团头鲂肠道细菌的分离鉴定与药敏试验

从团头鲂(Megalobrama amblycepnala)肠道中分离纯化到4株细菌,菌株编号为MA1～4,通过细菌镜检及培养结果表明,均为革兰氏阴性直杆状菌,在LB培养基上生长;4株细菌氧化酶试验为阴性、过氧化氢酶试验为阳性、半固体动力阳性,不能利用棉子糖、山梨醇、木糖等多种糖类,产H2S、VP试验和葡萄糖酸盐利用试验为阴性;采用数值编码鉴定,MA1为鲶鱼爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri),MA2为摩氏摩根氏菌(Morganella morganii),MA3为嗜线虫致病杆菌(Xenorhab-dus nematophilua),MA4为弗氏志贺菌(Shigella flexneri)。进一步进行药敏试验分析显示,4株菌耐药率分别为52.2%、69.6%、95.7%、100%,均对阿奇霉素、红霉素、洁霉素、氯洁霉素、灭滴灵、头孢噻吩、先锋霉素Ⅳ、复方新诺明和甲氧咔啶具有耐药性;对利福平、氯霉素、头孢孟多、先锋必素、氧哌嗪青霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、卡那霉素和四环素等药物敏感性不同。该研究结果对探明鱼类肠道菌群、养殖水体微生态和疾病防治具有重要参考价值。     

草鱼肠道细菌产消化酶能力的初步研究

为了解草鱼肠道细菌在食饵消化过程中的作用,为微生态饲用添加剂的开发研究打下基础,从健康的草鱼肠道中分离出30株细菌,对其进行了革兰氏染色鉴定和产消化酶能力分析.结果表明:其中有6株为革兰氏阳性菌,24株为革兰氏阴性菌,有46.67%的菌株能分泌蛋白酶,43.33%的菌株能分泌脂肪酶,40.00%的菌株能分泌淀粉酶,16.67%的菌株能分泌纤维素酶,其中产4种酶的有3株,产3种酶的有3株,产2种酶的有6株,产1种酶的有14株,不产酶的仅有4株,产酶菌株的比例高达86.67%.     

鲢鱼肠道细菌的分离鉴定及药敏试验

从鲢鱼肠道中分离得到2株细菌,菌株编号为SC-1、SC-2,并进行细菌形态学、生理生化特性、药敏试验等研究。结果表明:2株细菌均为革兰氏阴性菌,氧化酶阴性,过氧化氢酶阳性,吲哚和VP试验阴性,均不产生苯丙氨酸脱氨酶,均能利用枸橼酸盐、葡萄糖、山梨醇、木糖等;采用数值编码鉴定,SC-1为费氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii),SC-2为罗氏耶尔森氏菌(Yersinia rohdei)。进一步的药敏试验分析显示,2株菌均对青霉素类(氨苄青霉素、氧哌嗪青霉素)、头孢菌素类(头孢孟多、头孢氨噻肟、先锋必素)、氨基苷类(庆大霉素、卡那霉素、乙基西梭霉素)等抗生素敏感。以上研究结果对揭示鱼类肠道菌群结构及鱼病防治等具有重要参考价值。     

褐飞虱肠道细菌多样性分析

通过构建稻褐飞虱肠道细菌16S rRNA文库的方法,分析了褐飞虱肠道内细菌的种类与多样性.通过对16S rRNA序列分析,从褐飞虱室内种群肠道中鉴定了13种细菌,这些细菌分属于沃尔巴克氏菌(Wolbachia)、短波单胞菌属(Brevundimonas sp.)、定氮螺旋菌属(Azospirillum sp.)、苍白杆菌属(Ochrobactrum sp.)、草螺菌属(Herbaspiril-lum sp.)、丛毛单胞菌属(Comamonas sp.)、不动杆菌属(Acinetobacter sp.)、窄食单胞菌属(Stenotrophomonas sp.)、白色杆菌(Leucobater sp.)、Cardinium及暂定类群TM7.其中以不动杆菌、窄食单胞菌、苍白杆菌属与TM7最为常见.     

云南草地贪夜蛾扩散区与首发地种群肠道细菌群落组成结构及多样性的比较

草地贪夜蛾是一种新入侵我国的重大害虫。肠道细菌是昆虫肠道微生物的重要类群,在害虫生理生态功能中发挥着重要作用,为弄清云南省草地贪夜蛾扩散地与入侵地种群肠道细菌群落组成结构及多样性的差异,本研究采用Illumina Hiseq技术对云南草地贪夜蛾首发地普洱市宝藏镇、扩散区昆明市嵩明县两个地区草地贪夜蛾4龄幼虫肠道细菌的16S rDNA V3-V4变异区域序列进行了测定分析,应用USEARCH和QIIME软件统计样品序列数和操作分类单元(operational taxonomic unit,OTU)数量分析了肠道细菌群落组成结构及物种丰度与多样性。结果表明,来自普洱市宝藏镇、昆明市嵩明县的6个草地贪夜蛾样品共产生了302 786条有效序列,在97%相似度下可将其聚成564个OTUs,共发现细菌20门、39纲、86目、161科、318属、344种。其中宝藏镇草地贪夜蛾种群的肠道细菌分属于16门、29纲、60目、102科、178属共192种;优势门、纲、目、科、属、种分别为:厚壁菌门(35.09%)、梭菌纲(15.84%)、梭菌目(15.84%)、艾克曼菌科(12.80%)、艾克曼菌属(12.80%)、不可培养的艾克曼菌属细菌(12.80%)。嵩明县草地贪夜蛾肠道细菌共184种,分属于15门、27纲、54目、96科、172属;优势门、纲、目、科、属、种分别为:厚壁菌门(65.87%)、杆菌纲(48.07%)、乳杆菌目(47.32%)、肠球菌科(46.99%)、肠球菌属(46.99%)、NLAE-zl-C485(46.96%)。宝藏镇草地贪夜蛾4龄幼虫肠道内细菌群落Shannon、ACE和Chao1多样性指数分别为3.46、360.25和370.54,分别高于扩散地嵩明县种群的2.26、295.54和305.42;而Simpson指数(0.13)则低于嵩明县种群(0.36)。通过KEGG代谢途径差异分析发现,草地贪夜蛾肠道细菌基因主要参与的代谢途径是整体组织构建和碳水化合物代谢,且宝藏镇草地贪夜蛾肠道细菌基因在大多数的代谢通路中表达量高于嵩明县种群。以上结果说明,云南省草地贪夜蛾首发地种群肠道内细菌群落组成及多样性高于扩散区种群。本研究将为进一步研究不同地区草地贪夜蛾种群生物学差异及肠道微生物对其生态适应性的调控提供理论依据。     

