龙眼果实贮藏品质理化指标评估体系的构建

【目的】构建龙眼Dimocarps longan果实贮藏品质理化指标评估体系,实现龙眼贮藏品质的简便、有效评估.【方法】以30个品种龙眼果实为试验材料,运用多元统计分析方法,包括因子分析、回归分析、分层聚类等,对果实的贮藏性能进行综合评估与分类,建立贮藏品质预测模型.【结果和结论】分别获得了30个品种龙眼果实不同贮藏效果的综合评分,包括常温果皮褐变和质量损失率、低温果皮褐变和果肉自溶,其结果与对应不同时期的贮藏效果指标均显著相关.分别建立了龙眼果实在不同贮藏温度下不同贮藏效果的数学预测模型,筛选出有效预测指标:常温贮藏品质理化指标包括熟性、外果皮a*值和可溶性固形物(TSS)含量,低温贮藏品质理化指标包括果皮龟状纹、果肉总糖含量和风味,从而构成了贮藏品质评估理化指标库.对30个品种果实在常温和低温下的贮藏能力进行分类,均获得了4个类别的分类结果.     

香蕉果实MaNPC1基因原核表达及多克隆抗体制备

【目的】对香蕉果实非特异性磷脂酶C基因（MaNPC1）开放阅读框（ORF）进行原核表达,并制备其多克隆抗体,为深入探究MaNPC1在香蕉果实抵御炭疽病中的作用机制提供理论依据。【方法】克隆MaNPC1基因ORF序列,对其进行生物信息学分析及抗原性预测,并通过双酶切法构建其原核表达载体,利用热激法转入大肠杆菌Rosetta 2（DE3）感受态细胞中进行诱导表达,重组蛋白经Ni-NTA树脂层析柱纯化后免疫新西兰兔,以制备多克隆抗体。同时,运用Western blotting和实时荧光定量PCR分别检测香蕉果实贮藏过程中在炭疽病侵染胁迫下MaNPC1蛋白表达水平及MaNPC1基因相对表达量。【结果】重组质粒pGEX-6p-3-MaNPC1经双酶切后得到1650 bp的特异性条带,说明原核表达载体构建成功,将其转入大肠杆菌Rosetta 2（DE3）感受态细胞后成功表达。MaNPC1蛋白分子式为C₂₇₄₇H₄₂₄₉N₇₆₉O₇₉₃S₁₀,分子量为61.06 k D,理论等电点（pI）为8.96;丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和丝氨酸含量较高,分别占氨基酸总数的8.7%、8.2%、7.8%和7.7%;不稳定指数为47.14,表明其为不稳定蛋白;蛋白抗原区段丰富且亲水性氨基酸数目明显高于疏水性氨基酸,有利于后续抗体的制备。制备的多克隆抗体效价较高,为1∶2048000。Western blotting检测发现,香蕉果实贮藏过程中MaNPC1蛋白表达水平呈上升—下降—上升的变化趋势;炭疽病侵染组MaNPC1蛋白除贮藏15 d时的表达水平比对照组低外,其他贮藏时间均略高于对照组。实时荧光定量PCR检测结果表明,MaNPC1基因相对表达量在香蕉果实贮藏过程中呈逐渐上升趋势;贮藏3~15 d,炭疽病侵染组MaNPC1基因相对表达量均显著高于对照组（P<0.05）。【结论】炭疽病侵染能提高MaNPC1蛋白表达水平,故推测MaNPC1蛋白参与香蕉果实抵抗炭疽病侵染。     

植物非特异性磷脂酶C的研究进展

非特异性磷脂酶C(non-specific PLC,NPC)能够水解磷脂酸胆碱和磷脂酰乙醇胺生成二酰基甘油(diacylglycerol,DAG),虽然非特异性磷脂酶C没有PLC家族基因的C2、X、Y、EF等结构域,但它仍含有1个磷酸酯酶结构域,能够水解磷脂。近年来研究发现,非特异性磷脂酶C在植物逆境胁迫和信号转导的过程中起着重要的调节作用。因此本文对非特异性磷脂酶C的结构、生理功能及其作用机制进行概述,并对其研究前景进行了展望。     

荸荠查尔酮异构酶基因的克隆与表达分析

查尔酮异构酶(CHI)是植物黄酮合成途径的关键酶,为了研究鲜切荸荠贮藏过程中表面黄化的机理,利用RACE技术对荸荠CHI基因编码区cDNA全长进行克隆,并分析其在不同组织和鲜切荸荠贮藏过程中的表达。结果表明,荸荠CHI基因(CwCHI)cDNA序列长度为1 003 bp(GeneBank:MG719238),含有一个744 bp的最大开放阅读框,其DNA包含3个内含子和4个外显子。Cw CHI可编码247个氨基酸,经预测其分子量为26.410 kD,理论等电点为4.89。Cw CHI蛋白的二级结构以α-螺旋为主,占38.06%。通过多重比对发现,CwCHI具有该家族特有的保守结构域,决定底物偏好性的第201位氨基酸为Ser,与其他Ⅰ型CHI蛋白相同。系统进化分析表明CwCHI与油棕榈和菠萝的CHI蛋白亲缘关系较近。荧光定量PCR分析表明,CwCHI基因在荸荠皮中的表达量最高,而在荸荠肉中的表达最低。鲜切荸荠黄化过程中CHI活性和CwCHI表达量快速上升,水杨酸处理抑制了CHI活性的上升和CwCHI的表达。     

