青海省玛柯河川陕哲罗鲑数量变动及原因分析

玛柯河是长江流域岷江水系一级最大支流大渡河干流在青海省河段的名称,为大渡河的正源。玛柯河是岷江上游川陕哲罗鲑的主要产卵繁殖水域。青海省渔业环境监测站自1998起通过数年对玛柯河实地考察,分析了川陕哲罗鲑在玛柯河分布数量锐减的原因,并就保护川陕哲罗鲑提出具体措施。     

光照对川陕哲罗鲑受精卵孵化的影响

为了解光照强度和光照周期对川陕哲罗鲑(Hucho bleekeri kimura)受精卵孵化的影响,设置4个不同光照条件(24 h黑暗、12 h黑暗∶12 h强光、24 h强光、24 h弱光),比较川陕哲罗鲑受精卵的孵化率和孵化时间。结果显示:川陕哲罗鲑均保持较高的孵化率,其中,24 h黑暗组的孵化率为(63.75±3.31)%,显著低于其他3个试验组;24 h弱光组的孵化率为(82.08±2.60)%,显著高于其他3个试验组。在不同发育阶段,各个试验组的川陕哲罗鲑受精卵死亡率高度一致,死亡较高的时期主要集中在细胞期-囊胚早期和孵化期。从孵出时间来看,24 h黑暗组和24 h弱光组的孵出时间略早于其他2个试验组,各组分别历时23.5 d(24 h黑暗)、25.5 d(12 h黑暗∶12 h强光)、25.5 d(24 h强光)和24.5 d(24 h弱光)完成整个胚胎发育过程。     

细鳞鲑、哲罗鲑两种授精方法效果的比较

细鳞鲑(Brachymystax lenok)、哲罗鲑(Hucho taimen)在人工繁殖过程中常用两种授精方法,即干法授精和湿法授精。为找到哪种授精方法更有效,受精率更高,更有利于生产,对两种授精方法进行了对比试验。结果表明:在同等条件下细鳞鲑、哲罗鲑干法授精较湿法授精效果好,受精率分别提高9.63%和4.46%。     

哲罗鲑养殖试验初探

哲罗鲑(图见彩中插2)又名哲罗鱼,属鲑形目、鲑科、鲑亚科、哲罗鱼属,属冷淡水鱼类。为进一步探索人工养殖技术,我们于2006年8月以来分两批引进试养了哲罗鲑并获成功。     

哲罗鲑胰岛素样生长因子-I的原核表达及活性鉴定

为进一步了解哲罗鲑IGF-I,实验采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从哲罗鲑肝脏的总RNA中扩增出胰岛素样生长因子-I(IGF-I)的c DNA开放阅读框(open reading frame,ORF)序列。利用原核表达载体p S构建重组表达质粒(IGF-I/p S),并将其转化到宿主大肠杆菌Rosetta后经IPTG诱导获得重组哲罗鲑IGF-I蛋白。经SDS-PAGE电泳检测,在35~50 ku有条带与预期相符,且重组蛋白以包涵体的形式存在。包涵体经变性/复性实验后,获得纯化的IGF-I融合蛋白。ELISA鉴定结果显示,目的蛋白能特异性识别抗鱼类IGF-I抗体,表明获得了具有免疫活性的哲罗鲑IGF-I蛋白。细胞增殖实验(MTT法)结果显示,重组IGF-I蛋白对大麻哈鱼胚胎细胞(CHSE-214)、鲤上皮细胞(EPC)及虹鳟性腺细胞(RTG-2)均有显著促增殖作用,表明获得的重组IGF-I蛋白具有细胞水平的生物活性。本研究为深入了解IGF-I在哲罗鲑生长发育中的调控机制及绿色高效促生长制剂的研发奠定基础。     

盐碱回归水哲罗鲑人工孵化和稚鱼培育试验

为充分利用盐碱回归水发展渔业产业,丰富景泰冷水鱼养殖品种。试验通过引进哲罗鲑发眼卵在盐碱回归水中开展人工孵化、上浮稚鱼的开口、稚鱼培育。试验证明景泰县盐碱回归水适宜于哲罗鲑孵化及稚鱼培育。     

哲罗鲑生殖周期中血清卵黄蛋白原浓度的ELISA检测

采用柱层析、蛋白免疫印迹和电泳等方法对哲罗鲑(Hucho taimen)的卵黄脂磷蛋白进行研究,并以其鼠抗和兔抗血清为抗体建立了夹心酶联免疫反应(ELISA)对生殖周期中哲罗鲑血清卵黄蛋白原浓度的变化进行检测.结果表明,哲罗鲑卵黄脂磷蛋白分子量在460 ku,并且由3个亚基组成,分子量分别为137.8 ku、84.2 ku和10.8 ku.蛋白免疫印迹表明,卵黄脂磷蛋白抗血清与雄鱼血清无特异性反应,而与雌鱼血清有特异的反应.本研究建立的双抗体夹心ELISA检测灵敏度为7.8 ng/mL,批内变异系数为4.06%,批间变异系数为4.58%,工作范围为30～2 000 ng/mL,在该范围内标准曲线具有良好的线性和重复性.生殖周期中哲罗鲑血清卵黄蛋白原浓度由每年6月份产孵后的最低值573.4 ng/mL升高到12月份的最高值1 918.2 ng/mL,卵黄积累持续期为6个月,整个生殖周期中血清卵黄蛋白原浓度只出现一个高峰期,表明人工养殖条件下,性成熟哲罗鲑的生殖周期为1年.     

