牛磺酸缓解脂质氧化日粮对黄河鲤生长性能和肠道健康的负面影响

为了探究牛磺酸对脂质氧化饲料饲喂下黄河鲤生长性能和肠道健康的影响,实验先用等量的氧化鱼油（记为OFO）替换基础日粮（记为FO）中的新鲜鱼油,接着将不同含量（0.4%、0.8% 和1.2%）的牛磺酸分别加入OFO组饲料中（分别记为T0.4、T0.8和T1.2）,对初始体重为（8.74±0.01）g的黄河鲤进行为期10周的养殖实验。结果显示,与FO组相比,OFO组的终末体质量、增重率、特定增长率和饲料效率均显著降低。上述所有指标在T0.4、T0.8和T1.2组中均显著高于OFO组。另外,OFO组中肝胰脏抗氧化酶的mRNA表达水平显著低于FO组,而牛磺酸添加组中肝胰脏和肠道的抗氧化酶mRNA表达均有不同程度的上调。与FO组相比,OFO组中的肠道消化酶活性,肠绒毛高度、肠绒毛宽度和肌层厚度均显著降低,而在牛磺酸添加组中均得到提高。同样的,OFO组中肠道微生物组成的丰富度和多样性显著降低,条件致病菌丰度明显升高,而有益菌的丰度却有所下降,这些不良现象在牛磺酸组中均得到明显改善。研究表明,牛磺酸可缓解脂质氧化饲料对黄河鲤造成的生长性能抑制、肠道组织结构破坏、消化功能下降及肠道菌群紊乱等不良影响。结合本研究结果,在氧化脂质饲料中牛磺酸的建议添加剂量为0.4~0.8%。本研究为进一步探索牛磺酸对鱼类肠道的生物学功能奠定理论基础。     

多旋翼植保无人机运动分析与结构设计

多旋翼植保无人机是近年来新兴的植保机械,其作业高效,作业成本低廉,适应性强,可跨区域作业并且极大地减少了作业过程中与农药的接触。多旋翼植保无人机施药技术逐渐成熟,机翼旋转的下洗气流有利于在施药过程中增加药液的穿透性,并且在作业过程中不会发生对作物的碾压情况,很适宜在夏大豆生长中后期进行病虫害防治作业。结合当前国内外植保喷雾技术研究现状,在基础机型的田间试验后,对植保无人机进行运动理论分析和药箱内部流体的仿真测试,提出一种稳定的植保无人机机架结构,并对重要零部件进行仿真分析。通过Solid Works Simulation对零件进行仿真分析并优化模型,使机架平台结构变得更加稳定,设计出符合现代农业生产条件的多旋翼植保无人机。     

草鱼SREBP-1-3''-UTR双荧光素酶报告载体构建及miR-33对其表达的影响

为研究草鱼(Ctenopharyngodon idella)miR-33在固醇调节元件结合蛋白-1(Sterol regulatory element binding protein 1,SREBP-1)调节脂代谢中的作用,构建了草鱼SREBP-1基因3'端非翻译区(Untranslated region,UTR)含miR-33靶序列的双荧光素酶报告基因载体。首先用PCR法获得SREBP-1 mRNA含miR-33结合位点的3'UTR序列(379 bp),与双荧光素酶报告载体pmir GLO重组后转染DH5α感受态细胞。然后经筛选和双酶切鉴定,获得含有SREBP-1基因3'-UTR的双荧光素酶报告载体:pmir GLO-SREBP-1-3'-UTR。最后在草鱼肝细胞L8824共转染miR-33mimics和pmir GLO-SREBP-1-3'-UTR,明确miR-33与SREBP-1基因3'UTR区的靶向关系。结果表明,含有SREBP-1基因3'-UTR序列的双荧光素酶报告基因载体构建成功,PCR、双酶切和基因测序证明序列与目标一致;转染pmir GLO-SREBP-1-3'-UTR的L8824细胞可表达荧光素酶,单独转染载体组的荧光素酶活性显著高于共转染载体和miR-33 mimics组(P0.05)。本研究证实草鱼SREBP-1是miR-33的直接靶基因,miR-33通过和SREBP-1 mRNA 3'UTR结合,调控SREBP-1基因的转录后表达。     

