植物病毒载体介导的可溶性甲烷单加氧酶B亚单位在蚕豆植物中的表达

用基因操作技术将编码可溶性甲烷单加氧酶B亚单位（Soluble Methane Monoxygermse-B component：SMMO-B）的基因全长序列导入来自三叶草黄脉病毒（Clover yellow vein virus；CIYVV）侵染性全长cDNA克隆的侵染性植物病毒表达载体pCIYVV／CP／W基因组的NIb／CP基因之间，构建了重组病毒克隆pCV—mmoB。用上述重组病毒克隆接种该病毒的自然寄主植物蚕豆，表现了与野生型CIYVV相同的症状。RT—PCR检测结果表明，子代病毒基因组中的外源基因获得了转录。蛋白质杂交（Western blotting；WB）检测结果表明，sMMO—B亚单位蛋白在被重组病毒克隆侵染的寄主植物中获得了表达。     

马铃薯Y病毒复制酶基因植物表达载体构建及转基因烟草的培育

用ＢａｍＨＩ／ＫｐｎＩ从重组克隆ＰＺＤ－１中切下马铃薯Ｙ病毒脉坏死株系复制酶基因，将其插入质粒ＰＲＯＤ２相庆切点中构成植物表达载体。用重组ｐＲＯＤ２转化农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＬＢＡ４４０４菌株，通过重组农杆菌侵染叶盘将复制酶基因转入烟草品种ＮＣ８９中获得转基因植株。分子生物学检测结果表明，复制酶基因在转基因烟草中获得品种ＮＣ８９中获得转基因植株。分子生物学检测     

植物抗病毒基因工程策略及其研究进展（Ⅱ）

植物抗病毒基因工程策略及其研究进展（Ⅱ）王振东，房德纯（沈阳农业大学植保系）二、复合基因策略复合基因策略是提高工程植株抗性的有力途径。目前采用的复合基因策略有３种，即两种不同基因控制一种病毒，多种基因控制病毒的混合侵染及抗虫基因和抗病基因结合控制一种...     

大白菜芜菁花叶病毒简化提纯程序的研究

大白菜芜菁花叶病毒(TuMV)沈阳分离物,是本研究组分离和纯化的毒原。在无虫温室中以人工接种于大白菜(小白口)叶片,适期收获,称重,冰冻过夜。次日加适量0.02M磷酸缓冲液,pH7.2匀浆。并进行差速离心;低速离心3000rpm,30分钟去寄主细胞器,取上清液搅拌加4％聚乙二醇(PEG—MW6000)及3％NaCl(W/V),搅拌沉淀病毒粒体,进行一系列低速及超速离心。超速离心后的沉淀物用0.01M磷酸缓冲盐液(含0.015M尿素)悬浮,得到纯化的TuMV制品。经电子显微镜检查,提纯物中含有大量单个非集聚的TuMV粒体。粒体平均长度为720nm,结构保持良好,粒体断裂现象很少。提纯物经指示植物接种测定,具侵染性。这一简化提纯法可以免去蔗糖密度梯度离心等过程,取得较为相似的效果。     

脚缚式种子点播器的试验与研究

脚缚式种子点播器是一种缚在脚上，利用人的行走重力即可完成种子点播工作的小农具。这种点播器最适用于农作物的行间套种．亦可用于连后点播或颗粒肥料点穴施肥。具有结构紧凑、价格低廉、能精量点播、改善劳动条件、降低劳动强度、加快抢种速度等特点。该点播器已由国家专利局受理实用新型专利。农诈物的行间套种与茬后点播，传统的方法是一人用极头挂穴．后面跟一人技种、掩土、镇压。每点播一穴，挖穴入和投种人都需要弯腰弓背一次，劳动条件差、强度大、效率低。特别是在套种措穴时，还会将农作物磁倒．给机械化收割造成困难。为此需设…     

