鹿结核分枝杆菌MPB70蛋白的表达与免疫原性鉴定

本研究以分离的鹿结核分枝杆菌DNA为模板扩增免疫原性蛋白MPB70基因,获得约590 bp片段,并将其克隆,构建原核表达载体pET-30a-MPB70,将重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导后纯化和SDS-PAGE分析,在20 ku处可见特异性蛋白条带。利用鹿结核阳性血清进行Western blotting鉴定,原核表达的融合蛋白可与鹿结核阳性血清抗体结合,并出现特异的免疫反应。该蛋白可作为特异性抗原进行鹿结核病的检测,从而为鹿结核病诊断方法的研究奠定基础。     

布鲁氏菌P39基因的克隆、原核表达及其糖基化修饰

为探究糖基化修饰对布鲁氏菌P39蛋白免疫原性的影响,本试验对布鲁氏菌P39蛋白进行了表达和纯化,并对表达的蛋白进行了甘露六糖修饰。参照GenBank公布的布鲁氏菌P39基因序列设计引物,从布鲁氏菌16M基因组中克隆P39基因片段并连接至pMD19-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取阳性菌株质粒进行酶切等鉴定,鉴定正确后构建重组质粒pGEX-6P-1-P39,对重组蛋白进行诱异表达与条件优化。利用SDS-PAGE和Western blotting对诱导表达的目的蛋白进行分析,将鉴定正确的蛋白经GST亲和层析柱纯化。通过EDC/NHS法对纯化的P39蛋白进行甘露六糖修饰,研究甘露六糖修饰后目的蛋白对巨噬细胞吞噬的影响。结果显示,本试验成功克隆了片段大小为1 206 bp的目的基因,构建了pGEX-6P-1-P39原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达了P39蛋白,该蛋白主要以可溶性形式存在。Western blotting结果显示,在约65 ku处有特异性条带。纯化后获得目的蛋白大小为43 ku,成功对目的蛋白P39进行了糖基化修饰,得到修饰产物与蛋白的摩尔比为2.3∶1。此外,糖基化修饰可显著提前蛋白激活小鼠巨噬细胞的吞噬作用时间。本试验结果可为研究甘露六糖修饰影响P39蛋白免疫原性的机制提供参考。     

感染牛布鲁菌544A的巨噬细胞蛋白质组学分析

布鲁菌在巨噬细胞内寄生改变了巨噬细胞的很多结构和功能,对牛布鲁菌强毒株544A感染的巨噬细胞和未感染的巨噬细胞全细胞蛋白进行比较蛋白质组学分析,质谱鉴定和生物学信息检索,结果显示,共有13个差异蛋白点,代表了12种蛋白质,这些蛋白主要参与细胞的代谢,细胞骨架合成,蛋白损伤修复以及基因的转录调控等生物过程。这些蛋白的发现将为进一步研究布鲁菌的感染与致病机制提示方向,同时也为深入探讨病原菌与宿主的相互作用模式奠定了基础。     

牛、羊、猪、犬布鲁氏菌病多重PCR方法的建立

The purpose of the experiment was to establish a rapid multiplex PCR detection method which could distinguish B.abortus，B.melitensis，B.suis and B.canis. According to the differences of IS711 and complete genome sequences，four pairs of primers were designed. Multiplex PCR reaction system and conditions were optimized，the specificity，sensitivity and stability of the multiplex PCR were analyzed.Through the establishment of the multiplex PCR，B.abortus，B. melitensis，B. suis and B.canis could amplify the expected fragment，the sizes of the expected fragment were 494，732，591 and 272 bp，respectively. The PCR sensitivity of B.abortus，B.melitensis，B.suis and B.canis were 1.1×10²，5.1×10²，3.5×10² and 2.5×10² CFU/mL，respectively. Detected artificially infectious samples of milk by PCR，PCR sensitivity could reach 1.0×10³ CFU/mL.The developed multiplex PCR method was simple，fast，high sensitivity，and had good prospects and important significance for the identification of B.abortus，B.melitensis，B.suis and B.canis.     

Genome Shuffling技术在微生物遗传育种中的应用

Cenome shuffling技术是在传统诱变基础上,通过细胞融合技术,对诱变后的微生物细胞进行基因组重组,从而使具有正向突变的菌株将其优点结合在一起,进而提高微生物细胞的正向突变频率及正向突变速度.本文论述了Genome shuffling的基本原理、技术过程以及该项技术的应用与发展前景.     

犬布鲁氏菌菌壳疫苗的制备简

菌壳技术是一种新型的灭活疫苗制备方法,通过非变性的灭活方式保存细菌表面多个抗原表位,所制备的菌壳可作为预防细菌病的理想疫苗。本试验从噬菌体PhiX174 DNA钓取裂解E基因,连接至温控原核表达载体pBV220,通过PCR在所构建的pBV220+E上扩增出蛋白裂解部件（protein lysis component,PLC）,该部件包含阻遏蛋白cI857、溶菌E基因及终止序列rrnbT1T2,然后将其克隆至广宿主表达载体pBBR1MCS-2中,最终将构建的广宿主裂解质粒pBBR+PLC电转入犬布鲁氏菌RM6/66中。试验结果表明,经42 ℃诱导后,广宿主裂解质粒对犬布鲁氏菌RM6/66的裂解率达100%,成功制备了犬布鲁氏菌RM6/66菌壳疫苗。本试验通过菌壳技术制备的犬布鲁氏菌疫苗对预防宠物犬布鲁氏菌病起到重要作用,同时也对人兽布鲁氏菌疫苗的研制提供新策略。     

新农村社会交往的物质动力实证揭示——以山东省为例

在市场化、国际化的背景下,以新农村社会交往为调查基础,实证性地研究了农村经济、生产发展对社会交往扩大的影响,指出农村经济、生产发展是新农村社会交往发展的物质动力.     

猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A的克隆和原核表达

原核表达猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A(catabolite control protein A,ccpA)并进行纯化,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。采用PCR方法,扩增ccpA基因序列,克隆至原核表达载体pET-28a中,转入大肠杆菌BL21中进行诱导、表达和亲和层析纯化;经Western blotting初步评价ccpA的抗原性。重组原核表达质粒pET-28a-ccpA经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约38000,能被相关抗体所识别。因此,能成功在大肠杆菌中表达猪链球菌2型ccpA,为猪链球菌2型相关调节蛋白的免疫学研究奠定基础。     

布鲁氏菌胞内寄生的研究进展

布鲁氏菌是一种能够在哺乳动物巨噬细胞内生存和增殖的兼性厌氧菌。近年来,布鲁氏菌的研究主要集中在参与细胞内寄生过程中的毒力因子及其对宿主细胞的影响。主要论述布鲁氏菌如何逃避巨噬细胞的防御及其在细胞内寄生状况。     

农村社会交往特点调查研究——以山东省为例

采用问卷调查法对山东省农村社会交往情况进行了研究,并利用SPSS软件对采集的数据进行了定量分析。研究表明:农村社会交往客观方面的特点包括交往对象、交往形式、交往范围、交往方式和工具、参加的社会组织等方面的变化;农村社会交往的主观方面包括交往满足需要的情况、渴求交往的情况、交往感受等方面的变化。农村社会交往已经呈现出时代和生产的特点。