中国抗虫棉GFM Cry1A杀虫基因的合成及表达载体构建

根据苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry1A(b)和Cry1A(c)的氨基酸序列,采用植物偏爱密码子,人工合成了全长1824bp的融合GFM Cry1A Bt杀虫基因,并构建了带有多个表达调控元件的该基因高效植物表达戢体pGBI1214AB,以及该基因和修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因的双价杀虫基因植物表达载体pGBI1214ABC。经在烟草中验证,这两种表达载体在植物中可高效表达并赋予转基因烟草抗虫性。为我国抗虫棉的研究打下了基础。     

双价杀虫基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达

本文报道了抗虫植物基因工程研究中的新进展－转双价杀虫基因烟草的获得。用ＰＣＲ方法来自豇豆的胰蛋白酶抑制基因进行了修饰,在基因５‘及３’端分别加入了克隆所需地ＰｓｔＩ和ＳａｃＩ限制性酶切位点,去除了原基因５‘端非翻译区序列,并进一步定点突变了基因内存存在的ＥｃｏＲＩ位点。     

融合杀虫基因植物表达载体的构建及转基因烟草的获得

 构建了人工合成的 GFM Cry IA杀虫基因和经过修饰的 Cp T 基因的融合杀虫基因高效植物表达载体p GBIF4 ABC。通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草 ,获得 4 2株卡那霉素抗性植株 ,经棉铃虫杀虫试验表明 ,3株表现高抗 ,14株表现中抗 ,2 5株感虫。对其中 7株烟草植株进行 PCR和 Southern印迹 ,4株烟草基因组中有融合杀虫基因的整合 ,为转基因植株。其中 2株的抗虫性为高抗 ,1株中抗 ,1株不抗     

转基因抗虫杂交棉湘杂棉8号

1选育经过湖南省棉花科学研究所以具有自主知识产权的转基因“国抗棉1号”选系为父本,以本省选育的高产、优质、抗病棉花品种选系为母本,1997年从138个抗虫杂交棉组合中筛选出高优势组合湘K-5,1998年进行多点不同处理的田间试验。1999年参加湖南省抗虫棉预备试验,2000-2001年参加国家长江流域区试。2000年进入国家“863”专项计划中的“国家转基因植物研究与产业化开发专项”。2002年参加长江流域棉花生产试验,2001年申报安评生产性试验,2003-2004年完成安全性评价试验,2004年获得湖南、湖北省安全证书,2005年3月通过国家农作物品种审定委…     

植物monellin甜蛋白基因的细菌化改造合成及其在大肠杆菌中的表达

根据西非植物Dioscoreophyllum cumminisii果实中分离到的monellin甜蛋白的氨基酸序列,首次按照细菌优化密码子,人工合成了全长294bp的monellin甜蛋白基因。克隆后序列分析表明,所获得基因与设计相符。构建了该基因的表达载体pGESP9。经42℃诱导表达,发现所合成甜蛋白基因可在大肠杆菌BL21中高效表达,表达量占菌体可溶性蛋白的22.8%。分离纯化monellin,经测定其甜度是相同重量蔗糖的1100倍,且甜味纯正持久。     

苏云菌芽胞杆菌毒蛋白基因导入甘蓝获得抗虫转基因植株

苏云菌芽胞杆菌（Ｂｔ）毒蛋白对鳞翅目等昆虫有良好的特异性抗虫效果,转Ｂｔ基因为害虫防治和环境保护开辟了一条全新的途径。本试验采用根癌农杆菌介导的方法,成功地将Ｂｔ毒蛋白基因ＧＦＭＣｒｙＩ Ａ导入到甘蓝中,并获得了抗虫转基因植株。１材料与方法１．１植物...     

透明颤菌血红蛋白基因的植物化改造合成及其在大肠杆菌中功能的鉴定

 根据透明颤菌血红蛋白（VHb）的氨基酸序列，按照植物偏爱密码子，对透明颤菌血红蛋白基因（vgb）进行优化改造，同时考虑到可实现分别克隆拼接的酶切位点，设计并合成了22条单链DNA短片段，通过拼接获得了全长450 bp的透明颤菌血红蛋白基因vgbM，并将其克隆至pUC19上，获得重组质粒pGSVHB。利用设计的引物，通过PCR在vgbM基因的5′端引入NcoⅠ位点，将其克隆到原核生物高效表达载体pBV221上，获得质粒pBV221SVHB。转化E.coli. BL21并经热激诱导表达后，在培养物中检测到了约16 kD的VHb蛋白。经CO差示光谱分析测定，该蛋白具有生物活性。为透明颤菌血红蛋白基因vgbM在植物基因工程研究中的应用奠定了基础。     

中国转基因抗虫棉研究又取得新进展

中国是世界产棉大国，由于虫害的连年发生，给棉花生产造成了巨大的经济损失。为解决制约棉花生产发展的这一重大难题，笔者承担了国家“８６３”棉花抗虫基因工程研究课题。目前取得的新进展如下。１．转Ｂｔ杀虫基因抗虫棉研究根据Ｂｔ杀虫蛋白质的氨基酸序列，按照植物...     

优化的VHb基因和融合杀虫基因在烟草中的表达

将人工合成的、密码子优化后的透明颤菌血红蛋白(VHb)基因(vgbM)与含有融合杀虫基因(GFMcryIA和CPTI)表达载体pGBIF4ABC构建成双价基因植物高效表达载体pGBIF4ABCVHB,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化烟草(Nicotiana tabacum),经PCR及Southernblot检测,证实了双价基因在32株转基因烟草基因组中整合。Westernblot检测证实了vgbM基因的表达,杀虫实验表明,融合杀虫基因表达的毒蛋白具有杀虫活性,转基因烟草平均每株干重高于非转基因烟草植株8%。表明VHb基因和融合杀虫基因烟草在烟草中的表达可使烟草可增产,又具抗虫性。     

The Study on the Transformation and Selection of Insect-resistant Cotton Harboring Double-gene

采用花粉管通道法，将人工合成的ＧＦＭＣｒｙＩＡ和修饰的ＣｐＴＩ杀虫基因导入棉花优良品种（系）中棉所２３、中棉所２７、中９４０９和中９０系。经田间选择和室内生物鉴定，已获得了转基因抗虫植株。依据生物鉴定结果，对所获得的抗虫材料进行了ＰＣＲ分析，结果证明Ｂｔ和ＣｐＴＩ基因均整合于相应的抗虫材料染色体基因组中，通过自交选育，双价抗虫基因能够传递至ＺＧＫ９７０８抗虫材料Ｒ３代。抗虫鉴定表明，双价抗虫基因能够遗传，后代抗虫性稳定；在获得的Ｒ１代植株中，不同转化体对棉铃虫的抗性存在着差异。