雏鸭肝炎病毒侵染下肝脏消减cDNA文库的构建及差异基因筛选

本研究通过构建雏鸭肝脏消减cDNA文库,旨在筛选并鉴定与雏鸭病毒性肝炎相关的基因,对相关基因进行功能聚类分析进而探究其作用机理。利用抑制性消减杂交(Suppression subtraction hybridization,SSH)技术构建3日龄健康全同胞金定鸭人工感染雏鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)与同期注射等量生理盐水差异表达基因的SSH-cDNA文库。对其中563个阳性克隆进行测序,共获得299条差异表达序列标签(Expres sedsequence tags,ESTs)。去除冗余的cDNA序列载体并聚类拼接后,进行核酸和蛋白质同源性的比较和功能聚类分析。结果表明:有70个不同的基因与ESTs具有高度的同源性(E值150bp,匹配度>80%),且多数基因与细胞组分合成、信号转导以及病理状态下的生物学调控过程相关。I型雏鸭病毒性肝炎的发生和发展是多基因多步骤的复杂过程,该结果为深入研究雏鸭肝炎病的分子调控机制提供基础。     

大余麻鸭的体尺性状指标与体重的主成分分析

为了通过对大余麻鸭体尺和体重的测定和主成分分析,给大余麻鸭的选育和综合评价提供基础,试验选取500日龄120只(公、母各60只)大余麻鸭进行体重与体尺测量,采用SPSS软件进行统计分析。结果表明:公、母鸭间除胫围无显著差异外,其他指标公鸭均极显著(P≤0.01)或显著(0.01P≤0.05)高于母鸭,公鸭体重与体斜长、龙骨长、胫围、半潜水长、胸深、趾长均极显著相关(P≤0.01),母鸭体重与其他体尺指标的相关情况与公鸭大致相同,但与胸深无显著相关。说明公鸭的体重和绝大部分体尺指标极显著大于母鸭(P≤0.01),体重与骨架结构的关系很大,均可由各体尺指标来估算。对公鸭的体型性状进行选育时至少应包括体重、体斜长、龙骨长、胸宽、胸深、骨盆宽6个指标;对母鸭至少应包括体重、骨盆宽、半潜水长、龙骨长、胫围、趾长6个指标。     

采用微卫星DNA标记分析巢湖鸭异地小群保种效果

本研究利用筛选后的12对荧光标记微卫星引物分析巢湖鸭原产地(庐江)与国家水禽种质资源基因库(泰州)2个群体的保种效果。检测判定了160个个体的基因型,通过计算2个群体的优势等位基因频率(P)i、期望杂合度(He)、多态信息含量(PIC)、群体内近交系数(Fi)s分析了巢湖鸭群体内和群体间的遗传变异,采用配对试验均数差异t检验比较了基因库保种群体与原产地群体的遗传差异。结果表明:基因库保种群体与原产地群体间的Pi无显著性差异(Pi=0.480>0.05);He和PIC均略高于原产地群体,但差异均不显著(PHe=0.209、PPIC=0.118);Fis显著高于原产地群体(PFis=0.022<0.05)。结果说明,基因库较好地保存了该品种并在一定程度上丰富了品种的遗传多样性,初步表明对巢湖鸭采取异地小群保种的方法是可行的。     

Ⅰ型雏鸭肝炎病毒侵染后鸭组织中ALB基因表达的分析

检测Ⅰ型雏鸭肝炎病毒侵染后ALB基因mRNA以及ALB蛋白分别在肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑、小脑、腿肌和胸腺等组织中的相对表达量和含量并分析其意义。分别利用实时荧光定量RT-PCR技术和ELISA法检测ALB基因在易感组、抗病组和对照组各组织中mRNA的表达量以及ALB蛋白含量。总体而言,除腿肌外,ALB基因mRNA在易感组中的表达量极显著低于对照组和抗病组(P<0.01),抗病组显著或极显著低于对照组(P<0.01或P<0.05);各处理组间,肝、小脑和胸腺中ALB蛋白含量与ALB基因mRNA相对表达量规律一致,在其他组织中,各处理组间ALB蛋白含量差异均不显著(P>0.05)。RT-PCR与ELISA的结果比较可见,两者在肝脏、胸腺、小脑等与雏鸭肝炎病直接相关的指示性组织中表现一致。本试验研究结果,进一步揭示了ALB基因为Ⅰ型雏鸭肝炎病的抗性基因,与前期抑制性消减杂交法得到的结果一致,其表达量的变化可以作为区分易感鸭和抗病鸭的标志。