方斑东风螺“脱壳病”病原及病理初步研究

为明晰方斑东风螺"脱壳病"的病原或病理,对东风螺"脱壳病"进行了病原分离纯化、病原菌形态观察、组织病理观察、人工感染试验,并对病原菌16S rDNA序列进行PCR扩增和测序,以及系统发育树分析。试验中分离纯化了3种纯菌W、B、Y。致病菌W杆状,端生单鞭毛。致病菌Y杆状,两端略尖,周生菌毛。致病菌B短杆状,无鞭毛。结果显示,患病个体和人工感染个体的腹足及连壳肌肉组织均出现明显病变,肌纤维受损,出现空腔,并存在细菌;肝胰腺组织无明显病变,但血细胞显著减少。腹足肌注射人工感染试验结果表明,致病菌W在3种细菌中毒力最强。混合菌感染的毒力在混合比例接近原始比例时达到最大。致病菌B与报道的鲍希瓦氏菌相似度为99%;致病菌Y与报道的哈维弧菌相似度为98%;致病菌W与报道的变形假单胞菌相似度为99%。推测致病菌W、B、Y可能是此次方斑东风螺脱壳病的重要病原菌。     

非洲猪瘟病毒pS273R蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

本研究旨在表达非洲猪瘟病毒（ASFV） pS273R蛋白,并制备其多克隆抗体,为ASFV pS273R的功能研究提供材料。试验通过大肠杆菌表达系统表达重组pS273R蛋白,采用镍亲和层析柱和分子筛纯化重组pS273R蛋白并免疫BALB/c小鼠制备血清,经Protein G琼脂糖树脂纯化鼠抗pS273R蛋白多克隆抗体,通过Western blotting、间接免疫荧光（IFA）和免疫沉淀试验（IP）分析多克隆抗体的反应原性和特异性。结果显示,在16 ℃、1 mmol/L IPTG诱导条件下,pS273R蛋白以可溶形式高效表达,经纯化并免疫小鼠后,通过Protein G可以纯化出高质量的鼠抗pS273R的多克隆抗体。以制备的多克隆抗体为一抗,通过Western blotting、IFA和IP检测到HEK293T细胞中瞬时表达的Flag-pS273R蛋白和ASFV感染肺泡巨噬细胞（PAMs）中的pS273R蛋白。本研究在大肠杆菌中实现了ASFV pS273R蛋白的高效表达,制备并纯化的抗pS273R多克隆抗体具有较高的反应性和特异性,这为深入探讨ASFV pS273R蛋白的生物学功能奠定了基础。     

略论茶道中的哲学意蕴

茶与哲学的关系源远流长,中国茶文化与中国传统哲学在历史的发展中相互影响并相互渗透,最终形成了系统的中国茶道文化。本文在对中国茶道内涵作出论述的基础上,从中国茶道与儒释道哲学之间的关系以及中国茶道中的哲学精神两个方面对中国茶道所具有的哲学意蕴进行了探讨与研究。     

湿地松采脂与林分生长的关系

湿地松。原产美国，1951年泾县马头林场引种栽培：由于湿地松早期生长快，适应性强，木材质量好，松脂产量高，现已成为泾县营造丰产林的主要树种之一，目前已有湿地松人工林27万亩。从上世纪90年代初，泾县在湿地松林分中进行采脂，但是采脂林分起始年龄、林木胸径、强度等因素的差异，影响到林木的生长。为此，笔者于2003～2007年以来进行了湿地松不同年龄、径阶的采脂试验及调查分析。现将初步结果报道如下：     

猪圆环病毒1型感染性克隆的构建与病毒拯救

用PCR法扩增猪圆环病毒1型（PCV1）全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pUC19质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalI酶切位点作为分子靶标,拯救出带有分子标记的克隆病毒,命名为recPCV1／G株。通过免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）在病毒感染细胞中检出病毒抗原,其抗原性仅与PCV1／Cap蛋白单价特异性抗体发生反应,而与抗PCV2／Cap蛋白抗体无交叉。克隆毒株基因组内插入一个SalI酶切位点,可用PCR结合限制性片段长度多态性分析法（PCR-RFLP）与亲本病毒相鉴别。该毒株经细胞连续传10代,体外培养增殖性能稳定,病毒滴度达10^4.8 TCID50/mL。构建的PCV1感染性克隆,为今后开展该病毒的起源与演化、遗传变异规律、分子鉴别诊断等研究奠定了基础。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其体外传代遗传变异分析