鱼类的葡萄糖感知与糖代谢调节研究进展

为加深对鱼类糖的感知与代谢调控的认识,本文综述了鱼类的葡萄糖感知与摄食调控、糖代谢调控等领域的研究进展。鱼类的下丘脑不仅是中枢葡萄糖感受器所处的主要部位,同时也是食欲调节中枢。leptin、ghrelin、CCK、NPY等内分泌因子均能调控鱼类对糖的感知与摄食。另一方面,鱼类糖代谢受到胰岛素、GLP-1、ghrelin、CCK、NPY、SS等内分泌因子和糖、脂、蛋白质等营养素的双重调节。尽管鱼类对糖的利用能力低于陆生动物,但鱼体内亦存在较完善的糖的感知、摄食与代谢调节机制。因此,将来的重点工作应在于研究鱼类中枢神经系统整合营养和内分泌等信号的机制,研究草食性鱼类、杂食性鱼类在糖耐受力及糖异生调控机制上与肉食性鱼类存在的差异。     

草鱼PGC-1β基因克隆及高糖高脂饲料对其表达的影响

为探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1β(peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator-1 beta, PGC-1β)基因在草鱼能量代谢中的作用,本研究克隆了草鱼PGC-1β基因的核心序列,并对其进行了生物信息学分析;利用Real-time PCR技术检测了PGC-1β在不同组织的表达状况;同时研究了饥饿、饥饿再投喂及高糖(糖含量45%)高脂(脂含量8%)饲料对草鱼肝胰脏PGC-1β表达的影响。结果显示,所获得的草鱼PGC-1β基因部分cDNA片段长为885bp(GenBank登录号为：KM580493.1),共编码293个氨基酸,与斑马鱼的同源性为81%;该基因在脑中的表达量最高,肠和肝胰脏次之;与正常投喂组相比,饥饿(7d)导致PGC-1β在肝脏中的mRNA水平显著升高(P<0.05),再投喂后几乎恢复到对照组的表达水平。饲喂高脂以及高糖高脂饲料(65d)后,与对照组相比,草鱼肝胰脏中PGC-1β的mRNA水平显著升高(P<0.05)。研究结果表明,PGC-1β基因在草鱼能量代谢旺盛的组织中高表达,同时饥饿处理、饲料糖和脂肪水平等营养状况显著影响PGC-1β mRNA的表达。以上提示,PGC-1β在草鱼能量代谢过程中可能起到重要作用。     

鲤irisin多克隆抗体的制备及应用

为进一步研究鱼类糖代谢与鸢尾素(irisin)之间的关系，亟需制备irisin抗体并检测其应用可靠性。本实验通过构建Rosetta-irisin表达载体，经蛋白纯化、透析、超滤后免疫小鼠，获得相应多克隆抗体并检测其特异性和抗体效价。建立irisin检测方法，检测口服葡萄糖耐量(OGTT)、RNAi实验后鲤血清irisinA和irisinB的含量变化。免疫荧光检测鲤脑、肠道、心脏、肝胰脏irisin的表达及OGTT后，检测上述组织irisin含量变化。检测鲤肌细胞分化前后FNDC5 mRNA表达差异及irisin含量变化。结果显示，Rosetta-irisin表达载体在IPTG诱导4 h对鲤irisinA/B蛋白表达较BL21-irisin表达载体提高2.3/1.6倍；irisinA和irisinB抗体效价分别为9.0×10⁴和2.7×10⁵，不存在交叉反应，可分别对鲤血清irisinA和irisinB进行测定；OGTT后，irisinA和irisinB呈现出不同的合成变化；RNAi后，irisin含量显著降低；免疫荧光结果显示，irisin在脑中表达最高，肝胰脏次之，心脏、肠道中相对较少；OGTT后，脑、肠道、心脏和肝胰脏中irisinA和irisinB荧光强度显著增加。荧光定量表达分析与免疫荧光结果显示，鲤肌细胞分化后，FNDC5和irisin含量显著降低。综上，本实验制备了高亲和力和特异性的鲤irisinA和irisinB抗体，并检测其应用可靠性。该抗体的获得为系统研究irisin对鲤糖代谢的调控机制奠定基础。同时，鲤irisin检测方法可普遍用于其他鱼类irisin蛋白质水平的定量研究。     

