小麦WPBF与高分子量谷蛋白基因上游Prolamin-Like box的特异结合

【目的】克隆普通小麦胚乳特异表达转录因子基因WPBF,对其原核表达条件进行优化,并验证其编码蛋白和小麦高分子量谷蛋白亚基基因（HMW-GS）上游Prolamin-Like box的结合特性,为小麦HMW-GS表达调控机制的阐明奠定基础。【方法】利用RT-PCR扩增得到WPBF编码区,将其连接到pET-21a-MBP载体中,并分别在E.coli T7 Express和Origami B（DE3）菌株中诱导表达。依次利用Amylose和Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,最后通过凝胶迁移阻滞试验（EMSA）对重组蛋白的DNA结合特性进行分析。【结果】在33℃的Origami B（DE3）菌株中表达含MBP和His双标签的重组WPBF大部分以可溶性形式存在,其表达量占细菌总蛋白的48.0%。重组WPBF和含HMW-GS上游Prolamin-Like box的两类DNA探针能发生特异结合,但重组WPBF和含“TGCAAAG”基序DNA探针的结合强度高于其和含“TGCAAG”基序DNA探针的结合。【结论】建立了优化的WPBF原核表达系统,并获得具有生物活性的重组蛋白;重组WPBF能与HMW-GS启动子来源的两种Prolamin-Like box特异性结合, 但结合能力存在差异。     

美洲南瓜远缘杂交亲和性研究

选取南瓜属3个主要栽培种29个材料并选配了大量杂交组合,结果表明：美洲南瓜与中国南瓜或印度南瓜进行种间杂交,美洲南瓜只适合作为父本;中国南瓜或印度南瓜的不同试材作为母本与美洲南瓜杂交,存在亲和性差异,表现在坐果率、单果种子数、种子发育程度以及有胚果实率等方面的不同;美洲南瓜种内变种间不存在生殖隔离,可通过相互杂交融合目标性状。试验总结出杂交授粉时间在上午6:30至8:30,采用全程防虫网覆盖、吊蔓栽培技术,可提高坐果率并延长种胚发育时间,改善南瓜属远缘杂交亲和性。     

小麦高分子量谷蛋白1Dx2基因启动子的克隆及功能鉴定

以小偃6号基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应扩增到1kb左右的核酸序列,将其克隆到pMD18-T载体上。经测序鉴定及序列分析后得知,该片段为小麦高分子量谷蛋白基因(HMW-GS1Dx2)上游启动子及信号肽编码区,共1050bp。将其与β-葡糖苷酸酶(GUS)基因编码序列融合,用基因枪法将构建的嵌合基因转入小麦未成熟种子及叶片,检测其瞬时表达活性。组织化学检测表明,由该启动子驱动的GUS融合基因能在种子中表达,而在叶片中却未见表达,从而证实此HMW-GS1Dx2启动子具有在小麦胚乳中高效表达的活性,为小麦胚乳生物反应器的研究奠定了基础。     

青椒保鲜试验研究

本试验对青椒分别采取三种保鲜处理，１）用０．１％的多菌灵液浸泡后装袋．２）用０．１％的多菌灵液浸泡后加高锰酸钾砖块再装袋，３）用０．１％的多菌灵液浸泡后配合使碱石灰再装袋。贮藏温度平均为１１℃。结果表明，经过５５天的贮藏，１）、２）、３）三种处理的果实平均好果率为６２％，６７．５％，７６．４％，转红率各为３２．８％、２４．２％、２８．７％，而且果实的鲜度保持如初，呼吸类型是非跃变型的果实。     

猪宰后肌肉中钙激活蛋白酶活性变化的研究

该文研究杂种野猪和本地白猪屠宰后，肌肉中钙激活蛋白酶系的活性变化，同时，对肌肉的全蛋白提取液作SDS-PAGE分析。结果表明：杂种野猪肉的钙激活蛋白酶活性较高，但表现酶活性的自溶率变化在早期较慢；电泳图谱可看到，杂种野猪蛋白降解较慢，在宰后冷藏40 h的电泳图可看到小分子物质降解较少。     

小麦Glu-D3和Glu-B3位点LMW-GS基因特异引物设计与PCR扩增

用CTAB法提取小麦基因组DNA，根据GenBank中公布的已知LMW-GS基因序列，设计并合成染色体位点特异PCR引物1～7；利用特殊小麦材料——六倍体普通小麦阿勃二体、1A、1B和1D缺体，四倍体小麦及二倍体的一粒小麦和节节麦的基因组DNA为模版，在优化的PCR体系下进行特异性扩增和引物验证。结果表明：引物3和引物4为小麦谷蛋白Glu-D     

美洲南瓜远缘杂交亲和性研究

选取南瓜属3个主要栽培种29个材料并选配了大量杂交组合,结果表明:美洲南瓜与中国南瓜或印度南瓜进行种间杂交,美洲南瓜只适合作为父本;中国南瓜或印度南瓜的不同试材作为母本与美洲南瓜杂交,存在亲和性差异,表现在坐果率、单果种子数、种子发育程度以及有胚果实率等方面的不同;美洲南瓜种内变种间不存在生殖隔离,可通过相互杂交融合目标性状。试验总结出杂交授粉时间在上午6:30至8:30,采用全程防虫网覆盖、吊蔓栽培技术,可提高坐果率并延长种胚发育时间,改善南瓜属远缘杂交亲和性。     

黄土高原代料栽培香菇技术的研究推广

本项目通过在安泽县的研究和推广 ,创立和完善了黄土高原代料栽培香菇的新技术模式 ,探讨了在我省乃至黄土高原发展香菇产业的新路子 ,摸索出食用菌技术推广的一系列技术和管理的有效措施 ,促进了科技成果的转化 ,在安泽县建成了我省最大的食用菌生产基地     

拟南芥alpha-Dioxygenase 2原核表达，纯化及亚细胞定位预测

alpha-Dioxygenase 2推测可以催化脂肪酸alpha氧化，参与植物的发育过程。从ABRC（Arabidopsis Biological Research Center）获得alpha-Dioxygenase 2基因cDNA，用带有SmaI和XhoI酶切位点的引物扩增编码区，连入pMD-T simple vector,测序无误后，双酶切将DOX2构建于原核表达载体pGEX-5X-1中，转化表达菌株BL21 (DE3) pLysS和BL21 (DE3)-RIPL codon + ,SDS-PAGE和Western Blot结果表明该基因在BL21 (DE3)-RIPL codon +表达菌株中得到了高效表达，可溶性分析表明大部分目的蛋白以包涵体形式存在，通过GST亲和柱纯化得到可溶性目的蛋白，供下一步活性分析之用。生物信息学分析表明：该基因读码框密码子中88个为E.coli的稀有密码子，占总密码子的14%。支持向量机算法对DOX2进行的亚细胞定位预测分析提示：该酶可能定位在细胞质中。