几种添加剂对哲罗鲑生长和血液生化指标的影响

将哲罗鲑Hucho taimen在室内玻璃钢水族箱中用流水饲养,研究了小肽、柠檬酸、氯化钠和大蒜素对哲罗鲑（6．35g±0．21g）摄食、生长、体成分和血清生化指标的影响。养殖周期为56d,水温9．2—14．1℃。结果表明：在基础饲料中添加质量分数为1％的小肽后,显著提高了哲罗鲑的增重率和特定生长率（P〈0．05）,血清总蛋白、白蛋白和球蛋白含量也显著升高（P〈0．05）,而体成分与对照组差异不大（P〉0．05）;饲料中添加质量分数为0．5％柠檬酸和1．0％氯化钠对哲罗鲑摄食率、增重率和特定生长率影响不显著（P〉0．05）,0．5％柠檬酸组哲罗鲑血清甘油三酯、胆固醇和高密度脂蛋白较对照组显著降低（P〈0．05）;饲料中添加25mg／kg大蒜素显著降低了哲罗鲑的摄食率、增重率和特定生长率（P〈0．05）,鱼体水分升高（P〈0．05）,粗蛋白和粗脂肪降低（P〈0．05）,血清生化指标变化不显著（P〉0．05）。     

哲罗鲑卵子和卵腔液的生化组成与其发眼率的相关性

为了解哲罗鲑(Hucho taimen)卵子及卵腔液的生化组成及其与发眼率的关系,采用生物化学的方法对雌性哲罗鲑Ⅴ期卵子及卵腔液的酶、蛋白质﹑氨基酸﹑维生素和矿物质等组成和含量进行了测定,并且将各组份与哲罗鲑受精卵的发眼率进行了回归分析。结果表明:哲罗鲑Ⅴ期卵子中含有碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、谷草转氨酶、琥珀酸脱氢酶﹑Mg2+-ATP酶﹑磷﹑钙离子﹑铁离子﹑维生素C和维生素E。卵子中Mg2+-ATP酶活力≥8.3×10-5μmol(Pi)/(min.mg prot)、磷含量在12.97~23.0 3μmol/g(卵)之间及氨基酸含量在574.89~1195.40μmol/g(卵)之间,哲罗鲑卵的发眼率均≥80%。哲罗鲑的卵腔液中含有碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、谷草转氨酶、琥珀酸脱氢酶、磷、钙离子、铁离子、维生素C和维生素E,当谷草转氨酶酶活力≥18.14μmol/(min·L),哲罗鲑卵的发眼率≥80%。哲罗鲑Ⅴ期卵子中Mg2+-ATP酶活力、磷含量﹑氨基酸含量以及卵腔液中谷草转氨酶酶活力与其发眼率存在着显著相关性。     

额尔齐斯河与黑龙江流域哲罗鲑群体遗传差异比较

由于拦河筑坝、水体污染以及过度捕捞等原因,哲罗鲑(Hucho taimen)野生资源急剧衰退,已被列入中国脊椎动物红色名录,急需开展哲罗鲑野生群体的恢复与保护工作,人工增殖放流已成为最重要的保护方式之一。为了开展科学有效的哲罗鲑人工增殖放流工作,分析其不同来源群体的遗传多样性与遗传差异非常必要。通过测定来自我国额尔齐斯河(IR)、黑龙江(AR)以及人工繁殖(AP,亲本来源于黑龙江流域)的3个哲罗鲑群体线粒体DNA部分序列(COI和D-loop),并从GenBank下载来自俄罗斯鄂毕河(额尔齐斯河下游河流)、黑龙江流域的部分D-loop序列,比较额尔齐斯河与黑龙江流域哲罗鲑的遗传差异。结果表明,在测定的43尾个体中,线粒体DNA测序长度为2 626bp,共检测出37个多态位点,定义了18个单倍型,单倍型多样性为0.520～0.952,核苷酸多样性为0.00032～0.00167,其中IR群体的单倍型多样性最高,AR群体核苷酸多样性最高,而AP群体单倍型与核苷酸多样性均最低。分子方差分析(AMOVA)显示,77.19%的遗传变异来源于群体间,总遗传分化指数(Fst)为0.7719(P0.01),表明两个流域的哲罗鲑群体间存在显著的遗传分化。无论是仅使用本研究测定的样品,还是加入从GenBank下载的俄罗斯哲罗鲑样品,聚类分析结果均表明存在两个明显的单倍型谱系分支,额尔齐斯河流域哲罗鲑为单独一支,黑龙江流域哲罗鲑聚为另一支。建议加强人工繁殖哲罗鲑的遗传管理和不同水域哲罗鲑增殖放流的遗传学论证,有效维持自然水体哲罗鲑的遗传多样性水平。