肉鸭慢性氟中毒的诊治

慢性氟中毒病是广泛流行的一种人畜共患的中毒病,是因为长期连续摄入超过安全限量的无机氟化物引起的一种全身性疾病,尤以骨骼、牙齿受损明显。该病主要包括饮水型氟中毒和饲料型氟中毒两种,常呈地方性群发,世界各国及我国大多数地区均有本病,各种畜禽均可发生,猪、牛和鸡慢性氟中毒报道较多,但是鸭群慢性氟中毒的报道不多。实际上,鸭对氟的敏感性高于鸡,肉雏鸭更高。2005年春季,山东省昌邑县某鸭场群发本病,因其呈群发性,危害较大。现将其调查诊断报告如下。1发病情况该鸭场有后备鸭樱桃谷肉种鸭6000余羽,15周龄,已经限饲2个月左右,每天发病30余羽,发病率为0.3%~0.5%。成年母鸭每天给料量为120g左右,发病最多,且病情严重,公鸭发病较轻。2临床症状和病理剖检病鸭精神沉郁,食欲减退,经常落后于大群,羽毛粗乱无光,部分易折断和脱落,身体瘦弱,站立不稳;跛行,病鸭胫骨轻微变粗,稍有变软,腕关节肿大,触之坚硬,以鸭璞前半部分着地,后半部分抬起,以两翼翼尖辅助维持身体平衡,不愿行动,喜卧,不愿吃料,饮水减少。严重病鸭卧地不起,死亡。剖检内脏无特征性变化,表现为肝脏发育不良,边缘薄锐,表面有少许针尖大灰白色坏死点。小肠呈现中度弥漫...     

包被蛋氨酸对低蛋白质日粮饲养的奶牛泌乳性能、养分消化及瘤胃发酵的影响

文章旨在评估包被蛋氨酸对低蛋白质日粮奶牛泌乳性能、养分消化、血清生化及瘤胃发酵性能的影响。试验将体重为（634±38）kg、泌乳量为40 kg的20头荷斯坦奶牛随机分为2组,每组5个重复,每个重复2头奶牛。对照组奶牛饲喂低蛋白的基础全混合日粮,处理组奶牛饲喂低蛋白的基础全混合日粮+0.4 g/kg包被蛋氨酸。结果：对照组与处理组对奶牛采食量、泌乳量、4%脂肪校正乳及脂肪、蛋白质和乳糖产量的影响无显著差异（P＞0.05）,同时两组奶牛乳中蛋白质和乳糖成分也无显著差异（P＞0.05）。处理组奶牛的乳尿素氮产量、乳中脂肪和尿素氮含量较对照组分别显著提高7.43%、3.87%和4.32%（P＜0.05）。低蛋白质日粮添加包被蛋氨酸对奶牛养分表观消化率无显著影响（P＞0.05）。与对照组相比,处理组奶牛血清尿素氮浓度及瘤胃氨氮浓度分别显著提高8.45%和18.56%（P＜0.05）,但血清谷氨酰转肽酶活性及瘤胃pH和异戊酸浓度分别显著降低16.28%、2.38%和32.35%（P＜0.05）。结论：低蛋白质日粮补充0.4 g/kg包被蛋氨酸对奶牛泌乳量、采食量和养分消化均无负面影响,但可改善乳脂肪和尿素氮含量,降低瘤胃pH。 [关键词]包被蛋氨酸|低蛋白|奶牛|泌乳性能|养分消化|瘤胃发酵     

基于MAGIC群体的水稻镉含量全基因组关联分析

【目的】基于水稻MAGIC-Hei(Multi-parent advanced generation inter-cross)群体,在多环境下挖掘镉含量相关新位点/基因,并筛选含有低镉等位基因的优良株系,为选育低镉积累品种提供新的基因和种质资源。【方法】将由8个亲本衍生的MAGIC群体分别于2017、2018、2019和2020年度种植于湖南长沙并开展稻米镉含量表型测试分析。利用GBS(genotyping by sequencing)简化基因组测序获得基因型数据,对稻米镉含量开展全基因组关联分析(genome-wide association analysis,GWAS),发掘QTL位点,解析其遗传机制。【结果】检测到了14个镉积累相关的QTL位点,除了第8染色体之外,其他11条染色体上均有分布。其中6个位点与已报道基因一致,8个为新发现位点。另外,这8个位点分布在第2、4、7、9和12染色体上,均可以在两个及以上环境中检测到,效应较为稳定,可用于下一步精细定位及功能研究。结合基因注释和基因表达分析结果,推测LOC_Os02g37160、LOC_Os02g49560、LOC_Os04g39010和LOC_Os06g46310为镉含量相关位点候选基因,这些基因与重金属转运和积累等功能相关。另外,我们筛选到10个携带有利等位基因的优良株系,可用于低镉积累水稻材料的创制。【结论】发掘了8个水稻镉积累相关性状的QTL位点和低镉优异材料,对于镉积累相关遗传研究和利用分子标记辅助选育低镉积累品种具有一定意义。     

