福氏志贺菌外输调节蛋白基因marA的原核表达载体构建及其鉴定

目的构建志贺菌外输调节蛋白基因marA的原核表达载体并对其表达的蛋白进行鉴定。方法采用PCR从志贺菌基因组DNA中扩增得到志贺菌外输调节蛋白基因marA,并将其定向克隆到原核表达载体pET-30a,构建原核表达重组质粒pET-30a-marA,重组子经限制性内切酶分析、PCR及测序鉴定后,转化宿主菌BL21,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果经鉴定证实原核表达载体pET-30a-marA构建成功,且在大肠杆菌BL21中获得了MarA与His的融合表达,且表达蛋白产物的分子质量大小与预期值一致,并可被特异性抗体所识别。结论MarA在大肠杆菌中获得了高效的表达,为进一步研究其免疫学特性和功能奠定了基础。     

“板黄口服液”对肉牛支原体肺炎治疗效果

[目的]为了减轻支原体肺炎对肉牛的危害,寻找最佳的治疗方案。[方法]:我们采用"板蓝口服液"对80头有严重感染的西门培尔牛分了组进行治疗试验:第一组为10头空白对照,第二组10头采用板黄口服液按0.4mL/kg体重给药,每日2次连用7d,第三组60头采用阿其霉素0.25×5支,地米10mg,生理盐水250mL,结果表明:第二组治疗有效的90%治愈率80%,第三组80%治愈率70%,第一组自愈率是70%,死亡率是20%,差异显著(p0.01)。[结论]板黄口若悬河服液对支原体引起的肺炎有良好效果。     

中兽药──研究开发的现状与展望

本文从中兽药的数量、剂型、质量标准、重 视程度、产业状态、产品结构、规模、技术含量、技术路线及 软件等作了现状分析。同时又从有效成分、方剂配伍、制 剂、新技术、质量标准、计算机技术、现代化、科学化、开发 研究机制及法规等方面作了展望。     

动物源性中药材兽药残留检测技术研究进展

［］动物源性中药材兽药残留问题是影响动物源性中药材质量安全的主要风险因子之一,服用含有兽药残留的动物源性中药材,不但会降低药效,而且会使人体产生过敏反应和抗生素耐药性等,甚至损害人体器官。加强动物源性中药材兽药残留检测,从源头进行质量控制,使动物源性中药材兽药残留早发现、早预警、早处置,使监管前移,做好风险预测与研判,是当前动物源性中药材质量控制急需解决的问题。本文从动物源性中药材兽药残留检测现状、检测方法研究思路和基质效应评价等方面探讨了兽药残留高通量检测技术的研究与应用,以期为加强动物源性中药材兽药残留高通量检测研究与质量安全控制提供参考。     

阿司匹林丁香酚酯对体外脂多糖诱导小鼠巨噬细胞炎症反应的抑制效应

本文旨在研究阿司匹林丁香酚酯（aspirin eugenol ester，AEE）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导小鼠巨噬细胞（RAW264.7细胞）炎症反应的抑制作用及其潜在作用机制。LPS刺激RAW264.7细胞诱导其炎症模型，细胞分为对照组、LPS组、阿司匹林组（aspirin，Asp，150 μmol·L^-1）、丁香酚组（eugenol，Eug，150 μmol·L^-1）、AEE低（75 μmol·L^-1）、中（150 μmol·L^-1）、高剂量（300 μmol·L^-1）组。CCK-8法检测AEE对小鼠巨噬细胞RAW264.7的细胞毒性；ELISA法检测各组细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α炎症因子的含量变化；RT-PCR法检测细胞中花生四烯酸（arachidonic acid，AA）代谢通路关键酶PLA2、COX-2、COX-1、CYP450和5-LOX的mRNA表达量；分子对接研究Asp、Eug、AEE与AA代谢通路关键酶的相互作用。结果表明：1） CCK-8结果显示，AEE浓度在0~350 μmol·L^-1时，对细胞无毒性；2） ELISA结果表明，与空白对照组比较，LPS组炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达极显著升高（P<0.01）；经不同剂量的AEE处理能极显著降低炎症因子IL-1β、IL-8、TNF-α表达水平（P<0.01）；在炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8中，与Asp和Eug组比较，等摩尔的AEE与其差别不显著（P>0.05），表明其抗炎效果相似；不同剂量的AEE在炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8之间差异不显著（P>0.05）；3） RT-PCR结果表明，与空白对照组比较，LPS组中AA代谢通路关键酶表达极显著升高（P<0.01）；经不同剂量的AEE处理能显著降低AA代谢通路关键酶的mRNA表达量（P<0.05）；与Asp和Eug组比较，等摩尔量的AEE能够显著降低AA代谢通路关键酶PLA2的表达量（P<0.05）；不同剂量的AEE在COX-1、COX-2、5-LOX和CYP450关键酶表达量之间差异不显著（P>0.05）；4）分子对接结果显示，AEE与靶蛋白的结合能均低于-20.9 kJ，表明AEE与靶蛋白结合稳定且质量高，且AEE能够与PLA2、COX-2、COX-1、CYP450和5-LOX之间形成氢键。综上，AEE能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应，并且与前体化合物Asp和Eug抗炎作用相似，其可能通过AA代谢通路发挥抗炎作用。     

