猪圆环病毒2型重组衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及免疫原性分析

【目的】在昆虫细胞表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap),并对表达的重组蛋白~*Cap进行免疫原性分析。【方法】将含有PCV2-ORF2基因的重组杆状病毒质粒Bacmid-ORF2转染昆虫细胞进行蛋白表达试验,再用纯化的~*Cap和质粒pcDNA3.1-ORF2分别免疫小鼠,比较二者的免疫效果。【结果】由PCV2-ORF2基因编码的Cap结构蛋白在昆虫细胞中正确表达,相对分子质量约为32 000。~*Cap能够被PCV2阳性血清所识别,具有良好的抗原性。~*Cap免疫组在细胞免疫水平及体液免疫水平的免疫效果均优于pcDNA3.1-ORF2免疫组。【结论】重组蛋白~*Cap可替代全病毒,具有PCV2疫苗潜在的应用价值。研究结果为后续的PCV2病毒分子诊断、亚单位疫苗以及分子生物学等研究奠定试验基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白多克隆抗体的制备及其中和活性研究

为了制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白鼠源多克隆抗体并验证其中和活性,试验采用RT-PCR方法扩增了PRRSV的ORF7基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a中,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中表达重组N蛋白,纯化重组N蛋白制成弗氏佐剂抗原,采用皮下多点注射法免疫Balb/c小鼠,经3次免疫后获得多克隆抗体,用间接ELISA法检测抗体效价,以血清中和试验和间接免疫荧光法验证其中和活性。结果表明:试验成功扩增了大小为390 bp的ORF7基因片段,经双酶切和序列测定,重组表达质粒pET-32a-N构建成功,重组N蛋白分子质量约为28.0 ku,制备的多克隆抗体效价较高,重组N蛋白多克隆抗体按照1∶2、1∶4和1∶8比例稀释时,荧光数量与不加多克隆抗体时比较无明显区别。说明在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功表达了PRRSV重组N蛋白,制备的鼠源多克隆抗体能够与重组N蛋白发生特异性反应,但没有抗PRRSV中和活性。     

猪圆环病毒研究进展

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是迄今发现的最小的动物病毒之一.PCV具有PCV1和PCV2两种基因型.PCV1无致病性.PCV2有致病性,它不仅是断奶猪多系统衰竭综合症(Post -weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原(Bolin等,2001;McNeilly等,2001),而且是其他诸多传染病的病原之一.世界各国的兽医与养猪业者认为它是继猪繁殖与呼吸道综合征之后新发的重要的猪传染病,引起了国内外学者的广泛关注.     

兽用狂犬病疫苗的发展

狂犬病病毒只有一种血清型,世界各地的狂犬病毒抗原性质是相同的。当前大部分国家所用的兽用狂犬病疫苗主要有三种,即弱毒苗、灭活疫苗和基因工程疫苗。当前我国兽用的有灭活苗和弱毒苗两种,但是随着生物和分子生物学技术的发展,新型狂犬病疫苗已经逐渐走进研究者的视野,例如多肽疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗、活载体疫苗及植物疫苗等。随着兽用狂犬病疫苗的发展迅速,科学家们对其的研究也越来越深入,相信在不久的将来,狂犬病会得到很好的控制。     

猪圆环病毒研究进展

猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV）是迄今发现的最小的动物病毒之一。PCV具有PCV1和PCV2两种基因型。PCV1无致病性。PCV2有致病性,它不仅是断奶猪多系统衰竭综合症（Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS）的主要病原（Bolin等，2001；McNeilly等，2001），     

猪圆环病毒感染浅析

正猪圆环病毒感染是指由猪圆环病毒2型(PCV2)引起的包括仔猪断奶后的多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)、生长育肥猪皮炎与肾病综合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)和母猪的繁殖障碍等为主的一类疾病。本文简要分析了该病的病原特征、流     

猪圆环病毒2型ORF2截短基因的原核表达与纯化

对重组原核表达载体pET-ORF2的表达条件进行优化,结果表明,最佳IPTG诱导浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时间为5h。在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的基础上,利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,再分别用SDS-PAGE电泳和Westernblotting对纯化产物的纯化效果及特异性进行检测,结果显示表达产物纯化良好,并能被PCV-2阳性血清识别,具有良好的抗原性。     

应用原核表达的猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白建立一种间接ELISA诊断方法

本试验在最佳诱导条件下获得猪圆环痛毒Ⅱ型重组Cap蛋白的基础上，利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化，通过Westernblot检测证明表达产物具有良好的抗原性。以纯化后的重组融合蛋白作为诊断抗原，对ELISA反应条件进行优化，初步建立了检测PCV2抗体的间接ELISA方法。用该法对广东、广西一些地区收集到的380份血清样品进行检测，检测结果阳性率为86．1％，从中随机取90份猪血清样品与国产商品化试剂盒检测结果对比，符合率为95．6％，表明本实验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性，适于大规模检测PCV2血清抗体的流行病学调查。     

基于B/S结构的基础理论类课程试题库与在线考试系统分析

随着现代通信技术、数据库技术和计算机技术在高等教育领域中应用的不断发展,教育方式及手段也在不断的更新,现代化的教学手段应当配合现代化的考试手段。本文从课程内容入手,以基础理论课程的在线考试系统为切入点,论述了基础理论类课程在线考试系统的研究与设计。     

猪流行性腹泻病毒nsp1、nsp5和N蛋白的重组腺病毒载体的构建及免疫原性比较

为研究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)nsp1、nsp5和N蛋白的免疫原性,试验以复制缺陷型人腺病毒5型(AdMax系统)为载体,利用PEDV-GDgh毒株(登录号为MG983755),通过PCR方法扩增出GDgh毒株nsp1、nsp5、N基因,并将其连接到腺病毒穿梭载体上,构建重组穿梭质粒。将3个重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体共转染至HEK-293A细胞中获得第1代重组腺病毒,分别命名为rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N。用第1代3株重组腺病毒接种HEK-293A细胞,连续传代,通过RT-PCR和Western-blot方法鉴定第3代重组腺病毒,并采用Reed-Muench法计算病毒半数组织培养感染剂量(TCID₅₀)。以3株重组腺病毒的第3代病毒液免疫小鼠,收集血清并检测特异性IgG抗体水平。结果表明：试验成功构建出带有nsp1、nsp5、N基因的重组穿梭质粒;分别用重组腺病毒rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N感染正常HEK-293A细胞,可产生典型的细胞病变并观察到荧光信号;...