高表达牛气管防御素的真核重组载体的构建及其鉴定

根据GeneBank中牛TAP的序列设计了1对特异性引物,采用RT-PCR方法从牛气管组织扩增牛TAP基因,并克隆到pEASY-T3载体。测序结果表明,扩增的片段含有144 bp核苷酸,编码48个氨基酸,与已报道的bTAP有1个氨基酸不同。该基因与真核表达载体FG9重组,经过PCR,酶切和测序鉴定,筛选牛TAP基因重组真核表达载体。使用脂质体法将FG9-TAP重组质粒转染293T细胞,斑点ELISA检测结果表明,成功构建了高表达牛TAP基因的真核表达载体,为抗金黄色葡萄球菌转牛TAP基因奶牛培育研究奠定基础。     

动物防御素研究进展

防御素是生物体先天性免疫防御系统的重要组成成份,是宿主抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线.动物防御素因具有抗菌谱广、抗菌机制特殊、无残留、对自身细胞没有伤害等特点,在畜禽生产中具有广阔的应用前景.     

牛气管抗菌肽的原核表达、体外抗菌活性及其组织分布分析

本文旨在对牛气管抗菌肽(tracheal antimicrobial peptide,TAP)基因进行原核表达,以及研究重组蛋白的抗菌活性,并分析TAP在各组织的表达分布情况,为开展转TAP基因抗乳腺炎奶牛研究提供技术资料。作者采用RT-PCR从荷斯坦奶牛气管扩增TAP基因,分析其序列后根据大肠杆菌表达系统对密码子的偏好性,人工合成牛TAP基因,构建pET32a(+)-TAP重组质粒;然后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并纯化。对表达蛋白进行SDS-PAGE、Western Blot鉴定;在线软件分析目的蛋白表达量。采用滤纸片法测定重组牛TAP的体外抗菌活性,并用RT-PCR法分析牛各组织中TAP表达情况。测序结果表明,扩增到114bp目的基因片段,可编码含38个氨基酸残基的成熟蛋白。SDS-PAGE分析表达的融合蛋白相对分子质量为24ku,重组蛋白以可溶性方式存在,表达量占菌体总蛋白的52.1%。Western Blot检测只出现单一条带。抗菌效价分析表明0.115μg·μL-1重组蛋白对牛源金黄色葡萄球菌有一定的抗菌活性。TAP基因在奶牛咽喉、肺、气管、小肠、肝、心脏及口腔黏膜中均有表达,在鼻黏膜和舌黏膜中微量表达,在皮肤中几乎不表达。作者成功表达了牛TAP基因,重组牛TAP蛋白在大肠杆菌中实现高效表达,并具有一定的抗奶牛乳腺炎致病菌的活性,为未来培育抗乳腺炎转基因奶牛及相关基因工程产品的开发奠定了基础。     

小麦要高产 冬前要细管

1适时冬灌保苗安全越冬小麦越冬前适时冬灌是保苗安全越冬,早春防旱、防倒春寒的重要措施。因为水的热容量大,冬灌后土壤水分充足,可以缓和地温的剧烈变化,防止冻害死苗;还可以促进越冬期的根系发育,巩固健壮分蘖,有利于幼穗分化,并为第2年返青期保蓄水分,做到冬水春用;另外冬灌可以塌实土壤,粉碎坷垃,消灭越冬害虫,所以冬灌具有明显的增产作用。要取得较好的冬灌效果,     

棚室连作障碍的成因及解除方法

在设施瓜菜的反季节栽培过程中，由于棚室设施易地重建困难，再加上设施瓜菜经济效益高的原因，使得不少种植户常常连续多年在同一个棚室内种植同一种瓜菜，造成设施瓜菜在管理过程中出现生长不良、产量低、品质差、病害发生重、防治困难、成本增加、收入减少等现象，发生严重时会造成整个棚室绝收。所以种植户要清楚地了解连作障碍形成的原因，为以后有效的进行预防和除治奠定基础。     

动物FABP家族基因与脂肪沉积关联研究进展

综述了动物FABP(Fatty acid binding protein,FABP)的类型、分布、结构特点与H-FABP(Hear fatty acidbinding proteint,H-FABP),A-FABP(Adipocyte fatty acid binding protein,A-FABP),L-FABP(Live fatty acidbinding protein,L-FABP),I-FABP(Ileum fatty acid binding protein,I-FABP),Ex-FABP(Extracellular fatty acidbinding protein,Ex-FABP)基因多态性及其与脂肪沉积的关联研究进展.     

罗布麻悬浮细胞生长特性及产绿原酸的初探

【目的】探索罗布麻(Apocynum venetum Linn.)悬浮细胞生长特性和产绿原酸量的最佳激素浓度,为进一步以罗布麻悬浮培养的细胞生产绿原酸奠定前期基础。【方法】以罗布麻悬浮细胞系为材,确定最佳接种量和细胞生长曲线,培养获得的材料经干燥、粉碎后经超声波法提取,以高效液相色谱法(HPLC)测定其中的绿原酸(CGA)量。以绿原酸量为指标,进行方差分析,确定最佳的植物生长调节剂的浓度。【结果】将罗布麻细胞悬液抽滤,以1.0 g(FW)/10 mL的接种量接种在MB(硝酸钾加倍,硝酸铵减半)+2.0 mg/L 2,4-D+0.05mg/L 6-BA+50 g/L蔗糖(pH 5.9)培养基上,对数生长期为4~8 d。以上述接种量和5 d培养周期为条件,将获得的罗布麻细胞接种在不同NAA和KT浓度的培养基上培养,产绿原酸量最大的培养基为MB+0.3 mg/LNAA+0.3 mg/L KT+50 g/L蔗糖(pH 5.9),产量达0.183 mg/g(DW),与其它培养基相比在P=0.05水平上差异显著。【结论】通过罗布麻悬浮培养的细胞产绿原酸最佳培养基为MB+0.3 mg/L NAA+0.3 mg/L KT+50 g/L蔗糖(pH 5.9)。