三种单链特异性核酸酶检测桉树ESTP的酶切条件优化

单链特异性(SSS)核酸酶是基因组学研究的有效工具.本研究对绿豆芽核酸酶、S1和芹菜汁提取物三种SSS核酸酶检测桉树ESTP检测的酶切条件进行了优化,优化因子依次包括Mg2 浓度、酶切温度、酶用量和/或pH值等因子.三种酶的最适酶切温度均为60℃.绿豆芽核酸酶优化后的酶切反应体系为:10×Buffer(pn 5.56)1.0 μL(NaAc 300 mmol/L,Nacl 1.0 mol/L,ZnAc2 10 mmol/L,甘油50%,MgCl2 100 mmol/L),PCR产物5 μL,酶4.5 U,超纯水补至10 μL;S1的优化酶切体系为:10×Buffer(pH 5.46～3.67)1.0 μL(MgCl2100 mmol/L,ZnAc2 2 mmol/L,Bis-Tris 200 mmol/L,Triton X100 0.02%,BSA 0.002 mg/mL),PCR产物5 μL,S1酶5 U,超纯水补至10 μL;CJE的优化酶切体系为:10×Buffer(pH 7.5)1.0 μL(MgCl2 100 mmol/L,Hepes100 mmol/L,KCI 100 mmol/L,Triton X100 0.02%,BSA 0.002 mg/mL),PCR产物5.0 μL,CJE酶1.0 μL,超纯水3.0 μL.综合考虑酶切效果和成本,推荐S1为检测桉树ESTP的经济、有效的SSS核酸酶.     

外源酶对草鱼鱼种生长及饲料表观消化率的影响

[目的]探讨酶制剂在水产动物饲料中得到合理利用的途径。[方法]在饲料中添加木聚糖酶(01、503、00 mg/kg),N-蛋白酶(0、50、100 mg/kg)、淀粉酶(02、004、00 mg/kg)和纤维素酶(02、004、00 mg/kg)4种单体纯酶,并采用L9(34)正交设计法,将4种单体酶配制成复合酶制剂,研究外源酶制剂对草鱼鱼种的生长及饲料表观消化率的影响。[结果]4种单体酶对草鱼鱼种生长影响的主次顺序为木聚糖酶>淀粉酶>N-蛋白酶>纤维素酶;外源复合酶对饲料干物质和粗蛋白表观消化率有一定的影响,且影响力大小依次为木聚糖酶>纤维素酶>淀粉酶>N-蛋白酶。外源复合酶的适宜配方为:木聚糖酶300 mg/kg、淀粉酶200~400 mg/kg、N-蛋白酶0~50 mg/kg和纤维素酶0~200 mg/kg。[结论]饲料中添加外源复合酶可提高草鱼的特定生长率和增重率,提高草鱼对饲料的消化率。     

新郑灰枣基因组DNA提取方法比较

以新郑灰枣苗叶片为材料,采用CTAB方法提取叶片DNA,并对该方法进行改良。比较4种DNA提取方式,对提取结果进行紫外分光光度、电泳、酶切等方法的鉴定,结果表明,提取的灰枣叶片DNA得率约为0.370~0.530μg/mg,A260/A280约为1.90~2.00,A260/A230在2.00以上,分子量在23 kb以上,能够被EcoRⅠ,HindⅢ酶切。其中,第2种处理方法提取效果较好。     

Effects of dietary sodium butyrate on growth,digestive enzymes,body composition and nutrient retention-related gene expression of juvenile yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco)