云南省芒市草地贪夜蛾幼虫肠道可培养细菌种类及对抗生素的敏感性

[目的]明确云南省芒市草地贪夜蛾幼虫肠道可培养细菌种类及优势种细菌对抗生素的敏感性,为草地贪夜蛾的绿色防控提供参考.[方法]采用常规分离培养法对云南省芒市玉米田草地贪夜蛾5龄幼虫肠道可培养细菌进行分离培养,采用形态特征和16S rDNA技术对细菌种类进行鉴定;采用纸片扩散法测定优势种细菌对10种抗生素的敏感性.[结果]云南省芒市玉米田草地贪夜蛾5龄幼虫肠道内可培养细菌有3门5科5属6种,分别为变栖克雷伯氏菌(Klebsiella variicola)、蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii)、鹑鸡肠球菌(E.gallinarum)、普罗威登斯菌(Providencia vermicola)、金黄微杆菌(Chryseomicrobium aureum)和Kocuria himachalensis,其中变栖克雷伯氏菌是草地贪夜蛾幼虫肠道的优势种细菌.变栖克雷伯氏菌对10种抗生素的敏感性测定结果表明,变栖克雷伯氏菌对诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、氯霉素和头孢唑林敏感,表现为低耐药性;对庆大霉素和阿米卡星中等敏感,表现为中等耐药性;对青霉素、红霉素和氨苄西林的敏感性较弱,表现为强耐药性.[结论]云南省芒市草地贪夜蛾幼虫肠道可培养细菌组成具有多样性,其中变栖克雷伯氏菌为优势种细菌,该优势种细菌对青霉素、红霉素和氨苄西林存在明显的耐药性.     

23种中草药及复方对鲫肠道3种细菌的体外抑菌试验

采用琼脂平板扩散法(打孔法),选择蒲公英、大黄(熟)、板蓝根、连翘等23种中草药及5种复方制剂(H1-H5)对来源于鲫肠道的两种致病菌和一种益生菌进行了体外抑菌实验。结果发现蒲公英、连翘、山楂、穿心莲能有效抑制嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、金黄色葡萄球菌(Staphytococcus aureus)的生长,而对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)影响较小。5种复方制剂对嗜水气单胞菌均具有较好的抑制作用,其中H1不影响枯草芽孢杆菌的`生长,而其余四种复方制剂对枯草芽孢杆菌的生长具有一定的影响;复方制剂H3、H4和H5对金黄色葡萄球菌具有一定抑制作用,其余两种对金黄色葡萄球菌的生长无影响。     

采用MiSeq测序技术分析不同处理沟叩甲肠道微生物群落结构

为明确取食不同食物金针虫的肠道微生物群落结构差异以及寄主抵御外界不良因子干扰的影响,运用MiSeq测序技术比较分析平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense处理取食小麦和马铃薯沟叩甲Pleonomus canaliculatus的肠道细菌群落结构差异。结果显示,不同处理沟叩甲种群之间Simpson指数差异显著,但Chao1、Observed species、PD whole tree和Shannon指数差异均不显著;肠道细菌类微生物主要由厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门和变形杆菌门组成,取食马铃薯种群、饥饿种群和平沙绿僵菌处理的饥饿种群厚壁菌门的相对含量分别为29.46%、39.46%和29.81%;对照种群、取食小麦种群和平沙绿僵菌处理的马铃薯种群拟杆菌门的相对含量分别为31.30%、29.79%和39.07%;取食小麦种群中普通拟杆菌Bacteroides vulgatus PC510优势菌群的相对含量最高达8.37%,其余处理种群中优势菌群相对含量均低于5.00%。对不同处理沟叩甲种群进行相关性分析,发现对照种群与平沙绿僵菌处理种群的相关性较低,但与其余处理组相关性均较高;PCA聚类结果显示,平沙绿僵菌处理种群与其余种群之间聚集度较低。表明平沙绿僵菌的胁迫对沟叩甲肠道内细菌微生物群落多样性、丰富度及结构变化存在一定程度的影响,且外源食物摄入与平沙绿僵菌的胁迫两者叠加效应对寄主昆虫肠道微生物群落结构的影响高于单一外源因素的影响。