龙眼亚硫酸盐氧化酶(DlSO)基因的克隆及表达分析

【目的】探讨龙眼果实亚硫酸盐氧化酶基因(DlSO)在硫残留生物降解中的作用。【方法】以龙眼总RNA为模板,采用RT-PCR结合RACE法获得龙眼亚硫酸盐氧化酶基因全长cDNA序列,命名为DlSO;运用荧光定量PCR对其表达量进行分析;使用ClontechIn-Fusion技术构建原核表达载体,使其在Rosetta(DE3)大肠杆菌中表达。【结果】DlSO序列全长1413bp,包含一个1182bp的开放阅读框,一个长37bp的5’非翻译区序列和194bp的3’非翻译区,预测编码393个氨基酸;同源性和系统进化分析结果均表明DlSO与毛果杨SO亲缘关系最近;荧光定量结果表明,在龙眼不同组织中,DlSO基因都有表达,其中在叶片中表达量最高,其次是花、幼果、根和果肉,在茎和果皮组织中DlSO基因的表达量最低;成功构建pET-32a-DlSO原核表达载体,经IPTG诱导后在Rosetta(DE3)大肠杆菌中成功表达。【结论】克隆了龙眼亚硫酸盐氧化酶基因(DlSO),并且成功构建了pET-32a-DlSO原核表达载体,经IPTG诱导在大肠杆菌中成功表达出融合蛋白,为下一步研究龙眼亚硫酸盐氧化酶的作用奠定了基础。     

百香果果腐病病原菌的分离鉴定及防治药剂毒力测定

为明确引起百香果果腐病的病原菌种类并筛选出有效防治药剂，采用组织分离法对病原菌进行分离、纯化，结合病原菌的致病性检测、形态学特征及分子生物学分析对该病原菌进行鉴定，明确分离获得的菌株为藤仓镰刀菌（Fusarium fujikuroi）。室内毒力测定结果表明：10%苯醚甲环唑水分散粒剂、50%肟菌酯水分散粒剂和80%多菌灵可湿性粉剂等药剂对藤仓镰刀菌均有一定的抑制作用，其中10%苯醚甲环唑水分散粒剂对藤仓镰刀菌的毒力最强，EC50值为0.000 20 mg/L;50%肟菌酯水分散粒剂和80%多菌灵可湿性粉剂对藤仓镰刀菌的抑菌效果次之，EC50值分别为0.003 60、1.751 97 mg/L。综上，引起百香果果腐病的病原菌为藤仓镰刀菌（F.fujikuroi），且病原菌对10%苯醚甲环唑水分散粒剂、50%肟菌酯水分散粒剂和80%多菌灵可湿性粉剂等药剂敏感。本研究结果为百香果果腐病的化学防治提供了理论基础。     

不同机械伤处理对香蕉果皮活性氧代谢的影响

为探究不同机械伤处理对香蕉果皮活性氧代谢的影响，该研究以"桂蕉6号"为材料，采用划伤、穿刺、坠落3种不同机械伤处理，以未处理组为对照，测定贮藏过程中香蕉果皮活性氧代谢的变化，并进行相关性分析和主成分分析。结果表明，3种不同机械损伤处理均加速了香蕉果实硬度和叶绿素含量的下降；引起O2-产生速率和H2O2含量的积累，其中划伤处理组的O2-产生速率在贮藏第8 天为对照组的2.0倍，H2O2含量为对照组的2.5倍，这可能与机械伤处理抑制了果皮组织中过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶及抗坏血酸过氧化物酶活性有关；同时，3种不同机械损伤处理加速细胞膜脂过氧化的进程，造成香蕉细胞膜透性及丙二醛含量的升高，其中对照、划伤、穿刺和坠落处理组的丙二醛含量在贮藏第8 天分别是贮藏初期的3.3、3.4、5.4和7.5倍。；此外，划伤和穿刺处理均可显著提高香蕉果皮中PPO活性（P <0.01)。相关性聚类热图分析表明，H2O2含量与香蕉果实硬度、叶绿素含量和抗坏血酸过氧化物酶活性呈极显著负相关（P <0.01)，与超氧化物歧化酶活性呈显著负相关（P <0.05)；同时，多酚氧化酶活性与H2O2含量、丙二醛含量和细胞膜透性呈现极显著正相关（P <0.05)。结合主成分分析可知，不同机械伤处理均可加速香蕉果皮活性氧的积累进而导致香蕉果实的衰老腐败，其中划伤处理对香蕉果皮活性氧代谢影响最大，其次是穿刺处理，坠落处理对香蕉果皮活性氧代谢影响最小。该研究阐明了香蕉果实机械伤、活性氧和贮藏品质三者的关系，并为香蕉采后不同机械伤控制提供理论依据。     

32个龙眼品种果实有机酸组分及含量特征分析

以32个龙眼品种为试材，利用高效液相色谱法（HPLC）对成熟龙眼假种皮中有机酸组分和含量进行测定，并通过聚类分析和主成分分析对龙眼果实中有机酸组分特征及含量进行总结。结果表明，32个龙眼品种果实假种皮在成熟时期总酸含量差别很大，其范围为1.129～2.549 mg/g，乌龙岭的总酸含量最高，其次是驼背木、晚柴螺和青壳宝圆，水涨的总酸含量最低。龙眼果实的有机酸以苹果酸为主，含量为0.369～1.690 mg/g，占总酸含量的52.98%，是典型的苹果酸型果实，此外还含有抗坏血酸、酒石酸、草酸、α-酮戊二酸、琥珀酸、富马酸等。相关性分析结果表明，苹果酸含量与总酸含量呈极显著正相关，α-酮戊二酸含量和琥珀酸含量与总酸含量均呈显著正相关。根据苹果酸含量可以将32个龙眼品种分为高苹果酸积累型、中间型和低苹果酸积累型。