An 8-week feeding trial was conducted to evaluate the effects of sodium butyrate (SB) on growth, digestive enzymes, body composition and nutrient retention-related gene expression of juvenile yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco). Five isonitrogenous and isolipidic diets (420 g/kg protein and 90 g/kg lipid) were formulated to contain 0 (control), 250, 500, 1,000 or 2,000 mg/kg SB. Triplicate groups of 40 fish (BW = 1.26 ± 0.01 g) per tank (300-L cylindrical fiberglass tanks) for each diet were fed to apparent satiation twice daily. Stomach, hepatopancreas and intestine samples were obtained for digestive enzymes activities analyses. A real-time quantitative PCR analysis was performed to determine the relative expression of target of rapamycin (TOR) and lipoprotein lipase (LPL) in the hepatopancreas and intestine. Fish fed the diets supplemented with SB at 500 and 1,000 mg/kg showed significantly higher specific growth rate and significantly lower feed conversion ratio compared to the control (P < 0.05). Dietary SB inclusion did not alter activities of intestinal amylase, creatine kinase and sodium–potassium adenosine triphosphatase (Na⁺/K⁺-ATPase), but increased activities of hepatic trypsin, stomachic lipase, intestinal lipase, alkaline phosphatase and γ-glutamyl transpeptidase for fish fed 1,000 mg/kg SB compared to the control (P < 0.05). Intestine length index, intestine somatic index, fold height and muscular thickness of distal intestine were significantly higher in 1,000 mg/kg SB groups compared to the control (P < 0.05). Significantly higher levels of whole-body crude protein, ash, calcium, phosphorus, nutrition retention and relative mRNA of intestinal TOR were observed in 1,000 mg/kg SB group (P < 0.05). Whole-body lipid content and hepatopancreas LPL mRNA expression in 2,000 mg/kg SB group were significantly higher than the control (P < 0.05). Relative mRNA levels of intestinal LPL and hepatopancreas TOR were significantly higher in the 500 mg/kg SB group compared to those in other groups (P < 0.05). The increased growth performance, digestive enzymes and nutrient retention in fish fed the diets supplemented with SB at 500 and 1,000 mg/kg suggests that SB can be a desirable growth promoter as an antibiotic alternative in diets.     

不同浒苔型饲料对幼刺参(Apostichopus japonicus)生长、消化及非特异性免疫的影响

以浒苔、石莼、豆粕、扇贝边、葡萄糖、贝壳粉、维生素和矿物质预混料为原料配制刺参(Apostichopus japonicus)饲料,利用酿酒酵母菌菌液和碱性蛋白酶制剂对刺参饲料进行4种不同的处理,得到5组实验用饲料,分别为对照组、发酵组、酶解组、复合组和鲜浒苔组.将上述饲料饲喂初始体重为(1.92-0.02)g的幼刺参42 d,每种饲料设3个重复,每个重复30头幼刺参.结果显示,不同的浒苔型饲料对幼刺参的存活率(SR)、增重率(WGR)、特定生长率(SGR)和饲料系数(FC)有显著影响(P＜0.05),而对其脏壁比(R)无显著性影响(P＞0.05).复合组和鲜浒苔组SR要显著高于酶解组(P＜0.05),而与其他2组均无显著性差异(P＞0.05).鲜浒苔组WGR远高于其他各组(P＜0.05),而复合组和发酵组WGR显著高于酶解组(P＜0.05),与对照组差异不显著(P＞0.05).幼刺参的SGR规律与WGR一致.鲜浒苔组FC显著低于对照组、发酵组和酶解组(P＜0.05),与复合组差异不显著(P＞0.05).随着摄食饲料时间的推移,对照组、发酵组、复合组和鲜浒苔组淀粉酶(AMS)活力先升高再下降后趋于稳定,而酶解组一直呈现下降趋势.酶解组纤维素酶(Cellulase)活力呈现一直下降的趋势,而其他组呈现波动变化,且均高于初始活力值.随着摄食饲料时间的推移,除酶解组外,其余各组胰蛋白酶(TRY)活力前后时间点变化差异不大,且每个采样点幼刺参TRY活力大小顺序始终是对照组＞复合组＞鲜浒苔组＞发酵组＞酶解组.不同浒苔型饲料饲喂的幼刺参体腔液中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)和超氧化物歧化酶(SOD)活力均有显著性差异(P＜0.05).鲜浒苔组ACP活力最大,且与复合组无显著性差异(P＞0.05),而显著高于其他3组(P＜0.05).鲜浒苔组和复合组AKP活力显著高于酶解组和对照组(P＜0.05),与发酵组无显著性差异(P＞0.05).复合组SOD活力最大,且显著高于发酵组和酶解组(P＜0.05),而与对照组和鲜浒苔组均无显著性差异(P＞0.05).由此得出,幼刺参在摄食先酶解后发酵的饲料后能够得到良好的生长效果,并可改善自身肠道消化,维持正常免疫.这为解决刺参饲料原料短缺以及浒苔高值化利用提供了依据和方法.     