高糖饲料中添加沙棘粉对黄河鲤生长性能、抗氧化能力和非特异性免疫的影响

为研究沙棘粉对黄河鲤生长性能、抗氧化能力和非特异性免疫的影响，实验选用初始体重约为7.55 g的黄河鲤450尾，随机分为5组，即对照组(control组)、高糖组(HG组)、高糖+0.1%沙棘粉组(G-LSP组)、高糖+0.3%沙棘粉组(G-MSP组)和高糖+0.5%沙棘粉组(G-HSP组)，开展为期10周的养殖实验。结果显示，与高糖组相比，G-HSP组黄河鲤的增重率(WGR)显著提高。与对照组相比，高糖组黄河鲤血清和肝胰脏中丙二醛(MDA)含量升高，过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(TAOC)降低，而补充沙棘粉可减轻这些负面影响。高糖饲料抑制了肝胰脏和肌肉中nrf2mRNA的表达水平，上调了keap1 mRNA的表达水平。沙棘粉对高糖引起的nrf2 mRNA表达水平的降低和keap1 mRNA表达水平的升高有显著的抑制作用。沙棘粉可显著提高受Nrf2调控的下游转录因子(gr、cat、gpx和sod)的mRNA表达水平。此外，添加0.5%的沙棘粉能显著提高血清、脾脏和肠道中碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)活性和白蛋白(Alb)...     

高脂饲料添加地黄或山药对黄河鲤生长、血清生化指标和脂代谢的调节作用

在黄河鲤(Cyprinus carpio haematopterus)高脂饲料中添加地黄粉或山药粉,旨在探讨两种添加物能否改善高脂对鲤生长、生理和脂代谢的不利影响。分别配制基础饲料、高脂饲料(脂肪含量14%)、高脂饲料+4%地黄粉、高脂饲料+2%山药粉4种实验饲料。将360尾初始体重为(79.97±9.86)g的健康黄河鲤随机分为4组:对照组(NC)、高脂组(HLD)、地黄添加组(HLD+R)和山药添加组(HLD+Y),并分别饲喂上述饲料。养殖实验共进行12周,其中前3周饱食投喂,之后改为等量投喂。分别在第3周、第7周和第12周末进行取样,检测生长和血清生化指标、肝胰脏脂肪含量和脂代谢相关基因的表达量。结果表明:高脂饲料显著降低了黄河鲤的生长速度,而在高脂饲料中添加地黄粉或山药粉可在一定程度上改善这种作用。高脂饲料可引起黄河鲤血清谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)活性显著升高(P<0.05),地黄或山药均可显著降低血清ALT活性,而对ALP活性无影响;在前三周饱食投喂的情况下, HLD组和HLD+R组的乳酸脱氢酶(LDH)活性显著低于NC组(P<0.05),之后各组...     

黑水虻油替代豆油对草鱼生长性能、抗氧化能力和肠道菌群的影响

为研究黑水虻油替代豆油在草鱼生产实践中的效果，本实验以黑水虻油替代草鱼基础饲料中0（SO）、25%（BSO25）、50%（BSO50）、75%（BSO75）和100%（BSO100）的豆油并配制成5种等氮等脂的饲料，饲喂草鱼[初始体质量（13.37±1.07 g）]56 d后检测生长性能、体成分、血清生化指标、抗氧化能力、肠道和肝脏组织结构及肠道菌群组成等变化。结果显示，各组之间草鱼增重率（WGR）、特定生长率（SGR）、饲料系数（FCR）、肥满度（CF）、脏体比（VSI）和肝体比（HSI）变化均不显著。与SO组相比，BSO25和BSO50组血清超氧化物歧化酶（SOD）活性显著增加，SM75和SM100组的丙二醛（MDA）含量均显著降低，BSO50、BSO75和BSO100组的过氧化氢酶（CAT）活性均显著上升。BSO100组肝细胞呈现为不规则形状，血清中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）及低密度脂蛋白（LDL-C）的水平均显著高于SO组。BSO100组群落多样性指数Sobs、Shannon和丰富度指数Chao、Ace均显著高于SO组。研究表明，在本实验条件下，黑水虻油替代饲料中100%的豆油虽然不会影响草鱼的生长，能提高草鱼抗氧化能力及肠道菌群的丰度和多样性，但在BSO100组中，草鱼肝脏受损，长期饲喂会对机体产生不利影响，因此在草鱼饲料中黑水虻油不应全部替代豆油，建议替代比例不超过75%。