实时荧光定量PCR技术原理与应用

实时荧光定量PCR(real-ti me fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术,它具有特异性强、PCR污染少、自动化程度高等特点。作者就实时荧光定量PCR技术的主要原理及目前在分子生物学领域,病原体和肿瘤等方面的检测和诊断应用进行了概述。     

悬浮培养技术在猪圆环疫苗生产中的应用

猪圆环病毒病是猪的一种非常重要的免疫抑制性疾病,可直接破坏猪的免疫系统,并引起其他疾病的并发或继发感染。针对该病的疫苗主要为全病毒灭活疫苗和基因工程亚单位疫苗,基因工程亚单位疫苗一般利用生物反应器生产,而国内猪圆环全病毒灭活疫苗的微载体悬浮培养生产的工艺目前还处于研究阶段。     

H5N1禽流感病毒HA基因的重组腺病毒表达载体的构建

采用PCR方法扩增出禽流感病毒HA基因,将其定向插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭质粒中构建pAdtrack-H5,之后将pAdtrack-H5与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中进行同源重组,获得腺病毒质粒pAdeasy-H5,将pAdeasyd-H5经PacⅠ线性化后转染HEK293细胞株,包装出含有HA基因的腺病毒pAd-H5。结果表明:含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-H5和含有目的基因的腺病毒质粒pAdeasy-H5经PCR、双酶切及核苷酸测序鉴定无误。包装成功的腺病毒pAd-H5经绿色荧光蛋白和RT-PCR分析证实,目的基因在该细胞中成功表达。     

蛋鸡蛋壳品质下降的原因及改善措施

当前,随着蛋鸡产业的蓬勃发展,人们对鸡蛋品质的要求越来越高,蛋壳质量问题受到人们极大关注.伴随遗传育种、营养、生理等科学知识的发展及综合运用,蛋壳质量有了显著的提高.但因蛋壳的形成是极其复杂的,造成蛋壳品质下降的原因较多,如遗传、营养、疾病、环境和管理等诸多因素,故此,对蛋壳质量的研究虽然已持续60多年,但劣质蛋壳仍然是造成蛋鸡养殖经济损失的重要因素之一.     

2019年四川省部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的遗传变异分析

为了解2019年四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的遗传变异情况,采用RT-PCR方法对来自该省部分地区猪场的36份疑似PRRS猪的组织样品进行PRRSV ORF5基因测序,并对所获得的基因序列进行了生物信息学分析.结果显示,成功扩增出14条PRRSV ORF5基因片段.同源性分析显示,14条PRRSV ORF5基因序列均为基因Ⅱ型毒株,分属于1、3、8这3个不同的谱系,以NADC30为代表的谱系1和以QYYZ为代表的谱系3各5株,以JXA1为代表的谱系8毒株4株,各毒株间核苷酸和推导氨基酸的同源性分别为78.5％～100.0％、78.0％～100.0％.氨基酸序列分析结果显示,14个毒株GP5蛋白上3个主要的抗原表位上均存在广泛的变异,同时谱系1和谱系3毒株与毒力相关的位点也发生了不同程度的突变,这些突变可能影响病毒毒力及有助于病毒逃避机体的免疫系统.结果表明,2019年四川省PRRSV呈多亚型毒株同时流行的复杂局面,有必要对PRRSV的流行和变异情况进行实时监测,以此选择更为合适的疫苗毒株及免疫程序,结合严格的生物安全措施,从而达到科学防控PRRS的效果.     

荧光定量PCR方法的原理及其在研究病毒在动物体内分布规律的应用

研究病毒在动物体内的分布情况,主要是为了掌握病毒在动物体内的生长繁殖规律,找到病毒的靶细胞和靶器官,为进一步研究其致病机理和防制技术提供试验依据。荧光定量PCR法具有定量准确、特异性强、自动化程度高等特点,是研究病毒分布规律的主要方法之一,作者综述了此方法的原理及应用。     

猪乙型脑炎病的诊断与防控

猪乙型脑炎是一种人畜共患病,是由乙型脑炎病毒引起的一种急性、发热性传染病,猪是本病最重要的传染源和储存宿主。2021年7月,某养猪场发生了以母猪流产和公猪睾丸炎为主要发病特征的传染病,通过在养猪场开展流行病学调查,观察临床发病症状和剖检病理变化,结合实验室病原PCR检测、病毒分离培养、病毒含量测定、病毒中和等试验方法,确诊该养殖场感染猪乙型脑炎病毒造成发病。该养猪场通过采取加强饲养管理和疫苗紧急免疫接种等综合防控措施,取得了很好的防控效果。