固态发酵菜籽粕替代膨化豆粕对断奶仔猪生长性能及血清生化指标的影响

以固态发酵菜籽粕按不同比例等氮替代膨化豆粕,研究固态发酵菜籽粕对断奶仔猪生长性能和血清生化指标的影响。选用192头35日龄左右健康＂杜×长×大＂断奶仔猪,采用单因素4水平4重复设计,断奶仔猪分为4组,每组4个重复,每个重复12头,公母比例为4∶8。对照组是未替代豆粕组,日粮中膨化豆粕的比例为20%;试验1、2和3组以固态发酵菜籽粕等氮分别替代20%、40%和60%的膨化豆粕。试验期31 d。结果表明：固态发酵菜籽粕替代膨化豆粕对断奶仔猪采食量、日增重、饲料转化效率和腹泻率无显著影响（P〉0.05）;对断奶仔猪血清总蛋白、尿素氮、T3、T4、碱性磷酸酶和血钙等也无显著影响（P〉0.05）;但在20%和40%的替代比例时血磷显著降低（P〈0.05）;血清免疫球蛋白IgA在40%替代比例时有着显著的提高（P〈0.05）,IgG、IgM的提高趋势与IgA一致,但差异不显著（P〉0.05）。试验结果显示断奶仔猪日粮中以固态发酵菜籽粕替代部分膨化豆粕是可行的。     

以鸡恒定链(Ii)为载体的新城疫病毒-F蛋白表位基因疫苗的免疫原性

本文研究了以鸡恒定链基因(invariant chain,Ii)为载体的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F基因片段的基因疫苗及其小鼠的免疫应答.首先,用重叠延伸法经3轮PCR获得以NDV-F343表位基因(327-359 AA)取代鸡恒定链中Ⅱ类分子相关肽段(class-Ⅱassociated invariant chain peptide,CLIP)片段序列,构建了基于恒定链的NDV内源性靶向基因疫苗(C1-△CLIP-Ii-F343).其次,在观察C1-△CLIP-Ii-F343和无恒定链载体的C1-F343转染真核细胞中,发现它们均能在COS-7细胞中高效表达.最后,将25只6～8周龄的雌性Balb/c小鼠(Mus musculus)随机分为5组,用C1-△CLIP-Ii-F343和非靶向性疫苗(C1-F343)进行免疫,以C1-△CLIP-Ii、pEGFP-C1和生理盐水作为对照.经3次免疫后,取小鼠尾部血对小鼠的体液免疫进行检测.结果表明,在C1-△CLIP-Ii-F343和C1-F343免疫组小鼠血清中均可检测到针对NDV的特异性抗体,其滴度分别达到1/6400和1/1600.进一步Western blot研究结果表明,抗体与接种NDV的鸡胚尿囊液和原核表达的PET-NDV-F306蛋白均产生特异性结合.研究结果提示,鸡恒定链作为载体的NDV基因疫苗能够刺激小鼠产生特异性的体液免疫应答,为新城疫疫苗开发提供了一个新的思路.     

鸡恒定链分子跨膜区2个氨基酸残基在形成MHCⅡ-Ii复合物中的作用

本研究旨在探明鸡恒定链跨膜区特定氨基酸在形成MHCⅡ-Ii复合物聚合中的作用特征.用大引物PCR定点突变法将鸡Ii链跨膜区2个氨基酸Gln47和Thr50分别突变为丙氨酸(Ala),再连接到pEGFP-C1载体中,构建含Ii-GFP融合基因的真核表达载体.同时还分别构建了含pDsRed2-N1-MHCⅡα、pDsRed2-N1-MHCⅡβ、pEG-FP-N1-MHCⅡa和pEGFP-N1-MHCⅡβ真核表达载体.用脂质体介导法将这些重组质粒单独或共转染至COS-7细胞,培养48 h后经荧光显微镜检测野生型Ii和突变型Ii与MHCⅡ类分子的细胞定位,并通过免疫共沉淀研究它们之间的相互关系.结果显示,野生型Ii链与MHCⅡα或MHCⅡβ之间存在细胞内的共定位,而突变型Ii与MHCⅡα或MHCⅡβ在细胞中共表达后未出现共定位现象.免疫共沉淀结果显示,在野生型Ii链与MHCⅡa或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均能检测到MHCⅡa-li、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物,而突变型Ii链与MHCⅡα或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均检测不到MHCⅡα-Ii、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物.因此Ii链跨膜区Gln47和Thr50 2个氨基酸对于MHCⅡ-Ii复合体的形成是至关重要的.     

