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122.
柔嫩艾美耳球虫BJ株Et1A基因的克隆及序列分析 总被引:3,自引:1,他引:2
本文参照已发表的柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)折光体蛋白基因序列,根据其阅读框及载体序列特点,两端分别加上EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点设计引物,以E.tenellaBJ株的总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,成功扩增出Et1A基因。将PCR产物与pGEM-T载体连接后,转化JM109感受态细胞,蓝白斑法筛选阳性克隆并测序。测序表明,该基因全长1978bp,其阅读框大小为1944bp;与GenBank登记的Et1A基因相比较,有6个部位、共7个碱基发生了突变,其中5个有意义突变,2个无意义突变,同源性达99 5%。与堆型艾美耳球虫(E.acervulina)的Ea1A基因的同源性为79 3%,而与牛艾美耳球虫(E.bovis)的同源性只有19 5%。表达产物具有核苷酸转氢酶的功能,推测可为子孢子侵入宿主细胞提供能量。 相似文献
123.
A型塞内卡病毒VP2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备 总被引:1,自引:1,他引:0
本研究旨在表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。在非变性条件下,利用Ni-NTA琼脂糖树脂从菌体裂解液上清中纯化重组SVA VP2蛋白,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用Protein A Sepharose CL-4B树脂从兔血清中亲和层析纯化多克隆抗体,并对其进行间接免疫荧光分析。结果显示,重组SVA VP2蛋白以可溶性和包涵体两种形式在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞内进行表达,分子质量约为47ku;制备的兔抗VP2蛋白多克隆抗体效价高达1∶64 000,该多克隆抗体仅识别SVA,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、脑心肌炎病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒等常见猪病原无交叉反应,表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性。重组SVA VP2蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒病血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。 相似文献
124.
125.
根据口蹄疫病毒基因组的5’非翻译区序列比较保守的特点,采用软件设计亚欧型(A、O、C及Asia-1型)FMDV通用的引物和探针,经对反应条件和反应体系进行优化,建立了亚欧型FMDV的实时荧光RT—PCR检测方法。研究表明,该方法检测阳性质粒模板的线性范围为1.9×10^7-1.9×10拷贝,最低可检测19个拷贝。通过对FMDV各血清型(A、O、C、Asia-1及SAT-1,2,3型)的检测,证实该方法对亚欧型FMDV具有良好的特异性,能有效区分亚欧型和南非型FMDV感染。本研究为亚欧型口蹄疫的快速诊断和流行病学调查提供了新的方法。 相似文献
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应用荧光RT-PCR检测亚欧型口蹄疫病毒 总被引:1,自引:0,他引:1
根据口蹄疫病毒基因组的5’非翻译区序列比较保守的特点,采用软件设计亚欧型(A、O、C及Asia-1型)FMDV通用的引物和探针,经对反应条件和反应体系进行优化,建立了亚欧型FMDV的实时荧光RT-PCR检测方法。研究表明,该方法检测阳性质粒模板的线性范围为1.9×107-1.9×10拷贝,最低可检测19个拷贝。通过对FMDV各血清型(A、O、C、Asia-1及SAT-1,2,3型)的检测,证实该方法对亚欧型FMDV具有良好的特异性,能有效区分亚欧型和南非型FMDV感染。本研究为亚欧型口蹄疫的快速诊断和流行病学调查提供了新的方法。 相似文献
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当人们致力于猪等孢球虫病的诊断时 ,由猪等孢球虫所引起的仔猪球虫病已成为全球养猪业中广为存在的一个问题。本病在世界各地广泛存在 (表 1 )。表 1 仔猪球虫病的全球性分布洲 /地区 国 家非 洲南非、津巴布韦、尼日利亚、加纳南、北美洲加拿大、美国、墨西哥、委内瑞拉、巴西、智利欧 洲荷兰、比利时、法国、德国、波兰、捷克、斯洛伐克、澳大利亚、意大利、瑞士、西班牙亚 洲泰国、菲律宾、马来西亚、韩国、日本、新加坡由此可见 ,本病并非局限于某一特定气候带内发生 ,还受其它一些因素的影响 ,这方面的调查虽很多 ,但仍… 相似文献
128.
阿维菌素控释丸对牛寄生虫的驱杀效果观察 总被引:4,自引:0,他引:4
山东省是养牛大省,据报道,截止1997年底,山东省共存栏肉牛1460.80万头.寄生虫病,特别是痒螨病是危害山东养牛业的主要疾病. 相似文献
129.
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家畜附红细胞体病 总被引:11,自引:0,他引:11
附红细胞体病(eperythrozoonosis)是由附红细胞体(eperythrozoon)寄生于家畜血.液的红细胞表面及血浆中所引起的一种传染性疾病。在国外斯蔡林(1978)首次报道了鼠的附红细胞体病。在国内晋希民于1981年在一批患病幼兔中首次发现了附红细胞体[1,5],此后,几乎在所有畜禽,包括牛、羊、猪、鸡、兔体内均发现了附红细胞体,亦有关于本病感染人的报道(崔君兆,19829张汝勇,1983等)。1.病原形态病畜耳静脉(大的背静脉)采血(不要用酒精棉球擦拭,以防细胞变形),滴加于载玻片上,再加等量生理盐水混匀,以降低血粘度,避免红细… 相似文献