藻和蓝藻各42种,裸藻9种,黄藻4种。河口段网采浮游植物丰度以蓝藻占绝对优势,硅藻次之,两者合计在群落中的比例超过了95%。优势种也主要以蓝藻(水华鱼腥藻Anabaena flos-aquae、柔软腔球藻Coelosphaerium kuetzingiarum、微囊藻Microcystis spp.、颤藻Oscillatoria spp.和席藻Phorimidium spp.)构成,硅藻仅有2种(骨条藻Skeletonema spp.和颗粒直链藻Aulacoseira granulata)。口门内盐度均<0.5,群落基本以淡水类群为主,口门附近则以半咸水类群为主,海水类群主要位于口门外(盐度>13)。随着水温和营养盐水平的升高,8月浮游植物平均丰度(347.75×10⁴ 个/m³)明显高于6月(204.19×10⁴ 个/m³)。根据多维尺度和相似性分析,丰水期长江河口段浮游植物群落组成与分布存在显著(P<0.01)的时空差异。对比20世纪80年代以来的历史资料发现,长江口门内网采浮游植物丰度显著升高,且优势种也从硅藻(骨条藻、直链藻和圆筛藻)转变为蓝藻(颤藻、鱼腥藻和微囊藻)。     

坛紫菜自由丝状体响应琼胶寡糖的激发

为了研究琼胶寡糖对坛紫菜自由丝状体藻丝生长和壳孢子囊枝形成的激发的影响,实验采用琼胶寡糖激发坛紫菜自由丝状体,以液相氧电极检测坛紫菜丝状体净光合放氧速率的变化;以对羟基苯乙酸(POHPAA)化学发光法检测坛紫菜丝状体的H_2O_2释放量;利用LC-MS检测红藻糖苷含量变化;利用实时定量PCR技术检测坛紫菜丝状体H_2O_2产生相关基因(Phrboh、Ph SOD)和红藻糖苷合成相关基因(Phnho1、Phgpdh、Phtps)的表达情况;并利用显微镜观察法检测壳孢子囊枝数量的变化。结果发现,琼胶寡糖能够激发坛紫菜自由丝状体的系列响应,表现在净光合放氧速率以及光合同化产物红藻糖苷的含量和生物合成出现增加;H_2O_2释放量持续增加,与产生H_2O_2相关的2个酶基因Phrboh和Ph SOD的表达增强。此外,琼胶寡糖也能够促进在坛紫菜自由丝状体的发育,在培养第30天时,琼胶寡糖处理组的壳孢子囊枝形成率达到59%,显著高于对照组46%。综上所述,琼胶寡糖能够增加坛紫菜自由丝状体的光合速率和光合同化产物,并通过形成H_2O_2的酶的表达来诱导活性氧的释放;琼胶寡糖还能促进坛紫菜自由丝状体的繁殖发育。