胡杨悬浮细胞系的建立

[目的]建立快速稳定生长的胡杨(Populus euphratica Oliver)细胞悬浮系,为进一步制备胡杨原生质体及林木抗旱耐盐体细胞杂交育种研究奠定基础.[方法]以胡杨胚性愈伤组织为材料,建立胡杨悬浮细胞系,利用正交试验法优化悬浮细胞系的培养条件,在优化培养条件下测定细胞的生长特性.[结果]以胡杨胚性愈伤组织成功地建立了胡杨悬浮细胞系,正交优化试验表明:MB+0.1 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+50 g/L蔗糖+300mg/L CH+146 mg/L Gln为最优培养基组合,接种量为30 g(FW)/L时,干重增长速率最高,达 2.44 g/(L·d).胡杨悬浮细胞系生长曲线基本呈S形,生长周期为10 d,其中3～7 d为对数生长期.在一个生长周期内,培养液pH变化趋势是先下降,后上升并逐渐趋于平稳.[结论]在上述优化培养条件下,胡杨悬浮细胞系干重增长速率最快,细胞生长状态最佳.     

罗布麻胚性细胞悬浮系的建立

本实验以罗布麻（Apocynum venetttln Linn．）成熟种子为外植体。探寻获得罗布麻胚性愈伤组织的最佳培养基和条件。研究两种主要的生长素（2,4-D和NAA）和两种主要的细胞分裂素（6-BA和KT）对诱导罗布麻愈伤组织及2,4-D对诱导罗布麻胚性愈伤组织和胚性细胞悬浮系建立的影响。结果表明2,4-D对诱导形成胚性愈伤组织非常重要;不同激素配比对实验的结果影响较大,其中激素组合为2,4-D0．5mg／L＋6-BA0．05mg／L可产生大量的胚性愈伤组织;MB＋2,4-D2．0mg／L是建立罗布麻胚性细胞悬浮系的最适培养基。     

胡杨种子形态结构初步观察

运用光学显微镜和电子显微镜对胡杨种子的形态结构进行了观察。结果表明:胡杨种子由种皮、子叶和胚组成。胡杨种子的种皮结构比较特殊,只有一层薄壁细胞构成,且细胞与细胞之间有明显的胞间连接;成熟的胡杨种子由两片子叶组成,相对贴合,着生在胚轴上。子叶主要由维管束组织和薄壁细胞组成,薄壁细胞近似圆形,为多个细胞群体。子叶表面细胞排列紧密且整齐,横切面近方形,细胞内容物丰富,染色很深。成熟未萌发的种子亚显微结构中,主要的内含物是贮藏蛋白和脂质小体,大量的脂肪体环绕在蛋白体的周围,充满整个细胞。蛋白体由拟晶体和蛋白质基质组成。除这些内含物质外,细胞内几乎观察不到其它细胞器的存在。     

盐胁迫下3种纤维亚麻NHX基因表达规律

旨在运用半定量RT-PCR技术探究不同浓度盐胁迫下3种纤维亚麻耐盐基因NHX的表达规律。提取不同浓度盐胁迫6天的3种亚麻无菌苗茎叶组织总RNA,反转录得到cDNA,利用优化的半定量RT-PCR法检测3种亚麻无菌苗的NHX基因表达量。结果表明,‘范妮’和‘双亚5号’无菌苗经100 mmol/L NaCl胁迫6天后NHX表达量最高,‘天鑫3号’无菌苗经200 mmol/L NaCl胁迫6天后NHX基因表达量最高。与对照相比,3种纤维亚麻经盐胁迫后NHX基因表达量均上调,因此可将NHX基因的检测作为鉴定这3种纤维亚麻耐盐性的依据。     

食用菌栽培袋的微波灭菌研究

目的：为研发微波灭菌食用菌栽培袋的新工艺和相关设备提供科学依据。方法：测定了微波加热不同时间食用菌料袋增温情况及不同重量食用菌料袋达到预定压力所需时间,比较了微波加热加压灭菌和高压蒸汽灭菌的食用菌料袋微生物致死率及栽培金针菇的情况。结果：用一定功率的微波加热食用菌栽培料袋时,菌袋内物料的增温与加热时间成正比,与物料质量成反比;在0．15MPa,微波加热加压维持15min与高压蒸汽维持1．5h的灭菌效果相当;两种灭菌方法对食用菌料袋栽培金针菇没有明显差别。结论：试验获得的特征参数是指导食用菌栽培袋微波加热灭菌的重要参数,也是制定食用菌栽培袋微波加热灭菌工艺和设计灭菌设备的重要参考依据。     

罗布麻悬浮细胞生长特性及产绿原酸的初探

[目的]探索罗布麻(Apocynum ventetum Linn.)悬浮细胞生长特性和产绿原酸量的最佳激素浓度,为进一步以罗布麻悬浮培养的细胞生产绿原酸奠定前期基础.[方法]以罗布麻悬浮细胞系为材,确定最佳接种量和细胞生长曲线,培养获得的材料经干燥、粉碎后经超声波法提取,以高效液相色谱法(HPIC)测定其中的绿原酸(CGA)量.以绿原酸量为指标,进行方差分析,确定最佳的植物生长调节剂的浓度.[结果]将罗布麻细胞悬液抽滤,以1.0 g(FW)/10 mL的接种量接种在MB(硝酸钾加倍,硝酸铵减半)+2.0 mg/L 2,4-D+0.05mg/L 6-BA+50g/L蔗糖(pH 5.9)培养基上,对数生长期为4～8 d.以上述接种量和5 d培养周期为条件,将获得的罗布麻细胞接种在不同NAA和KT浓度的培养基上培养,产绿原酸量最大的培养基为MB+0.3 mg/LNAA+0.3 mg/L KT+50g/L蔗糖(pH5.9),产量达0.183 mg/g(DW),与其它培养基相比在P=0.05水平上差异显著.[结论]通过罗布麻悬浮培养的细胞产绿原酸最佳培养基为MB+0.3 mg/L NAA+0.3 mg/L KT+50g/L蔗糖(pH5.9).     

响应曲面法优化罗布麻愈伤组织中绿原酸的提取工艺

通过优化罗布麻愈伤组织中绿原酸的提取工艺,为进一步探索规模化提取罗布麻愈伤组织中的绿原酸奠定前期工作基础。以罗布麻愈伤组织中绿原酸得率为指标,通过HPLC法测定并比较,得出最佳提取方法;在单因素试验的基础上,结合响应曲面法优化提取绿原酸的工艺。从罗布麻愈伤组织中提取绿原酸的最佳方法是超声波辅助提取法;在单因素试验的基础上,结合响应曲面法优化超声波辅助提取绿原酸的最佳工艺条件为：提取时间40 min,提取功率40 W,料液比1:40,绿原酸最高得率为0.4911 mg/g(D.W),提取时间和提取功率的交互作用对得率有显著影响。建立的二次多项式数学模型对从罗布麻愈伤组织中提取绿原酸具有重要的指导作用。