在不同饲料中添加加热灭活的植物乳酸杆菌P-8对大菱鲆幼鱼抗氧化能力和血清生化指标的影响

将植物乳酸菌P-8以灭活的形式添加到大菱鲆幼鱼的两种基础饲料中,旨在研究灭活植物乳酸杆菌(HK-LP)对大菱鲆饲料中豆粕替代鱼粉的影响。试验结束时取血测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活力和总蛋白(TP)、胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TGK)含量。结果显示,D因素和P因素在AST、ALP、TGK和SOD有显著交互作用(P0.05)。D因素ALT、TCHO、TP、TGK、MDA和SOD有显著性影响(P0.05);P因素对SOD、ALP、AST、ALT、TGK和TP有显著性影响(P0.05),且对血清生化指标ALP、AST、ALT、TGK和TP有极显著影响(P0.01),血清TCHO、MDA呈下降趋势,但未达到显著水平(P0.05),CAT呈上升趋势,但未达到显著水平(P0.05)。由此得知,在豆粕替代45%鱼粉蛋白饲料中添加一定浓度的灭活乳酸杆菌P-8对大菱鲆幼鱼血清生化指标和抗氧化能力有显著性影响。     

基于P-糖蛋白基因表达评价尼罗罗非鱼体内恩诺沙星代谢“首过效应”

为从药物酶的角度建立一种客观评价鱼类"首过效应"的方法,利用荧光定量PCR法测定尼罗罗非鱼(Oreochomis niloticus Linn)肝、肾组织中P-糖蛋白(P-gp)基因表达量,分析了单剂量(40 mg.kg 1)口服给药恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)后,尼罗罗非鱼肠道、肝组织中mRNA水平的相对表达量与ENR血药浓度的时实相关性。实验结果显示:在尼罗罗非鱼肠道、肝组织中,P-gp基因在分子量127 bp处出现了与预期大小相符的特异性扩增片段。对尼罗罗非鱼口灌给药ENR后,ENR能迅速通过肠道进入血浆,其在肠道、肝和血浆中的消除速度较快,其药物时量曲线关系符合一级吸收的二室开放动力学模型。当血浆中ENR浓度达到最高达峰时(1 h),实验组肠道和肝中P-gp基因的相对表达量相对于对照组均表现出显著性差异(P<0.05);当肠道中ENR浓度达到最高峰时(2 h),实验组肠道P-gp基因的相对表达量则表现出极显著差异(P<0.01);当肝中ENR浓度达到最高峰时(2 h),实验组肝P-gp基因的相对表达量与对照组相比则表现出显著性差异(P<0.05)。该结果证实了鱼类P-gp基因参与药物代谢过程,提供了一种从分子水平揭示水产动物体内药物代谢规律的思路。     

Extraction Optimization and Antioxidant Activity of Glycoprotein from Camellia oleifera Seed

为探讨油茶籽糖蛋白的最优提取工艺及抗氧化活性,在单因素试验基础上采用响应面法对提取油茶糖蛋白的关键参数进行了优化.同时以维生素C作为对照,采用4种不同方法考察了油茶籽糖蛋白的抗氧化性能.结果表明,油茶籽糖蛋白的最佳提取工艺条件为:浸提时间8.81h、提取盐浓度0.12 mol/L、pH值8.77和液料比11.62 mL/g,在此条件下蛋白得率为8.76％,糖得率为10.14％.抗氧化试验表明,油茶籽糖蛋白能显著清除DPPH、羟基自由基和超氧阴离子自由基,具备一定的还原能力.     

传染性造血器官坏死病毒-Sn1203株的基因型及糖蛋白的生物信息学分析

利用鲤(Cyprinus carpio)上皮细胞(epitheliaoma papulosum cyprini, EPC)培养传染性造血器官坏死病毒- Sn1203分离株(IHNV-Sn1203), 根据GenBank中IHNV G蛋白基因开放阅读框(open reading frame, ORF)的序列设计引物(GenBank序列编号AB288207), 采用RT-PCR的方法克隆得到IHNV-Sn1203株G蛋白全长ORF, 克隆至表达载体pET27b(+)中, 构建了pET27-G重组质粒, 并进行了测序分析。生物信息学分析结果显示, IHNV-Sn1203株G蛋白基因序列长度为1 527 bp, 与韩国株具有最高的核酸同源性(96.86%)和氨基酸同源性(97.05%)。该基因编码508个氨基酸残基, 推导分子量约为56.55 kD, 等电点为6.15; 氨基酸序列分析表明, G蛋白富含丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸, 存在28个潜在的磷酸化位点; 存在4个潜在的N-糖基化位点和7个潜在的O-糖基化位点; G蛋白N端含有20个氨基酸的信号肽; 亲水性大于输水性; 位于483~508位氨基酸存在一跨膜区; 抗原表位预测显示抗原性良好; 系统进化树分析显示, IHNV-Sn1203株与日本株和韩国株聚为一簇, 都属于JRt基因型。

