腺苷酸活化蛋白激酶信号转导通路在奶牛酮病发生和发展过程中的调控机制

奶牛酮病是围产期奶牛常见的营养代谢性疾病,给奶牛业造成了巨大的损失。奶牛酮病发生时,相关的能量代谢激素也发生了明显的变化,主要是胰高血糖素和胰岛素。腺苷酸活化蛋白激酶被认为是机体的能量感受器,一些能量代谢激素可以引起其活性的变化。本文就胰高血糖素和胰岛素对腺苷酸活化蛋白激酶信号转导通路发生作用机制做一论述,旨在为下一步研究奶牛酮病提供理论支持。     

乳房炎奶牛部分血液生化指标的变化

随机选取21头临床健康荷斯坦奶牛(CMT检测呈阴性)、19头隐性乳房炎奶牛(CMT检测呈阳性)、33头临床型乳房炎奶牛,分别于颈静脉采血,分离血清,测定总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、碱性磷酸酶(ALP)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)以及免疫球蛋白IgA、IgM、IgG等生化指标.结果表明,临床型乳房炎奶牛血清中碱性磷酸酶、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性显著高于健康奶牛和隐性乳房炎奶牛(P<0.01或P<0.05),临床型奶牛血清中免疫球蛋白Isa、IgM、IgG的含量显著高于健康奶牛(P<0.01或P<0.05).隐性乳房炎奶牛血清中碱性磷酸酶、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性和免疫球蛋白IgA、IgM、IgG的含量高于健康奶牛,但差异不显著(P>0.05);3组奶牛血清总蛋白、白蛋白和球蛋白含量均无显著性差异(P>0.05).     

中草药提取物对小鼠乳腺上皮细胞增殖的影响

【目的】研究中草药单味及复方提取物对原代培养的小鼠乳腺上皮细胞增殖的影响,旨在为探明中草药治疗奶牛乳腺疾病机制提供试验依据。【方法】采用组织块种植法培养3月龄、分娩后3~5 d的昆明种远交系小白鼠的乳腺组织,采用胰蛋白酶消化法获得相对纯化的小鼠乳腺上皮细胞,并运用SDS-PAGE法进行鉴定。制备5味中草药(重楼、紫花地丁、木芙蓉、半枝莲、泽兰叶)及治疗奶牛乳房炎用中草药复方提取物,分别作用于对数生长期的乳腺上皮细胞5 d,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)分析细胞活力。【结果】将通过组织块种植法与胰蛋白酶消化法相结合,可得到纯化的有酪蛋白分泌功能的乳腺上皮细胞;中草药重楼、紫花地丁、木芙蓉、半枝莲、泽兰叶提取物在其质量浓度分别为8,40,40,1.6,8 mg/mL时,对小鼠乳腺上皮细胞增殖作用最强;除了紫花地丁,其他4种中草药提取物在其质量浓度为200 mg/mL时,对小鼠乳腺上皮细胞增殖的抑制作用最强。中草药复方提取物质量浓度为8~200mg/mL时,对小鼠乳腺细胞有显著促进作用,随着质量浓度的增加,促增殖作用减弱。【结论】中草药单味及复方提取物在一定质量浓度下对乳腺上皮细胞增殖产生了促进或抑制作用,且中草药复方提取物的适用质量浓度范围较广。     

黄芪多糖对湖羊羔羊生长性能、血清指标、消化功能和直肠菌群的影响

本试验旨在研究在日粮中添加黄芪多糖对湖羊断奶羔羊生长性能、血清指标、养分表观消化率、胰腺消化酶、小肠黏膜形态和直肠菌群的影响。选取体质状况良好、体质量为(9.76±0. 12) kg的45日龄的湖羊断奶羔羊14只随机分为对照组和黄芪多糖组,每组7只。试验期共计28 d。结果表明,与对照组相比,黄芪多糖组羔羊生长性能显著提高(P0. 05),料质比极显著降低(P0. 01)。黄芪多糖组血清中Ig A、Ig G、Ig M含量显著提高(P0. 05),超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和γ-干扰素(IFN-γ)含量极显著提高(P0. 01),血清中过氧化产物丙二醛(MDA)含量显著降低(P0. 05)。黄芪多糖组的干物质、粗蛋白质、粗脂肪的养分表观消化率显著提高(P0. 05)。黄芪多糖组胰腺淀粉酶和脂肪酶活性显著提高(P0. 05)。黄芪多糖能够显著提高空十二指肠、空肠和回肠绒毛高度及V/C值(P0. 05),对隐窝深度影响不显著(P0.05)。黄芪多糖组放线细菌门(Actinobacteria)和拟杆菌门(Bacterroidetes)细菌数量显著提高(P0. 05),拟杆菌纲(Bacteroidia)、甲烷杆菌纲(Methanobacteria)和盐杆菌纲(Halobacteria)细菌数量显著提高(P0. 05),拟杆菌目(Bacteroidales)和甲烷杆菌目(Methanobacteriales)细菌数量显著提高(P0. 05),双歧杆菌科(Bifidobacterialeceae)、甲烷杆菌科(Methanobacterice-ae)和普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)细菌数量显著提高(P0. 05),毛螺菌科(Lachnospiraceae)细菌显著降低(P0. 05),甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)、雷沃菌属(Prevotella)、shuttleworthia和succiniclasticum细菌数量显著提高(P0. 05)。说明,在日粮中添加黄芪多糖,可以提高湖羊羔羊生长性能、免疫力、抗氧化能力、养分物质表观消化率,促进小肠各段的发育并改善肠道菌群。     