柞蚕微孢子虫侵染后柞蚕5龄雌雄个体血淋巴蛋白质含量和组成的变化及差异分析

以柞蚕5龄幼虫为材料添食柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi,Np),通过测定与分析不同性别5龄幼虫血淋巴蛋白质含量和组成变化的差异,为探究柞蚕对柞蚕微孢子虫感染的免疫应答提供依据。感染柞蚕微孢子虫的不同性别柞蚕5龄幼虫的血淋巴蛋白质含量随蚕体发育进程出现不同的变化:雌性个体与雄性个体分别在添食Np后24 h与48 h,血淋巴蛋白质含量极显著增加(P<0.01),且持续至添食后96 h,其中雌性个体的血淋巴蛋白质含量又极显著高于雄性个体(P<0.01);在添食Np后120 h,雌、雄个体的血淋巴蛋白质含量与对照组无显著性差异(P>0.05)。SDS-PAGE分析表明,添食Np后的柞蚕5龄幼虫血淋巴蛋白质组成与对照组基本一致,均显示出20条分子质量在20.1～97.2 kD的蛋白条带,其中雌、雄个体在添食后96 h,大小约44 kD的蛋白条带明显加深,大小约28 kD的蛋白条带雌性个体在添食后144 h、雄性个体在添食后120 h明显加深,且雄性个体在添食后120～168 h大小约42 kD的蛋白条带明显加深,但在添食后192 h与对照组无明显差异。研究结果说明Np侵染后,柞蚕5龄幼虫血淋巴蛋白质的含量及组成均产生了一定的变化,并且雌雄个体间的变化存在差异。     

山桃稠李育苗技术探讨

分析了山桃稠李的生物学特征、分布区域和生活习性及用途,在实践和探讨的过程中,总结了培育山桃稠李苗木的经验,并详细地探讨了山桃稠李育苗的主要技术和具体管理措施。     

栉孔扇贝Foxl2蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备与检测

以栉孔扇贝(Chlamys farreri)卵巢cDNA为模板,采用PCR扩增Foxl2(forkhead box l2)基因,通过双酶切与pET-28a构建重组质粒表达载体,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,筛选鉴定阳性克隆,经测序鉴定后提取质粒转化大肠杆菌感受态细胞BL21,以IPTG诱导Foxl2蛋白表达,用SDS-PAGE鉴定表达情况,经镍柱纯化表达蛋白,通过免疫新西兰白兔(New Zealand white rabbits)制备多克隆抗体,以ELISA测定抗体效价,最后用WB(Western Blot)检测抗体特异性。结果表明,重组载体转化BL21后经1.0 mmol L~(-1)IPTG于37℃诱导6 h可产生大量Foxl2蛋白,主要以包涵体形式表达。经镍柱柱纯化可得到纯度较高的Foxl2蛋白,浓度达800 ug·mL~(-1)。免疫新西兰白兔获得多克隆抗体,效价大于1∶128 000。WB检测显示:该抗体能特异识别扇贝卵巢中的Foxl2蛋白,同时发现Foxl2蛋白在卵巢中强表达,而在精巢中几乎不表达,揭示栉孔扇贝中该蛋白具雌性性别相关性。研究成功获得效价高且能特异识别天然Foxl2的多克隆抗体,为后续深入研究Foxl2在栉孔扇贝卵巢中的功能提供了分子工具。     

寒地旱直播滴灌水稻田土壤处理杂草防治试验

选择48%仲丁灵乳油和33%施田补乳油为土壤处理剂对寒地旱直播水稻田的安全性及杂草防治效果进行了试验,结果表明:两种药剂不同剂量处理对水稻安全,水稻出苗后无扭曲、失绿、矮化等现象,且都随着喷施剂量增加平均稗草的个数、鲜重和阔叶草个数、鲜重均逐渐减少和降低。33%施田补乳油150 ml/667 m~2的剂量对稗草个数有一定防效,200 ml/667 m~2有较好的防效,150 ml/667 m~2对阔叶草株数有一定防效,200 ml/667 m~2有较好的防效;48%仲丁灵乳油150~250 ml/667 m~2对平均稗草株数有一定的防效。48%仲丁灵乳油对阔叶草个数及鲜重无防效,但有一定抑制作用。     

48%仲丁灵乳油防治寒地水稻秧田杂草试验

选择48%仲丁灵乳油对寒地水稻秧田的安全性及稗草的防治效果进行了试验,结果表明:48%仲丁灵乳油150、200、250 ml/667 m~2对水稻安全,各处理水稻出苗后无扭曲、失绿、矮化等现象,且对稗草株数和鲜重均有一定防效,且随着喷施浓度的增加防效有增加的趋势;对阔叶草株数和鲜重有一定抑制作用。