四环素类药物对鲤细胞色素P450酶系生化指标的影响

为研究四环素类药物对鲤P450酶系生化指标的影响,采用超速离心法制得鲤肝微粒体,Bradford法测定肝微粒体蛋白含量,紫外分光光度法测CYP450酶系的活性,测定了土霉素(OTC)、四环素(TC)、霉素(CTC)、多西环素(DOTC)4种四环素类药物对鲤的肝微粒体蛋白含量、肝脏细胞色素P450含量以及酶系活性的影响。结果表明,空白对照组CYP450含量为(0.39±0.03)nmol/mg,OTC、TC、CTC、DOTC处理组CYP450含量分别为(0.22±0.02)、(0.28±0.02)、(0.21±0.03)、(0.25±0.03)nmol/mg;空白对照组氨基比林-N-脱甲基酶(AND)活性为(1.27±0.09)nmol/(min·mg),OTC、TC、CTC、DOTC处理组其活性分别为(0.86±0.09)、(0.79±0.05)、(0.84±0.05)、(0.86±0.06)nmol/(min·mg);空白对照组红霉素-N-脱甲基酶(ERND)活性为(0.85±0.04)nmol/(min·mg),OTC、TC、CTC、DOTC处理组其活性分别为(0.63±0.03)、(0.57±0.02)、(0.49±0.04)、(0.52±0.02)nmol/(min·mg);空白对照组苯胺-4-羟化酶(AH)活性为(0.034±0.001)nmol/(min·mg),OTC、TC、CTC、DOTC处理组其活性分别为(0.026±0.004)、(0.027±0.003)、(0.025±0.004)、(0.028±0.004)nmol/(min·mg)。综上,四环素类药OTC、TC、CTC、DOTC处理会使鲤CYP450含量明显降低,对AND、ERND活性具有明显的抑制作用,经统计学检验,差异极显著(P0.01);对鲤肝微粒体蛋白和CYPb5的含量没有影响。     

通过生育期基因型选择避免稻瘟病抗性与结实率的遗传累赘

利用重组自交系研究表明,在水稻第6染色体短臂上稻瘟病抗性基因Pi25(t)与控制结实率和每穗实粒数的QTL之间存在遗传累赘。为了验证这种关系,采用了更大的遗传群体进行分析,结果表明稻瘟病抗性与结实率存在遗传累赘,但未检测到稻瘟病抗性与每穗实粒数存在遗传累赘。通过对第7染色体长臂RM2-RM214区间抽穗期基因（qHD 7）型背景进行选择,可以打破或避免稻瘟病抗性与结实率的遗传累赘。为了进一步验证这种关系,选择Pi25(t)区间基因型不同、RM2-RM214区间基因型相同、其他染色体区间基本一致的两个株系发展新群体进行分析,除第6染色体的结实率QTL可以分解成2个效应较小的QTL（qSF 6 1和qSF 6 2）外,当第7染色体RM2-RM214区间基因型为中156背景时,Pi25(t)与结实率QTL（qSF 6 2）存在遗传累赘,且qSF 6 2来自父本谷梅2号的等位基因起减效作用;当第7染色体RM2-RM214区间基因型为谷梅2号背景时,第6染色体上没有检测到结实率QTL。上述结果说明在特定育种材料中对抽穗期基因进行选择可以成功打破或避免稻瘟病抗性与结实率的遗传累赘,为水稻以及其他作物的高产抗病育种提供了一种新途径。     

应用剩余杂合体衍生的近等基因系定位水稻株高QTL

为挖掘有育种利用价值的水稻株高新基因,以来源于‘Katy’/‘湘743’且在第1染色体RM11383-RM1198区间杂合的一个剩余杂合体RHL1030 (F₁₀)为材料,遗传分析RHL1030衍生群体,显示在该区间鉴定到控制株高QTL,增效等位基因来自于‘湘743’。应用SSR标记检测,从RHL1030衍生群体筛选杂合区间分别为RM3411-RM11782和RM6703-RM1198的两个单株,自交一代形成2个F₂群体,验证并界定株高QTL在RM6703-RM1198区间。从RM6703-RM1198区间分离群体筛选RM6703-RM8085区间杂合的3个单株和RM5389-RM1198区间杂合的1个单株,自交一代形成4个F₂群体,从群体中分别筛选母本纯合型、父本纯合型和杂合型单株各40株构成近等基因系进行方差分析,最终界定株高QTL在RM11782-RM5389区间,物理位置34.17M~35.73 Mb。本研究定位到一个新的控制株高QTL,为改良水稻株型提供资源。     