高等农业院校分子生物学教学方法改革探索

分子生物学是高等农业院校的专业基础课之一,该课程具有理论性强、内容抽象和新知识、新概念、新技术不断涌现等特点,目前的教学方式不能满足学生的学习需求。为了提高教学质量,从教材的选择、教学手段、教学模式和课程考核等方面进行改革,并取得了较好的实践效果。     

日粮能量水平对圩猪生产性能·血清生化指标和肉质的影响

[目的]探讨不同消化能(DE)水平日粮对圩猪生长性能、肉质和血清生化指标的影响,确定圩猪适宜的DE水平.[方法]选用24头体重为(38.7±4.91) kg的健康圩猪,随机分为高能组、中能组和低能组3个处理组,饲养于采食量和体重可实时自动记录的自动饲喂系统内,每组8个重复,每个重复公母比例3∶1.试验期分为生长期(35 ～ 60 kg)和育肥期(60 ～ 80 kg)2个阶段.生长期日粮粗蛋白(CP)为16％,高能组、中能组和低能组的DE水平分别为13.54、12.93和12.32MJ/kg,肥育期日粮CP为14％,3组的DE水平分别为13.66、13.04和12.43MJ/kg.试验期耗料和体重实时自动记录,试验结束时,每组选取6头(4♂2♀)体重相近猪屠宰,测定其屠宰性能和肉质,同时全部试猪实行前腔静脉采血以进行血液生化指标的测定.[结果]在生长期,高能组平均日增重(ADG)和料重比(F/G)显著高于低能组(P＜0.05),中能组平均日增重(ADG)显著高于低能组(P＜0.05),但二者的F/G差异不显著(P＞0.05),各组间平均日采食量(ADFI)和增重成本差异不显著(P＞0.05);肥育期日粮不同水平DE对ADG和F/G的影响与生长期相同,2个时期各组间平均日采食量和增重成本差异均不显著(P＞0.05).高能组背膘厚显著低于中能组(P＜0.05),虽然也低于低能组,但差异不显著(P＞0.05),各组的屠宰率、pH1h、PH24h和剪切力均没有显著差异(P＞0.05);日粮DE水平对9,12-十八碳二烯酸含量的影响与对背膘厚的影响相同,显著低于中能组(P＜0.05),虽然也低于低能组,但差异不显著(P＞0.05);高能组的十六碳-顺-9-烯酸含量显著低于低能组(P＜0.05),高能组的单不饱和脂肪酸的含量显著低于中能和低能组(P＜0.05),多不饱和脂肪酸的含量显著高于中能组(P＜0.05);日粮DE水平对血清生化指标和肌肉中肌苷酸和氨基酸的含量均无显著影响(P＞0.05).[结论]当CP为16％时,圩猪生长期日粮DE水平以13.54 MJ/kg为宜;当CP为14％时,圩猪育肥期日粮DE水平以13.66 MJ/kg为宜.     

新城疫病毒(NDV)F基因的克隆及其真核表达重组质粒的构建

应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和一对自行设计的引物,从新城疫病毒(NDV)F48E9株扩增出长度为1664bp的DNA片段。与已报道的NDV-融合蛋白(F)基因比较,两者大小一致。经限制性内切酶反应,获得两个预期大小的片段。将克隆的F基因定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切和测序鉴定,证明构建的重组质粒含有NDV-F基因。     

固态发酵菜籽粕替代日粮中豆粕饲喂肉鸭对生长性能和肠道微生物的影响

本试验旨在研究固态发酵菜籽粕替代日粮中豆粕对肉鸭生长性能和肠道菌群的影响,从而确定替代豆粕的适宜比例。试验选用1280只15日龄健康樱桃谷SM3肉鸭,采用单因素4水平4重复随机设计(每个重复80只),4个处理组中固态发酵菜籽粕等氮替代日粮中10.5%豆粕的比例分别为0、1/3、2/3和3/3。结果表明,各替代组前期(15～30日龄)、全期(15～45日龄)的日增重、日采食量和饲料转化率均差异不显著(P0.05),后期(30～45日龄)日采食量与对照组相比显著增加(P0.05);1/3替代组的芽孢杆菌数与对照组相比显著提高(P0.05);各试验组的空肠段pH值和肝脏指数与对照组相比差异不显著(P0.05)。结果提示,固态发酵菜籽粕可以等营养完全替代日粮中的豆粕,同时1/3替代日粮中豆粕对促进肉鸭肠道内芽孢杆菌生长作用显著。     

鸡γ-干扰素基因的克隆与原核表达

应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,通过一对自行设计的引物,从经ConA诱导活化的鸡脾淋巴细胞的RNA中扩增出一特异性基因片段,其大小约为500 bp.该片段经酶切和测序鉴定为鸡IFN-γ基因.将其插入原核表达载体pGEX-4T-1, 并导入大肠杆菌BL21细胞中,经IPTG诱导培养,获得分子量约为43 000的蛋白带,表明所克隆的CHIFN-γ基因在原核细胞中得到表达.     

猪CD8α分子基因的克隆与初步鉴定

[目的]为了研究CD8分子的生物学功能。[方法]自行设计一对引物,从猪脾细胞中,克隆了猪CD8α链基因,获得大小为700 bp的基因片段,并对其进行鉴定。[结果]结果表明,该基因片段的核苷酸序列与已报道猪的同源性为99.2%,与豚鼠、人、猴子、猫和狗的同源性分别为35.6%、55.7%、55.6%、56.4%和56.8%。[结论]该研究为进一步研究CD8分子的生物学功能提供了依据。