黑龙江省某镇肉牛布鲁氏菌感染情况调查

为了解黑龙江省B镇肉牛的布鲁氏菌病流行现状,从而评估该病在当地牛群中的流行状况及人感染布鲁氏菌的风险,本研究以估计个体及群流行率为目的,按照预期流行率0.5%,可接受误差0.3%,置信水平95%对B镇531个肉牛养殖场户养殖的3535头肉牛进行随机抽样,获得血清样本1334份,用虎红平板凝集试验和试管凝集试验两种方法检测均为阳性的牛即为布病患病牛,同时对养殖户就养殖模式、动物来源、更新方式、既往病史、养殖规模等方面进行问卷调查。血清检测结果显示,虎红平板凝集5份阳性,阳性率为0.37%,对5份阳性血清进行试管凝集试验复检,布鲁氏菌抗体全部为阴性。同时回收问卷531份,有效问卷389份,合格率73.3%。根据本次检测结果,B镇肉牛布病个体流行率接近于零,牛群中没有发现利于布鲁氏菌感染的风险因素。     

河北表层土壤中七氯残留污染现状及其空间分异特征

在河北省境内采集207个表层土壤样品,测定其中的七氯含量。结果表明,表土中七氯含量为0.297ng·g-1±0.026ng·g-1。浓度数据呈典型的对数正态分布,几何均值及标准差为0.118ng·g-1±1.113ng·g-1,此浓度范围不会通过农作物吸收对人体健康造成影响。河北境内各市土壤中七氯含量存在显著差异。实测浓度较高的秦皇岛-唐山一带、保定西部和张家口西南部等地主要与土壤有机质含量较高有关。经土壤有机碳含量标化后,沧州土壤中七氯的浓度最高,其次为廊坊和衡水。作为20世纪80年代农业施用的残留,不同地区的浓度差异与大豆、高梁等作物的栽培面积有关。     

辽宁省一起输入性小反刍兽疫紧急流行病学调查

2014年3月9-17日,辽宁省北镇市和黑山县的两个养羊户发生小反刍兽疫,为了解疫情来源并评估疫点向外传播疫病的风险,开展本次调查。调查发现本次发病局限于2户羊群中,在总共67只羊中检出24只PPR疑似病例,其中11只死亡。经临床和实验室诊断,该起疫情被确定为输入性小反刍兽疫;来源追踪分析显示发病羊来自S省某活羊交易市场;扩散风险评估结果表明,该起疫情向周围羊场扩散的风险较低。     

黑龙江省某县一起输入性小反刍兽疫暴发调查

黑龙江省某县某村自2014年3月23日起陆续发生羊只死亡情况,临床症状表现为气喘、咳嗽,鼻腔流脓性或浆液性分泌物,体温升高等,为调查本起疫情的发病原因及可能的传播风险因素,我们通过建立病例定义,现场访谈并结合实验室筛查等方法,对该起疫情开展了全面调查。结果发现疫情的流行病学史、临床症状、传播特点和实验室检测结果证明该疫情为小反刍兽疫,感染羊只系武某从S省购入的波尔山羊,与武某羊场山羊密切接触的李某20只羊中,有5只感染小反刍兽疫,而其他未与武某密切接触的5户养羊户的羊群中未发现小反刍兽疫病例。调查最终确认本次小反刍兽疫疫情为通过从S省引羊所致的输入性疫情。     

黑龙江省一起牛曼氏杆菌病疫情的暴发调查

2015年11月14日至12月14日,黑龙江省某县多个村从外县购入的牛发生不明原因的急性死亡。发病牛主要表现呼吸道症状,从发病到死亡的时间为几小时到数天不等,病死牛剖检可见严重肺炎病变。为揭示疫病暴发的主要病因,提供防控建议,结合现场流行病学调查和实验室诊断,对该次疫情开展了调查。调查结果显示:此次疫情波及6个村,发病牛多为1岁左右;时值气候寒冷;疫情发生前1周左右,有牛调运史。实验室诊断结果显示,采集的样本中均含有未分类的曼氏杆菌,其对氨苄西林和环丙沙星耐药,而对头孢曲松敏感。最终确认本次疫情是由牛群调运、寒冷气候和年龄等风险因素相互作用,诱发曼氏杆菌的内源性感染所致。     

表达H5亚型禽流感同义(Consensus)HA蛋白的重组质粒构建及体外表达

为研究禽流感病毒(AIV)H5亚型同义Consensus HA(Cons-HA5)基因的重组表达质粒在体外的表达情况,本研究通过对从NCBI流感数据库中获得的5000条H5亚型AIV的HA蛋白的序列比对、分析获得一条同义HA蛋白,将其相对应的核苷酸序列进行鸡体偏嗜性密码子优化,人工合成Cons-HA5基因并克隆于真核表达载体pCAGGS中构建重组表达质粒pCACons-HA5。将重组质粒转染293-T细胞,在激光共聚焦显微镜下观察转染后不同时间HA蛋白的表达情况,同时在转染后24 h、48 h后分别进行表达蛋白的western blot检测。结果表明,pCACons-HA5转染293-T细胞后,其表达的HA蛋白先分布于细胞质中,而后转移至细胞膜表面;westernblot鉴定结果表明,Cons-HA5重组蛋白可以与AIV多克隆血清反应分子量约为70 ku。该重组质粒的构建将为进一步Cons-HA5核酸免疫对H5亚型不同抗原群AIV的交叉保护免疫效力研究奠定基础。     

鸡传染性法氏囊病毒基因组A节段编码前体多聚蛋白的遗传踪迹分析

为研究鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)毒力变异的分子机理,本实验采用进化踪迹分析方法对GenBank中登录的28个毒力不同的IBDV参考病毒株的基因组A节段编码的前体多聚蛋白(NH2-pVP2-VP4-VP3-COOH)推导的氨基酸序列进行分析。结果表明超强IBDV与标准IBDV的差异位点集中在第299位、451位、680位、715位和751位氨基酸上;致弱IBDV与标准IBDV的差异位点在第242位、253位、330位和981位氨基酸。该结果为进一步研究IBDV的毒力变异奠定基础。     

禽流感病毒NS1蛋白在杆状病毒表达系统中的表达

为获得纯化的禽流感病毒(AIV)的NS1蛋白,将A/chicken/Guangxi/10/99(H9N2)(CK/GX/10/99)NS1全长核苷酸克隆至杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,构建了重组转移载体pFastBacHTA-NS1,然后转化入DH10Bac感受态细胞中制备重组杆粒,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得表达NS1基因的重组杆状病毒。用重组杆状病毒转染昆虫细胞sf9进行NS1蛋白的表达,通过SDS-PAGE电泳、Western blot、间接免疫荧光(IFA)对表达的目标蛋白进行分析。结果表明,构建了含NS1基因的重组杆状病毒,分子质量约30ku的重组蛋白得到了表达,为NS1的相关功能研究奠定了基础。     

禽流感分离株GD/1/96(H5N1)非结构蛋白结构建模

为预测H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1蛋白全长结构,本研究以A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)株NS1蛋白氨基酸序列为目标序列,通过同源建模以及蛋白质结构叠合预测出NS1蛋白全长单体以及二聚体初始结构,采用约束分子动力学方法对初始结构进行优化,并利用立体化学、折叠可靠性、残基包装质量等评判方法对优化后的模型进行评估。结果表明所建立的NS1蛋白全长单体及二聚体结构模型具有很高的可信度,可用于基于结构的功能研究及虚拟筛选等工作。