马疱疹病毒8型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

为了建立一种能够快速检测马疱疹病毒8型(EHV-8)的方法，本试验以EHV-8的全基因组序列为模板，针对糖蛋白B(gB)基因的保守序列，进行对比分析，设计EHV-8的特异性引物和探针，优化反应条件，建立EHV-8 TaqMan实时荧光定量PCR检测方法，并对该方法的敏感性、特异性和重复性进行验证，使用该方法进行临床样本检测。结果显示，建立的EHV-8 TaqMan实时荧光定量PCR检测方法对EHV-8 DNA模板的最低检测限为1.1×10² copies/μL,敏感性高；EHV-8与EHV-1、EHV-4、马流产沙门氏菌和肠产毒性大肠杆菌均无交叉反应，特异性强；批内重复性试验和批间重复性试验均表明该方法重复性好。对132份临床样本的检测结果显示，阳性检出率为10.61%,基因测序正确。由此可见，本试验建立的EHV-8 TaqMan实时荧光定量PCR检测方法能够满足EHV-8的检测需求，且该方法敏感性高、特异性强、重复性好，为EHV-8的进一步研究提供了有效的辅助检测手段。     

水稻外卷叶突变体ocl1的鉴定及基因定位

【目的】适度卷叶可增强叶片的光合效率，提高水稻的产量，筛选和鉴定水稻卷叶突变体有助于解析水稻叶片形成的分子机制。【方法】利用280 GY钴60 γ射线对籼稻品种玉针香进行诱变处理，筛选出一个外卷叶突变体，暂命名为ocl1(outcurved leaf 1)。考查了突变体的表型特征和农艺性状，并利用ocl1突变体与02428杂交的F2群体定位目标基因，最后通过荧光定量PCR分析了卷叶相关基因的表达情况。【结果】从分蘖期到成熟期，突变体的叶片表现外卷和披垂；在农艺性状方面，突变体的结实率、千粒重和单株产量显著降低；叶片的显微观察结果表明，突变体的外卷叶表型主要是由于相邻维管束之间的泡状细胞变大引起的；遗传分析表明，ocl1的突变表型受一对隐性核基因控制，将OCL1基因定位在第6染色体上SSR标记RM19575与InDel标记ID02612之间，物理距离约为127 kb；定位区间内的测序结果表明，其中一个基因（LOC＿Os06g10600）的内含子-外显子连接处发生单碱基突变，导致异常剪接，进而引起氨基酸序列的改变。该基因编码同源异型域-亮氨酸拉链蛋白，与卷叶相关基因ROC8和URL1等位；...     

花生生化品质与芽期抗逆性的相关性研究

为了探究花生种子生化品质与胁迫处理下花生种子萌发能力的关系，对90个花生材料分别进行盐（0.12mol/L即0.7%NaCl）、碱（0.1 mol/L NaHCO3, pH 8.3）、干旱（15%PEG6000）、低温（2℃浸泡72 h）处理，对胁迫处理下的发芽指标与花生种子生化品质进行典型相关分析。研究发现：盐胁迫下油酸与活力指数是正相关关系，低温胁迫下油酸与发芽率是负相关系，油酸有利于盐胁迫下花生种子萌发，不利于低温胁迫下种子萌发；干旱胁迫下棕榈酸与发芽指数是正相关关系，棕榈酸有利于干旱胁迫下花生种子萌发；碱胁迫下维生素E与发芽指数的正相关关系，维生素E有利于碱胁迫下种子萌发。研究结果对于花生芽期抗逆育种、探讨花生芽期抗逆机制具有一定参考价值。     

猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及鉴定

[目的] 纯化猪塞尼卡谷病毒（Seneca Valley virus，SVV）SVV-CH-HB2016毒株，并制备其结构蛋白VP1、VP2和VP3的单克隆抗体。[方法] 以蔗糖密度梯度离心法纯化的SVV-CH-HB2016病毒颗粒作为抗原，免疫BALB/c小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行细胞融合。通过间接免疫荧光试验（IFA）结合间接ELISA筛选阳性细胞株，制备能特异性分泌针对结构蛋白的杂交瘤细胞株。采用Western blotting和IFA方法分别检测单克隆抗体与重组表达蛋白及天然结构蛋白的反应性，并对单克隆抗体的病毒中和保护效果进行测定。利用空斑试验和实时荧光定量PCR方法探究中和性单克隆抗体对SVV-CH-HB2016毒株吸附过程的影响，最后用抗体相加试验来分析14株单克隆抗体的抗原表位。[结果] 在蔗糖密度梯度为5%~45%（W/V）时获得了纯度较好、浓度较高的SVV-CH-HB2016毒株结构蛋白，免疫小鼠血清抗体效价均达到了1：12 800，成功制备了17株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经验证14株单克隆抗体能与重组结构蛋白发生Western blotting反应，17株单克隆抗体能与病毒发生IFA作用；2G6、4A3和4C11 3株单克隆抗体对SVV-CH-HB2016毒株感染的BHK-21细胞具有明显中和保护作用，也能有效抑制SVV-CH-HB2016毒株对293T细胞的吸附。经分析发现，除1F5与2E1、4B8与4F11外，其余10株单克隆抗体分别针对不同抗原表位。[结论] 本研究初步建立了SVV的纯化方法，制备了17株特异性针对SVV-CH-HB2016毒株的单克隆抗体，为后期进一步开展SVV全病毒灭活疫苗的研发、ELISA检测方法的建立及保护性抗原表位的鉴定奠定了基础。