菊苣酸调节免疫系统作用机制的研究进展

菊苣酸又称二咖啡酒石酸，是一种咖啡酸衍生物，对免疫系统具有重要的调节作用，可以增强机体免疫、促进固有免疫和适应性免疫、提高免疫细胞功能、调控细胞因子与抗体、调节免疫器官生长发育。文章主要综述了菊苣酸调节免疫系统的作用机制，以期为菊苣酸在兽医临床免疫方面的开发与应用提供参考。     

液相色谱-串联质谱法检测猪血浆中除虫脲的方法学研究

【目的】考察口服灭蝇蛆药除虫脲（diflubenzuron，DFB）预混剂灌服给药后，在猪体内的药代动力学特征，建立猪血浆中除虫脲浓度的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测方法。【方法】以除虫脲-¹³C₆（DFB-¹³C₆）为内标，血浆样品经甲醇沉淀蛋白，离心后取上清液减压浓缩至干，甲醇-水（1∶1）复溶后进行分析。色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18柱；流动相为甲醇-0.1%甲酸水（含5 mmol/L甲酸铵），进行梯度洗脱；流速为0.4 mL/min；柱温为35 ℃；进样量为10 μL。电喷雾离子源，正离子模式，多离子反应监测模式检测，DFB及内标的定量离子对分别为m/z 311.1→158.1和m/z 317.1→158.1。对色谱和质谱条件优化后，考察该方法的专属性、定量下限、基质效应、线性范围、准确度、精密度和样品稳定性等。【结果】所建立的方法灵敏度高，检测限为0.5 ng/mL，定量限为1 ng/mL；基质效应对样品的检测影响较小；标准溶液在1~1 000 ng/mL的浓度范围内，线性关系良好（R²≥0.998）；在定量下限1 ng/mL及低（2 ng/mL）、中（100 ng/mL）、高浓度（800 ng/mL）的添加水平下，平均准确度在97.78%~115.06%之间，批内、批间变异系数均<10%，符合方法学要求。在考察的条件下，标准溶液、空白血浆加标样品及处理后的样品，稳定性良好；但应避免样品的反复冻融。【结论】建立的LC-MS/MS检测方法简便、专属性强、灵敏度高、准确可靠，可用于猪血浆中除虫脲浓度的检测，进而应用于除虫脲预混剂在猪体内的药代动力学研究。     

阿司匹林丁香酚酯对肝脏主要药物代谢酶活性的影响

采用SD大鼠和C57小鼠研究阿司匹林丁香酚酯(AEE)对肝脏主要药物代谢酶活性的影响。首先把研磨的AEE混悬在0.5%羧甲基纤维素钠溶液中，配制成20 g/L的AEE混悬液。将SD大鼠随机分为2组，试验组每日灌喂1次AEE(54 mg/kg),空白对照组每日灌喂1次等量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液。连续3周后随机处死一半，取其肝脏，制备肝匀浆液；剩余一半的SD大鼠，停药2周处死，取其肝脏，制备肝匀浆液。采用ELISA考察AEE对肝脏细胞色素P450酶(cytochrome P450,CYP450)的影响。研究AEE对C57小鼠肝脏主要药物代谢酶活性的影响，方法同SD大鼠方法。结果显示，SD大鼠连续灌药3周后，AEE对CYP3A4、CYP2C19、CYP1A2的活性有一定的抑制作用(P<0.05),对CYP2C8的活性有一定的诱导作用(P<0.05);CYP2D6、CYP2C9无显著性差异(P>0.05);停药2周后，发现只有CYP2C19的活性没有恢复，而其余药酶活性都有一定的恢复，与正常组无显著性差异(P>0.05)。C57小鼠连续灌药3周后，AEE对CYP3...     

炎症与疾病关系研究进展

炎症反应是机体应对有害刺激的一种防御性反应，但过度和持续性炎症反应严重影响机体的健康。过度的炎症反应又称炎症风暴，炎症因子的过度释放可对机体造成严重损伤。持续性炎症反应引发组织功能持续性失调，进而转变成慢性病。炎症反应的发生一般包括诱导物、模式识别受体、炎症介质和目标组织，它们在炎症途径中发挥不同作用，其中诱导物是导致炎症发生的主要原因。诱导物分为外源性和内源性两种，避免机体与诱导物的接触可减少炎症的发生，故保持外界环境洁净、稳定及机体自身健康显得尤为重要。近年来，随着对炎症相关研究的深入，陆续发现并阐明了炎症与疾病之间的关系，炎症在疾病的发生发展中的作用逐渐受到人们的重视。对炎症与不同疾病之间的关系及其作用机制进行综述，可为炎症引起的相关疾病防治和药物研发提供参考。