中华蛸消化系统组织学结构及消化酶活性研究

为探明中华蛸(Octopus sinensis)的消化机能，明确适宜的投喂频率，减少互残造成的经济损失，本研究对中华蛸消化系统各器官进行组织学观察，并比较了摄食前后各消化器官消化酶活性以及机体营养物质的代谢水平的变化。结果显示，中华蛸嗉囊、胃、盲囊和肠由黏膜层、黏膜下层和肌层组成，内壁含有较多的褶皱，胃壁肌层最发达，盲囊和肠黏膜褶皱层无护膜；前唾液腺和后唾液腺均为复合管状腺，由腺管及大量的分泌导管组成；肝脏内肝小叶界限不易分辨。中华蛸摄食后，胰蛋白酶活性显著高于脂肪酶和淀粉酶活性。肝脏是分泌消化酶的重要器官，胰蛋白酶活性在肝脏最高为(148.74±21.25) U/mg，淀粉酶和脂肪酶活性在肝脏和胃最高。摄食后血浆总蛋白在120 min达到最低值后上升，血糖和肌糖原浓度在200 min达到最大值后下降，血浆胆固醇和血浆甘油三酯浓度变化幅度较小。消化过程分为2个阶段：第1阶段食物进入嗉囊和胃部，肝脏分泌大量胰蛋白酶，机体的营养物质为消化过程供能，含量下降；第2阶段胰蛋白酶活性处于较高水平，营养物质逐步被消化吸收。中华蛸完整的消化吸收过程约400 min，研究表明，中华蛸养殖生产中适宜的投喂间隔时间为6~7 h。     

维生素C对大鲵消化系统结构和功能的影响

本试验在大鲵基础饲料中添加不同梯度的维生素C,探究其对机体消化系统各器官结构和功能的影响。[方法]以鱼粉、鸡肉粉等为蛋白源,鱼油为脂肪源配制大鲵基础饲料,基础饲料中分别添加0 mg/kg(D1)、150mg/kg(D2)、300mg/kg(D3)、450 mg/kg(D4)、600mg/kg(D5)和750mg/kg(D6)的维生素C(维生素C磷酸酯,35%含量),配制成6种等氮等脂的试验饲料,饲喂初始体质量为(34.14±0.15)g 的试验幼鲵。[结果]结果表明：随维生素C添加量的增加,幼鲵胃蛋白酶、H⁺-K⁺-ATP酶活性均在D3组达到最高,通过对胃切片肌层厚度、绒毛高度等统计,添加300mg/kg维生素C比添加0、600mg/kg更有利于大鲵胃部发育(P＜0.05)；肠道糜蛋白酶、脂肪酶及Na⁺-K⁺-ATP酶活力均呈先升后趋于平稳趋势,在D4组达到最高(P＜0.05),对肠道淀粉酶无显著性影响(P＞0.05),通过对肠道切片肌层厚度、绒毛高度统计,添加300mg/kg维生素C比添加0、600mg/kg更有利于大鲵肠道发育；胰腺糜蛋白酶及脂肪酶活力均呈先升后趋于平稳趋势,分别在D3、D4组达到最大(P＜0.05),对胰腺淀粉酶无显著性影响(P＞0.05)；肝脏MDA、AST和ALT活性均呈先降后升趋势,并均在D3组达到最低,而CAT、T-SOD、ACP及AKP则呈先升后降的趋势,CAT、T-SOD、ACP在D4组达最高峰,AKP在D3组达最高,通过对肝脏切片发现,添加300mg/kg维生素C相较于添加0、600mg/kg炎性细胞浸润现象明显减少,肝巨噬细胞数量明显增加。[结论] 综上所述,适量的维生素C可有效的改善大鲵消化道的结构,提高消化酶活性,增强肝脏抗氧化能力,保护肝脏健康。