自噬对DON诱导仔猪海马神经细胞损伤的影响

[目的]本试验旨在研究自噬对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)诱导仔猪海马神经细胞损伤的影响。[方法]以不同质量浓度DON(0,125,250,500,1 000和2 000 ng·mL~(-1))处理对数生长期仔猪海马神经细胞24 h后,采用倒置显微镜、透射电镜观察DON对仔猪海马神经细胞形态和超微结构的影响;采用p EGFP-LC3质粒瞬时转染细胞,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白的分布情况;采用Western blot检测DON对仔猪海马神经细胞自噬标志性蛋白LC3的表达;通过添加自噬激活剂雷帕霉素(RAP)和自噬抑制剂氯喹(CQ)来升高和降低细胞的自噬水平,CCK-8法检测细胞的存活率。[结果]不同质量浓度的DON均可诱导细胞自噬,自噬水平随着DON浓度的增加先上升后下降,在1 000 ng·mL~(-1)时达到峰值。与对照组相比,DON可显著抑制细胞存活率并诱导细胞发生明显的形态学变化,并呈剂量依赖性;随着DON浓度的升高,细胞LC3-Ⅱ含量先上升后下降,1 000 ng·mL~(-1)时,LC3-Ⅱ含量最高,差异显著或极显著(P0.05或P0.01)。与DON处理组相比,自噬水平的上升显著提高细胞活性(P0.05),而自噬水平的下降显著降低细胞活性(P0.05)。[结论]DON可以引起仔猪海马神经细胞自噬水平的上升,激活的自噬对DON导致的细胞损伤具有一定的保护作用。     

犬源复合益生菌对脾虚犬抗氧化及消化吸收功能的影响

试验旨在研究犬源复合益生菌对脾虚犬血清抗氧化、消化吸收功能的影响。选用24只1岁龄健康比格犬,随机分为对照组、脾虚组、自然恢复组和益生菌治疗组。对照组饲喂基础饲粮,其余3组每日饲喂基础饲粮+10 mL/kg番泻叶水煎液,灌服造模7 d。第7天,随机选取4只脾虚组犬解剖采样;对照组和自然恢复组饲喂基础饲粮;益生菌治疗组每日饲喂基础饲粮+1×10~9CFU复合益生菌制剂,持续7 d。第14天,试验犬全部解剖取样。番泻叶水煎液灌喂第7天,试验犬出现脾虚证候群,表明脾虚模型构建成功。与对照组相比,脾虚组TSOD、GSH-Px、D-Xylose和胰腺蛋白酶含量极显著降低(P0.01),胰腺淀粉酶和脂肪酶显著降低(P0.05),MDA含量极显著升高(P0.01);且脾虚组十二指肠和空肠绒毛高度及V/C值显著下降(P0.05)。透射电镜观察发现,与对照组相比,脾虚组小肠黏膜上皮细胞顶端微绒毛稀疏,细胞间连接复合体被破坏,胞内线粒体和粗面内质网发生肿胀,部分发生融合降解。脾虚犬经复合益生菌制剂治疗1周后,各项指标均恢复到对照组犬水平(P0.05)。犬源复合益生菌能够使脾虚犬抗氧化功能和消化吸收功能恢复正常,对犬脾虚证有较好的治疗效果。     

11S通过NF-κB信号通路引起猪小肠上皮细胞损伤

通过体外培养猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),研究大豆球蛋白(11S)对猪小肠上皮细胞的影响。将IPEC-J2细胞分为6组[A(对照组)、B、C、D、E和F],各组中分别添加0、1、5、10、5、5 mg·mL^-1的11S,并且在E组和F组分别添加1 μmol·L^-1吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)和1 μmol·mL^-1 Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)。分别于8、16、24 h,用CCK-8法检测细胞存活率,用ELISA法检测细胞一氧化氮(NO)、二胺氧化酶(DAO)、5-羟色胺(5-HT)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)含量,用western blot法检测细胞p-NF-κB p65、iNOS、COX-2的蛋白表达量,用qPCR法检测细胞NF-κB p65、IKKβ、iNOS、IKKα、COX-2 mRNA的相对表达量。结果表明:11S可以降低猪小肠上皮细胞存活率,添加PDTC和L-NAME可以提高小肠上皮细胞存活率;11S可促进NO、DAO、5-HT和IL-6的分泌,降低IL-10的分泌,增加p-NF-κB p65、iNOS、COX-2的蛋白表达量及NF-κB p65、IKKβ、iNOS、IKKα、COX-2 mRNA的相对表达量,添加PDTC和L-NAME可抑制11S的作用。综上,11S可引起猪小肠上皮细胞损伤,随着11S浓度的增大,损伤程度增加,PDTC和L-NAME可以降低11S对细胞的损伤。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇和黄曲霉毒素B1单一及联合染毒对小鼠脑组织病理变化、抗氧化性能和紧密连接蛋白表达量的影响

