RT-PCR检测贵州犬瘟热病毒

根据犬瘟热病毒H基因核苷酸序列 ,设计合成一对引物对贵州临床诊断为犬瘟热 (CD)病死犬的心、肝、脾、肾、粪便进行RT PCR检测。结果表明 :从心、脾、肾病料上清液中可扩增出 760bp的特异性带 ,与预期扩增片段长度相同 ;粪便和肝脏上清液RT PCR结果为阴性 ,但粪便上清液接种Vero细胞后连续传代 3代 ,每代细胞培养液RT PCR结果均为阳性 ;在检测的 2 2条病死犬中 ,有 1 9条病死犬检测到犬瘟热病毒H基因的特异性核酸片段 ,阳性率为 86 4% (1 9/ 2 2 )。     

犬细小病毒基因型的调查

采用 PCR方法扩增了 13株犬细小病毒 ( canine parvovirus,CPV) VP2基因的 2个片段 ,通过序列测定和 DNAS-tar软件分析 ,结果显示 ,我国的 CPV分离株也存在基因变异现象 ,除发现 CPV- 2、CPV - 2 a、CPV- 2 b突变株外 ,还发现在 CPV- 2 a基础上进一步进化产生的 2个新的变异株。在我国 ,CPV- 2曾在 2 0世纪 80年代早期流行 ,但 1986年后分离到的 CPV以 CPV- 2 a为主 ,在 2 0 0 2年送检的 8份病料中分离到 4株 CPV- 2 a和 4株 CPV- 2 b。PV/貉 / CC/ 1/ 86在CPV- 2 a的基础上 VP2发生氨基酸 30 0 G→ S替换 ,PV/犬 / JL / 1/ 0 2在 CPV- 2 a的基础上 VP2发生氨基酸 5 6 4 S→ N替换 ,其确切的生物学意义尚不清楚。我国的 CPV分离株与参考毒株的核酸同源性超过 98% ,没有形成明显的中国CPV分支 ,进化方式与文献报道的进化方式一致     

猪繁殖与呼吸综合征在我国的流行动态及病因分析

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrom PRRS），又称“蓝耳病”，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种新的病毒病。该病以怀孕母猪流产、死胎、木乃伊胎、早产、产弱仔等繁殖障碍和仔猪呼吸困难、高死亡率及育肥猪呼吸道症状为特征。本文就猪繁殖与呼吸综合征在我国的流行动态及病因加以分析，为以后更好的防控该病的发生提供了可靠的资料。     

第三代头孢菌素——头孢地嗪

头孢地嗪（Cefodizime）是德国赫斯特公司和法国罗赛尔公司共同开发的第3代注射用头孢菌素类抗生素,于1990年首次在日本上市。其对各种革兰氏阳性及阴性菌均具有较强的抗菌活性。同时该药具有免疫增强作用,对临床各种感染的治疗,特别是对免疫力低下的感染者具有良好疗效。1抗菌活性1．卫体外抗菌活性头孢地嗪对革兰氏阳性及阴性菌均具有良好抗菌作用、对溶血性、草绿色及肺炎链球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌具有强大抗菌活性,MIC50（最小杀菌浓度）为0．06～0．5μg／ml,敏感率＞90％;对金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、…     

犬冠状病毒V1株核蛋白基因的克隆与序列分析

首次对犬冠状病毒V1野毒株核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定.根据GenBank中报道的CCV Insavc-1株N基因序列,设计了1对特异性引物,对分离的CCV V1野毒株进行了RT-PCR扩增;将扩增得到的阳性PCR片段经纯化后与pGEM-T连接得到重组质粒pTN1,进行核苷酸序列测定,并与GenBank中CCV标准毒株Insavc-1 N基因进行了比较.结果该基因全长为1 146 bp,编码382个氨基酸,两者核苷酸的同源性为91.7%;推导的氨基酸序列的同源性为90.2%,显示出较高的保守性.在V1野毒株推导的N蛋白N端156-179位存在一个SRXX富集区,与小鼠肝炎病毒相应区域相同,推测可能是RNA结合区.另外,推导的该蛋白氨基酸序列其疏水性和抗原表位与标准毒株Insavc-1 N蛋白存在一定的差异;在氨基酸组成上,该蛋白丝氨酸和赖氨酸含量高达9.84%,提示该蛋白具有高度螺旋和缠绕的分子结构.     