     

糖蛋白的制备、结构分析及生理功能研究现状

糖蛋白广泛分布于生物体内,其糖链部分影响蛋白质的折叠和整体构象,蛋白质与糖链连接的特殊结构使其具备了各种生物活性,参与了人类许多生理功能及疾病的发生和预防。糖基或糖链与蛋白质肽链的链接方式主要有0一连接和N一连接2种。本文综述了糖蛋白的分类、分离纯化方法及其化学结构组成的分析方法,并介绍了某些糖蛋白的生理活性,对糖蛋白的开发利用具有借鉴作用。     

P-1拒避剂防治森林鼠害效果的试验研究

利用P-1拒避剂在室内和室外进行森林鼠害的防治试验,结果表明,除喷雾试验效果不明显外,其余方法均具有显著的避鼠作用。室内阻隔法、包藏法的有效率分别为80%和70%。长白落叶松造林苗用蘸苗法防治的被害率仅为1.40%,没有死亡株出现,而对照地被害率、死亡率分别为7.40%和2.96%。杨树利用涂干法和喷干法进行防治,试验地被害率分别为10.11%和2.23%,而对照地分别为23.50%和18.18%;试验地死亡率分别为1.12%和0.00%,对照地分别为20.73%和15.65%。柳树利用喷干法进行防治,试验地被害率和死亡率分别为4.57%和0.00%,对照地分别为30.31%和19.45%,试验效果显著。     

REV囊膜糖蛋白的表达、纯化及单克隆抗体的制备和初步鉴定

以禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的cDNA为模板,用PCR技术获得囊膜糖蛋白(env)基因的部分片段并构建了pGEX-4T-3-env表达质粒,进而在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白GST-env,SDS-PAGE证明表达的融合蛋白以包涵体的形式存在。融合蛋白经过变性、复性以及牛凝血酶酶切后得到纯化的目的蛋白env,免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb),并通过间接ELISA、间接免疫荧光和Western blotting等方法对mAb做初步鉴定。结果表明,试验成功表达了env蛋白,并获得了4株稳定分泌针对env蛋白的杂交瘤细胞(3-2A11,1-2B3,1-2D11,3D2),其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG2b,IgG2b,IgG2b,IgG1。ELISA检测,对应腹水的效价分别为1∶105,1∶2.1×105,1∶2.2×105,1∶105。Western blotting结果显示4株抗env的mAb均能特异性识别env蛋白,间接免疫荧光分析则表明只有3-2A11和3D2这2株mAb能与REV全病毒特异性反应。     

狂犬病毒糖蛋白单、双拷贝基因重组腺病毒的构建

将携带狂犬病毒糖蛋白单、双拷贝基因的穿梭栽体pShuttle-G和pShuttle-dG分别经PmeⅠ线性化后电转化含E1和E3区缺失的人5型腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态菌株BJ5183-AD-1进行细菌内同源重组,经抗性筛选,PcR、PacⅠ酶切及测序鉴定.构建了狂犬病毒糖蛋白单、双拷贝基因重组腺病毒质粒pAdHu5-G和pAdHu5-dG,线性化后分别转染Ad-293细胞进行病毒包装.结果显示,在第4天发生细胞病变效应,且荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白的表达;western-blot证实2株重组腺病毒表达的糖蛋白能被特异性单抗识别;遗传稳定性分析显示,病毒传至10代时单G和双G基因均稳定遗传,没有发生缺失和突变.为比较分析2株重组腺病毒糖蛋白的表达时效及免疫效果奠定了基础.     

表达狂犬病病毒糖蛋白的重组伪狂犬病病毒gG-基因缺失转移载体的构建

以伪狂犬病毒TK-/gI-缺失疫苗株为亲本株提取病毒基因组DNA,克隆含gG基因的EcoRⅤ/StuⅠ片断,用限制性内切酶BamHⅠ和NdeⅠ缺失gG基因,构成重组质粒pIRⅤ。同时,分别将狂犬病病毒SRV9的株糖蛋白和绿色荧光蛋白克隆入载体pIRESneo,构建平行表达糖蛋白和绿色荧光蛋白表达盒。将表达盒插入到pIRⅤ,构建gG基因缺失转移载体,为下一步同源重组获得伪狂犬病毒奠定基础。     

林蛙输卵管糖蛋白的纯化方法研究

林蛙输卵管糖蛋白是由输卵管上皮细胞分泌的一类高分子量的特异性蛋白质,对配子的成熟和运输、受精以及早期胚胎发育具有重要影响。长白山林蛙输卵管糖蛋白具有特殊药用价值和广泛的应用前景,目前对其提取和纯化工艺的研究也比较深入。简述输卵管糖蛋白的性质及生物学功能,着重论述分离纯化方法。