海洋弗氏链霉菌HNM0089抗真菌活性成分研究

为了从海洋微生物中寻找农药先导化合物,本研究通过16S rRNA基因序列分析对具有抗真菌活性的海洋放线菌HNM0089的种属进行鉴定,并对其抗真菌的活性成分进行研究。结果表明:海洋放线菌HNM0089被鉴定为弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)。利用高分辨质谱、一维和二维核磁波谱技术,将其主要活性成分鉴定为星形孢菌素(Staurosporine)。该化合物对芒果炭疽病菌、水稻稻瘟病菌、香蕉枯萎病菌、薯蓣炭疽病菌和橡胶炭疽病菌均有抑制活性,具有开发成农用抗菌素的潜力。     

海洋放线菌Streptomyces sp. HNWSW-49的次生代谢产物研究

对1株具有抗芒果炭疽病菌活性的海口湾海泥来源放线菌Streptomyces sp.HNWSW-49发酵液的化学成分进行研究。采用多种色谱技术对化合物进行分离纯化,以波谱数据确定化合物的结构。从来源于海口湾海泥的放线菌Streptomyces sp.HNWSW-49发酵液的乙酸乙酯提取物中分离鉴定了7个含氮化合物,分别为:环-(苯丙-丙)二肽(1),环-(亮-甘)二肽(2),环-(苯丙-缬)二肽(3),环-(羟脯-苯丙)二肽(4),N-(2-苯基)乙酰胺(5),β-腺苷(6),和2-哌啶酮(7)。所有化合物均为首次从该放线菌中分离得到,其中化合物6为首次从微生物中分离得到。      

放线菌 A50 的鉴定及其对植物病原菌的抑制作用…

为筛选新的具有抑菌活性的放线菌,采用稀释平板法从深圳赤坳水库保护林地芒箕土壤中分离筛选得到1株放线菌A50,并对A50进行初步鉴定以及抑菌活性测定。根据形态学特征、生理生化特性和基于16SrDNA序列及系统发育分析等方面的研究结果 ,菌株A50鉴定为Streptomyceyes nodosus。采用对峙平板法测定A50的抑菌活性,结果表明,放线菌菌株A50对5种供试植物病原真菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,其中以对玉米小斑病(Bipolaris maydis)的抑菌效果最好,抑菌带宽度达1.5cm。A50发酵液原液浸泡处理花生白绢病菌核,处理后72h抑制率达68%,稀释20倍后仍有9%的抑制率。放线菌A50是一株具有良好开发应用前景的生防菌株。     

放线菌剂及其与有机肥配施对魔芋的促生作用

【目的】探索生防放线菌剂及其与有机肥配施对魔芋生长的影响。【方法】2012-2013年采用小区栽培试验,以放线菌剂D74、H为材料,设7个处理:CK0不施肥;M施有机肥;D74+M20施用有机肥稀释20倍的菌剂D74;D74H+M20施用有机肥稀释20倍的菌剂D74H(D74和H按1∶1质量比混合而成);H+M20、H+M40、H+M80分别施用有机肥稀释20,40,80倍的菌剂H,研究放线菌剂及其与有机肥配施对魔芋生物学特性、根系及产量的影响。【结果】(1)放线菌剂与有机肥配施对魔芋根系生长、生物量及光合性能有明显的促进效应。D74+M20处理魔芋根系总长、总表面积、总体积、根系条数及鲜质量的菌剂与有机肥配施效应分别为331.3%,294.4%,262.5%,7.0%及93.4%。2012年D74H+M20、H+M20处理魔芋株高的菌剂效应分别为34.8%和33.0%;叶片绿色度的菌剂效应分别为28.4%和24.7%;叶片净光合速率和气孔导度的菌剂效应分别为99.3%,114.2%和52.1%,62.7%,差异均显著(P0.05)。(2)菌剂与有机肥配施具有抗病虫、增产效果,亦能提高球茎的商品性能。2013年,除H+M40处理之外,其余放线菌剂与有机肥配施处理的魔芋健株率和病株率的菌剂效应分别为32.7%~83.6%和17.6%~47.1%。2012年,D74+M20和D74H+M20处理魔芋球茎产量的菌剂效应分别为31.0%和42.9%;单个球茎鲜质量的菌剂效应均为19.1%;魔芋总产量的菌剂效应分别为27.1%和36.8%;2013年,D74+M20和D74H+M20处理魔芋不同指标的菌剂与有机肥配施效应分别为:球茎总数52.3%和52.3%,健康球茎个数100.0%和111.8%,腐烂球茎所占比例34.2%和62.0%,虫伤球茎所占比例34.6%和12.4%,总产量146.3%和120.2%。【结论】放线菌剂及其与有机肥配施可显著促进魔芋根系的生长,提高魔芋叶片净光合速率、产量及球茎的商品性能。     

稀有放线菌的选择性分离、鉴定及生物活性研究

聚乳酸(PLA)和丝蛋白粉分别作为选择性碳、氮源可以有效提高稀有放线菌的分离效率,同时海洋环境中蕴藏着丰富的活性稀有放线菌,是发现新药的有效途径。为了筛选并鉴定海洋环境中产生活性物质的稀有放线菌,以聚乳酸和丝蛋白粉分别作为选择性碳、氮源,配制6种分离培养基,用平板稀释法分离放线菌;并用滤纸片法和MTT法对供测菌株发酵产物进行活性筛选。结果表明:共分离出96株稀有放线菌,分属于11个属;其中,80株菌对7种靶标菌显示出一定的抗菌活性;78株菌对肿瘤细胞具有不同程度的细胞毒活性。另外,比较了6种培养基对稀有放线菌的分离效果。从分离结果来看,最理想的是聚乳酸培养基。     