猪大肠杆菌与沙门氏菌混感的诊断与治疗

近些年来,我国的养猪业快速发展,各种猪场已遍布各地,猪场结构与管理条件参差不齐,猪病越来越多越来越复杂,特别是混合感染、多重感染现象普遍存在,尤其是滥用抗生素造成的耐药现象日趋严重,给临床用药带来了困难。大肠杆菌和沙门氏菌是主要引起仔猪细菌性腹泻的两种常见细菌,而且极易产生耐药性,为此,我们对以仔猪黄白痢为主的病例进行实验室诊断与治疗,效果十分显著。     

幼狐犬瘟热母源抗体消长规律的测定

本研究对20只未进行免疫接种的健康幼狐,分别在30日龄、45日龄、60日龄对其进行颈静脉采血,制备血清,进行抗犬瘟热病毒(CDV)母源中和抗体滴度测定.结果表明,绝大多数幼狐在30日龄母源抗体较高;幼狐在45日龄母源抗体均较低,血清中和抗体效价均等于或小于1∶18.6;幼狐在60日龄母源抗体基本消失,均小于1∶4.0.45日龄对幼狐进行CD免疫接种能够避免免疫空白期的出现,能获得较好的免疫效果.     

幼貂抗犬瘟热病毒母源抗体消长规律的测定

本试验采用20只未进行免疫接种的健康幼貂，分别在30、45、60日龄进行颈静脉采血，制备血清，测定抗CDV的中和抗体滴度。结果表明，30日龄绝大多数幼貂抗CDV母源中和抗体效价在1：30.0以上，45日龄母源抗体均较低，血清抗CDV中和抗体效价小于1：20.0。60日龄母源抗体基本消失，血清抗CDV中和抗体效价等于或小于1：8.0。所以45日龄对幼貂进行CD免疫接种较好。     

猪流感病毒H9N2亚型济南株HA、NA基因的克隆与序列分析

根据GenBank中流感病毒H9N2亚型HA基因与NA基因序列,分别设计扩增HA基因与NA基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增猪流感病毒H9N2济南株(SW/SD/JT/07)HA基因和NA基因,分别将RT-PCR扩增产物克隆入pMD18-T载体,进行测序分析。结果表明,SW/SD/JT/07 HA基因长度为1701bp,编码566个氨基酸,HA0切割位点序列为R-S-S-R-G,属非高致病性毒株;HA蛋白有8个糖基化位点,与参考毒株糖基化位点数一致;HA蛋白有5个受体结合位点,其中在190位氨基酸与其余参考毒株存在差异。SW/SD/JT/07 NA基因长度为1413bp,编码470个氨基酸,NA蛋白基质结合部与参考毒株一致,高度保守;NA蛋白有5个抗原位点,在325位为D其余参考毒株均为N,SW/SD/JT/07与DC/HB/W1/04,CK/GS/2/99在398位为E,其余参考毒株为D或N;SW/SD/JT/07 NA蛋白与CK/SH/F/98,DC/HB/W1/04,CK/GS/2/99,SW/GD/WXL/04,SW/SD/W4/03,SW/YN/Simao2/07一样在茎区63,64,65位发生氨基酸缺失。SW/SD/JT/07 HA基因与参考毒株的同源性82.5%～98.6%,NA基因与参考毒株的同源性82.2%～99.1%。SW/SD/JT/07 HA基因与NA基因系统发生树分析表明,SW/SD/JT/07与AIV H9N2亚型亲缘关系密切。     

犬细小病毒Taq Man荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

根据GenBank中CPV VP2蛋白基因序列,选择CPV VP2基因保守序列,分别设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立了CPV Taq Man荧光定量PCR检测方法。对CPV Taq Man荧光定量PCR的反应体系和反应条件进行优化,并对其特异性和敏感性进行了测定,建立标准曲线。结果,CPV Taq Man荧光定量PCR对CPV检测阳性,并能对10拷贝/μL的CPV模板检测阳性,标准曲线的相关系数为0.9992,但对非CPV模板检测阴性。结果表明,所建立的CPV Taq Man荧光定量PCR具有很好的特异性和敏感性,标准曲线具有很强的实用性。同时对CPV Taq Man荧光定量PCR与CPV PCR进行了比较试验,结果前者比后者的敏感性高100倍。采用CPVHA、CPV PCR与CPV Taq Man荧光定量PCR对55份临床样品进行检测,CPV HA对30份样品检测阳性,CPVPCR对40份样品检测阳性,CPV Taq Man荧光定量PCR对47份样品检测阳性。这表明,CPV Taq Man荧光定量PCR对样品的检出率最高,具有特异、敏感、快速的特点,适用临床样品的检测。