PRRSV缺失变异毒株JL/07/SW M基因克隆与原核表达

根据PRRSV VR-2332毒株核苷酸序列,设计针对M基因的特异引物,以PRRSV JL/07/SW毒株细胞培养物为模板,利用RT-PCR方法,成功扩增出M基因,将该基因与原核表达载体pGEX-4T-1连接,转化大肠杆菌BL-21,经IPTG诱导表达.测序结果表明:M基因全长525 bp,编码175个氨基酸,经同源性比较及进化树分析该毒株属于美洲型.表达产物经SDS-PAGE及Western blot结果证实;PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因成功地进行了原核表达,分子量约为43 000,表达的目的蛋白占菌体总蛋白含量的19.8%.     

流感病毒与细胞受体相互作用的复杂性

细胞受体是流感病毒感染、复制与传播的生物学基础.病毒血凝素基因的差异和细胞上不同类型的受体是影响病毒受体结合特性的两个重要因素.了解这两个因素有助于人们进一步认识流感的病原学、感染机制、流行病学等内容,对于流感的监测、疫苗研制和公共卫生学都将有借鉴意义.论文就流感病毒基因特点、细胞受体类型差异及二者相互作用的复杂性进行综述.     

新城疫病毒昌黎株与国外毒株HN蛋白基因核苷酸及氨基酸差异性 …

参考国外发表的新城疫病毒（ＮＤＶ）的ＨＮ基因序列设计了１对特异性引物，应用ＲＴ－ＰＣＲ对ＮＤＶ昌黎株（野毒）的ＨＮ基因进行了扩增，扩增产物克隆后测序。扩增出的ＨＮ基因核苷酸长度为１ ７４２ｂｐ，编码５７１个氨基酸，序列中有６个糖基化位点，１３个半胱氨酸残基，与国外发表的强毒株序列相符。核苷酸同源怀在８８．５％～９２．９％，推导的氨基酸序列同源性在９０．０％～９４．２％之间。     

新城疫病毒（青岛株）F蛋白基因的克隆和序列分析

参考新城疫病毒（NDV）长春株的F基因序列设计了1以特异性引物，应用RT－PCR对NDV青岛株（野毒）的F基因进行了扩增，扩增产物克隆后测序，扩出的F基因核苷酸长度为792bp，编码261个氨基酸，包括完整的F2片段和部分F1片段，裂解位点区（112－117aa）氨基酸序列为Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Phe，与国外发表的强毒株序列相符，正明青岛株为强毒株，根据该基因推导的所基酸序列，与国内外发表的NDVF蛋白氨基酸序列相比，同源性为88．1％－94．3％。     

"拯救"NA-1株鹅源副黏病毒辅助质粒的构建及鉴定

将本实验室保存的NA-1株鹅源副黏病毒（GPMV）经SPF鸡胚增殖,收集尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的ZJ1株GPMV基因组序列,设计了4对特异性引物,利用RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒NP、P和L基因片段,并将目的基因片段消化、回收纯化,克隆pCI-neo表达载体,转化大肠杆菌DH5α,小提质粒选取阳性克隆酶切、PCR鉴定并进行序列测定,结果表明NP、P和L基因正确克隆到pCI-neo表达载体中,并分别命名为pCI-NP、pCI-P和pCI-L。将构建好的pCI-NP、pCI-P和pCI-L重组质粒单独转染Vero细胞,在荧光显微镜下观察到特异绿色荧光,表明NP、P和L蛋白得到成功表达。     

猪源副粘病毒的分子鉴定

参照GenBank发表的相关猪源副粘病毒和禽源副粘病毒融合蛋白F基因核苷酸序列,设计并合成了4对引物,采用RT-PCR技术对本研究室分离的猪源副粘病毒JL-1株F基因进行探索性扩增、序列测定,在此基础上设计引物扩增HN基因、进行序列测定,分析F、HN基因序列,对该病毒进行分子鉴定。结果显示,扩增出了JL-1株F、HN基因目的条带,序列分析表明其与猪源副粘病毒病家族其他成员即蓝眼病病毒、尼帕病毒、梅那哥病毒同源性很低,与禽副粘病毒1型（APMV-1）具有高度同源性。初步确定分离的猪源副粘病毒为禽副粘病毒1型。     

我国猪瘟的流行特点

猪瘟是我国四大畜禽疫病之一,至今已流行70多年。我国于1954年成功研制了猪瘟兔化弱毒疫苗,随即在全国范围内推广应用。目前本病在我国呈不