刺五加内生放线菌对马铃薯疮痂病菌拮抗作用初探

初步探究刺五加内生放线菌对马铃薯疮痂病菌的拮抗作用,采用平板纸片法检测265株刺五加内生放线菌发酵产物对马铃薯疮痂病菌的拮抗活性;运用PCR技术检测活性菌株次级代谢产物合成相关基因PKSⅠ、PKSⅡ、NRPS、Halo、CYP;利用BOX-PCR检测活性菌株,选取谱带差异较大菌株进行16SrRNA基因序列同源性分析。结果表明,56株(21.13%)内生放线菌具有不同程度的抗性,抑菌活性较好的菌株大部分都能检测到至少一种功能基因,活性菌株分布于3个亚目、4个科、4个属。可见,刺五加内生来源放线菌是筛选马铃薯疮痂病拮抗菌的重要来源,筛选所获得活性菌株为马铃薯疮痂病生防菌剂研究奠定良好基础。     

二甲戊灵对棉田土壤微生物的影响

以土壤微生物为研究对象,采用平板计数法分别对不同深度土壤细菌、真菌、放线菌数量进行统计,探究二甲戊灵处理后土壤微生物种群变化。结果表明,土壤深度为0~15 cm时,二甲戊灵对细菌、真菌、放线菌多为抑制作用,其中放线菌种群对表现的最为明显,呈持续抑制状态;细菌次之,呈阶段性抑制状态;而真菌对二甲戊灵具有一定抗性,随着时间的推移抑制和激活均不明显。土壤深度为15~20 cm时,二甲戊灵对3种微生物有不同程度激活作用。二甲戊灵对土壤微生物的影响随微生物种类和二甲戊灵浓度和土壤深度而异。正常使用浓度下,对微生物的影响是暂时的,其稳定系统不易破坏,但长期施用二甲戊灵会引起土壤微生物的失衡。     

黄河三角洲贝壳堤放线菌多样性及抑菌活性

研究旨在揭示黄河三角洲贝壳堤放线菌多样性,以便从中寻找新的具有生物防治功能的微生物资源。采用3种分离培养基,利用稀释平板涂布法对贝壳堤土壤样品进行分离;通过形态特征、生理生化实验及16S rDNA基因测序对放线菌进行了分类鉴定。结果表明分离到的174株放线菌分属于10个科,13个属,其中链霉菌属(42%)和拟诺卡氏菌(11%)为优势菌属。16S rDNA基因分析表明,61%的菌株与已知菌的相似性都在99%以下,其中菌株BK-17的16S rDNA序列与同源性最近的菌株相似率仅为95.2%。以2株细菌和5株植物病原真菌作为指示菌,进行了抑菌活性测定,有94株至少对1种指示菌有抑菌作用,有8株对7种指示菌都有很强的拮抗作用。以上研究结果表明黄河三角洲贝壳堤土壤中存在丰富的放线菌资源,存在很多潜在的新菌种和活性菌株,有进一步研究和开发的价值。     

青岛泊子盐场放线菌多样性及其功能酶的筛选

采用平板涂布法利用3种培养基从青岛即墨市田横镇泊子盐场盐池底泥样中共分离纯化出15株放线菌,对分离菌株进行16S rRNA基因测序分析。发现这15株放线菌分属于链霉菌属(Streptomyces)、拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)和1个新属,其中Streptomyces属为优势菌属;菌株CXB832与Nocardiopsis arabia DSM 45083T和Haloactinospora albus DSM 45015T最接近,同源性分别为95.4%和94.9%,根据其表型和分子特征可以初步判定该菌株为放线菌新属。培养基及培养温度对盐池环境中放线菌的分离效果均有影响,利用淀粉酪素培养基在37℃分离的放线菌种类和数量较多。在15株放线菌中,分别有12株、3株、2株和1株放线菌产淀粉酶、酯酶、蛋白酶和纤维素酶。     

葡萄霜霉病菌拮抗放线菌PY-1发酵条件优化

为探讨暗黑链霉菌Streptomyces atratus PY-1液体摇瓶发酵条件,提高其活性次级代谢产物的产量,以菌体生物量和发酵液抑制葡萄霜霉病菌Plasmopara viticola活性为指标,采用单因子试验和正交试验对菌株PY-1的最适发酵培养基成分及发酵条件进行优化。结果表明,菌株PY-1最适发酵培养基为玉米粉50 g/L、葡萄糖5 g/L、蛋白胨5 g/L、氯化铵5 g/L、氯化钠 0.5 g/L;最佳发酵培养条件为培养温度28 ℃、培养时间5 d、初始pH 7.0、250 mL三角瓶装液量90 mL、接种量体积分数5%、摇床转速180 r/min。在最佳发酵培养基和培养条件下,菌株PY-1发酵液抑菌率达到99.26%,抑菌能力提高8.35%。