从临床"高热综合征"病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代和蚀斑克隆.培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR.该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),随传代次数增加毒价显著提升,第45～60代毒价测定达107.5TCID<,50/mL.采用免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原分布在细胞浆中;电镜观察到的病毒粒子呈圆形,直径约50 nm～55 nm.分离株Nsp2基因序列中第483位和535～563位氨基酸存在缺失,属PRRSV变异株.该毒株Nsp2基因序列比较发现,经细胞传40代后第3 115位核苷酸处插入12个碱基序列(GAGATCGCCTTT).用该毒株第5代培养物滴鼻接种试验猪(1.0×104.5TCID<,50),临床表现为持续高热(≥40.5℃,9 d～12 d)、食欲下降、精神萎靡、消瘦、眼睑水肿、体表淋巴结肿大等,发病率为100%(10/10),死亡率为30%(3/10).研究表明,PRRSV-HBR分离株对靶动物具有高致病力,培育的细胞适应毒株体外繁殖能力稳定,并产生了标志性基因突变,为该病毒致病机理、遗传变异规律、疫苗免疫等研究奠定了基础.     

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白作为检测抗原,建立一种间接ELISA方法用于血清抗体检测。昆虫细胞株（Sf-21）接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化,制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7%左右;Ni2＋亲和层析柱纯化获得重组蛋白纯度为90.1%;重组蛋白可被特异性抗体识别,具有良好的免疫活性。用建立的ELISA法对30份已知阴性血清样本检测临界OD405nm值为0.343;ELISA与IPMA对150份血清进行平行检测符合率为95.3%,特异性为91.2%,敏感性为96.5%;与其他几种常见猪病毒参考血清无交叉反应。组装的试剂盒批内和批间变异系数分别为4.0%～4.8%和8.9%～9.9%;置-20℃保存12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果,接种后第5周抗体阳转,第8周～9周抗体水平达到高峰;对来自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场1085份血清抗体检测,阳性率为73.6%。研制的ELISA试剂盒为临床PCV2血清抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。     

我国马铃薯茎尖培养脱毒和脱毒试管苗微繁研究进展

简述了近十年来,我国在马铃薯茎尖培养脱毒、脱毒试管苗微繁殖、种质离体保存方面取得的重要进展并提出培养室污染控制和处理的方法及培养瓶内害虫的处理方法。     

抗猪圆环病毒2型Cap蛋白中和性单克隆抗体的制备及鉴定

以纯化的杆状病毒表达的重组猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白(PCV2-rCap)免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞瘤杂交技术获得了5株稳定分泌抗PCV2-rCap蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为1D2、2E8、3A10、5F2和6F10.这5株杂交瘤细胞诱导同品系小鼠产生的腹水抗体效价分别为1:2 048 000、1:512 000、1:1 024 000、1:512 000、1:1 024 000;其中1D2、2E8、5F2和6F10单抗亚类为IgG2a,仅3A10为IgG1;2E8、3A10、5F2和6F10单抗轻链为入型,仅1D2轻链为K型.Western blot结果显示,这5株单抗中2E8、3A10、5F2和6F10可与自然PCV2-Cap发生反应,而1D2无反应.IPMA和抗原捕获ELISA结果表明,ID2单抗可与PCV2病毒蛋白发生反应,而与PCV1无交叉反应;病毒中和试验证实,1D2单抗具有中和活性,是一株针对PCV2-Cap蛋白中和表位的单抗.这些单抗的制备为PCV2抗原表位分析及分子诊断提供了技术手段.     

基层动物防疫存在的问题与对策

近年来,高致病性禽流感、口蹄疫、蓝耳病、猪链球菌病等动物疫病的流行,给畜牧业发展造成了重大的损失,严重威胁公共卫生安全,对重大动物疫病防控工作提出了严峻挑战,如何做好重大动物疫病防控工作已经成为社会普遍关注的问题。尽快建立一支政治素质好、业务过硬、乐于奉献的动物防疫监督执法队伍,制定一套行之有效的执法人员工作程序、监督管理机制,加强动物防疫监督执法人员对相关基础知识的学习己是当务之急。1当前动物防疫工作中存在的主要问题我国的动物管理工作一直受传统管理机构限制。其主要