本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和黄曲霉毒素B₁(AFB₁)单一及联合染毒对小鼠脑组织病理变化、抗氧化性能和紧密连接蛋白mRNA表达量的影响。选取96只18日龄昆明系雄性小鼠,随机分为对照组、DON组、AFB₁组和AD组(DON+AFB₁组),每组分别灌服生理盐水、500 μg·kg^-1 DON、200 μg·kg^-1 AFB₁和200 μg·kg^-1 AFB₁+500 μg·kg^-1 DON,连续灌服45 d。分别于试验的第0、15、30、45天,每组随机选取6只小鼠,麻醉后处死,取脑组织观察病理变化,并检测脑组织氧化与抗氧化指标及紧密连接蛋白ZO-1和Occludin mRNA的表达量。结果显示,与对照组相比,DON组小鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性显著下降(P<0.05),NO含量显著升高(P<0.05);AFB₁组小鼠脑组织中CAT活性显著下降(P<0.05);AD组脑组织总抗氧化能力(T-AOC)、CAT、SOD活性显著下降(P<0.05),丙二醛(MDA)和NO含量显著上升(P<0.05);各染毒组脑组织ZO-1和Occludin mRNA的表达量显著下降(P<0.05)。研究结果表明,DON与AFB₁单一及联合染毒均能造成小鼠脑组织不同程度的病理变化,降低抗氧化性能及紧密连接蛋白ZO-1和Occludin mRNA的表达量,且DON与AFB₁的联合毒性大于单一毒性。     

加味四君子汤对脾虚犬小肠组织形态及EGF表达的影响

【目的】探究加味四君子汤对脾虚犬小肠组织形态及EGF表达的影响。【方法】选择1岁龄的比格犬24只,随机分为4组,每组6只,分别为对照组、脾虚组、自然恢复组、中药恢复组。对照组犬饲喂基础饲粮;脾虚组、自然恢复组、中药恢复组犬每天以6 mL/kg番泻叶灌喂造模。第7天,将脾虚组犬解剖采样,中药恢复组在基础饲粮中添加2%加味四君子汤,自然恢复组饲喂基础饲粮。第14天,全部犬解剖采样。采集犬十二指肠、空肠中段、回肠进行HE染色,测量肠绒毛长度、隐窝深度,计算V/C值;检测小肠EGF蛋白表达量以及mRNA相对表达量。【结果】与对照组相比,脾虚组犬小肠出现弥漫性的肠道黏膜充血、水肿,并有大量黏液渗出;小肠绒毛稀疏、变短;肠绒毛长度极显著降低(P0.01),隐窝深度极显著升高(P0.01),十二指肠、回肠V/C值显著降低(P0.05),空肠V/C值极显著降低(P0.01);小肠EGF的蛋白表达量极显著降低(P0.01),mRNA表达量显著降低(P0.05)。用加味四君子汤治疗后,中药恢复组各项指标均恢复到接近对照组水平。【结论】加味四君子汤能够使番泻叶诱导犬脾虚证的小肠组织形态、EGF蛋白表达量以及mRNA相对表达量恢复正常,对犬脾虚证有明显的治疗效果。     

高锌日粮对断奶仔猪肠道黏膜免疫及黏膜上皮形态的影响

本试验旨在研究长期饲喂不同锌源的高锌日粮对断奶应激仔猪肠道黏膜免疫及黏膜上皮形态的影响。选用临床检查健康的(26±2)日龄"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪60头,按体质量和性别随机分成3组,每组20头,分别饲喂基础日粮、基础日粮+3 000 mg.kg-1氧化锌和基础日粮+500 mg.kg-1蛋氨酸锌。试验期70 d。于试验结束时,每组选取5头仔猪放血致死,分别取十二指肠近端、空肠近端1/4处、空肠远端1/4处和回肠中段,用于测定肠黏膜绒毛高度、绒毛宽度、隐窝深度,小肠上皮间淋巴细胞、杯状细胞数量,粘液层厚度及肠道粘液中IgA的含量。结果显示,在断奶后0～42 d,添加高锌日粮组仔猪的体重和日增重显著或极显著高于对照组仔猪(P0.05或P0.01),而在断奶后42～70 d,对照组仔猪日增重显著高于添加高锌日粮组仔猪(P0.05);两高锌组仔猪小肠黏膜结构有明显的损伤,表现为绒毛高度下降,隐窝变深,肠黏膜上皮细胞萎缩,肠道粘液层厚度变薄;上皮间淋巴细胞数、杯状细胞数和肠道黏液中IgA水平都显著或极显著低于对照组(P0.05或P0.01)。高锌日粮长期暴露引起断奶仔猪锌中毒,改变了肠道黏膜上皮结构的完整性,并降低了仔猪生长性能及肠道黏膜免疫功能。