猪IL-18 mRNA定量RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank中猪白介素(IL)-18基因序列,设计1对引物,用RT-PCR技术从猪肺泡巨噬细胞总RNA中扩增出其411 bp cDNA片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,经转化、筛选阳性克隆、酶切与测序鉴定后,构建出含猪IL-18 cDNA部分片段的重组质粒。后用反向PCR技术构建出与扩增411 bp片段共用同1对引物,但缺失174 bp的竞争重组质粒。通过上述2种质粒的竞争PCR方法,建立了猪IL-18 mRNA的标准竞争曲线,得到其直线回归方程^y=0.583 2x-2.903 4(R2=0.9898)。     

猪CD80 mRNA定量检测方法的建立

用RT-PCR技术从猪肺泡巨噬细胞中扩增和克隆了猪CD80基因部分片段,经测序鉴定后,用反向PCR技术构建了CD80的缺失竞争cDNA分子。通过竞争PCR方法,建立了CD80标准竞争曲线,并得到其直线回归方程。本方法操作简单,特异性和敏感性高,可用于猪CD80 mRNA水平的定量检测,从而为分析猪的免疫状态提供了一种重要技术手段。     

不同精液稀释液常温保存绵羊精液的效果

分别用9种绵羊精液稀释液对5只绵羊公羊的精液进行常温(12℃～15℃)稀释保存试验,从中筛选出对绵羊精液稀释保存效果较好的5种稀释液配方(A、B、C、D、E),稍加改进后继续在常温条件下处理稀释绵羊的精液,并将5种稀释保存的绵羊精液分别给5组(每组6只)体况膘情较好的发情母羊进行人工输精。经过1个发情期(18～21d)后观察,5种稀释保存精液输精的母羊分别有4只、5只、4只、5只、5只未返情,表明已经受孕,其未返情率分别为66.67%、83.33%、66.67%、83.33%、83.33%。经各组间未返情率的百分数差异显著性检验分析,各组间未返情率差异不显著(P>0.05)。     

PRRSV和PCV2共感染对猪肺泡巨噬细胞CD80-CD86mRNA转录的影响

用猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）与猪圆环病毒2型（PCV2）共感染40日龄健康大白仔猪，利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞（PAM）共刺激分子CD80一CD86的mRNA转录水平进行了定量分析。结果表明，在感染后第3d和第7dCD80与CD86mRNA转录显著下调（P〈0．05），感染后第14dCD86mRNA转录水平仍低于未感染对照组。尽管CD80mRNA转录水平在第14d和第28d高于对照组，CD86mRNA转录水平在第28d高于对照组，两者在第42d均高于对照组，但无显著差异。证实，PRRSV和PCV2共感染可导致猪肺泡巨噬细胞的共刺激分子CD80-CD86基因转录在感染早期明显受到抑制，PAM的抗原呈递能力受到影响。     

实施单元内疫病防治——湖南某村取得防控高致病性猪蓝耳病成功举措的情况介绍

导读：笔者对高致病性猪蓝耳病防治工作的现状和存在的问题进行了调查，发现了疫情本身的新特，占、和积极有效的指导及措施缺位，是目前疫病防治工作中存在的主要问题。文中提出，本次疫情的暴发，防控工作被动的一个重要原因就在于应急处置方案不科学，未能及时将其纳入重大动物疫情防治范畴。由于专业主管部门未能及时集成流行病学、预防兽医学、临床兽医学、动物营养学、动物药物学、中兽医学、物流学、公共管理学和经济学等学科专家的智慧，提供一个科学严谨的实施工作方案，使政府在领导这项工作时，难免陷入被动茫然的境地，造成工作重点不突出、面面俱到，将大量人力、物力、财力用到了非关键点上，甚至造成了浪费、加速扩大了病毒污染面。高致病性猪蓝耳病防治实践中有一个耐人寻味的现象，就是政府、部门和养殖场（户）互相埋怨，相邻地区互相指责，似乎谁都尽了力，但总合起来的工作效果却不佳。这提示我们务必将动物疫病防治作为一个系统工程来抓，统筹兼顾，只有有关方面各负其责、各司其职、精诚协作，形成强大工作合力，才能打好高致病性猪蓝耳病阻击战。当前必须从探寻、破解疫病流行规律，杜绝病猪异动、控制扩散蔓延，落实基本养殖单元的防治措施、确保基本养殖单元防治工作到位等三个方面紧急应对，并指出应迅速革除目前防治工作中的诸多弊病，建立突发动物疫病防治长效机制，从根本上确保高致病性猪蓝耳病等突发新疫情能迅速得到预防、控制和扑灭。[编者按]     

嵌合猪圆环病毒的构建

[目的]为了构建猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)的嵌合病毒,并为PCV2疫苗研究奠定基础.[方法]以PCV1基因组为骨架,将其衣壳基因替换为PCV2衣壳基因,来构建嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)DNA克隆,将PCV1-2 DNA克隆转染PK-15细胞以获得拯救病毒PCV1-2,并测定PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性.[结果]酶切和序列测定显示成功构建出PCV1-2 DNA克隆;免疫荧光试验和PCR检测显示成功获得拯救病毒PCV1-2,其效价达到1060 TCIDs0/mL以上;一步生长曲线显示PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性与其亲本病毒近似.[结论]成功构建了1种具有较高体外增殖能力的嵌合猪圆环病毒.     

基于高效液相色谱法的苦参指纹图谱研究

【目的】旨在建立苦参高效液相色谱指纹图谱。【方法】采用Waters Atlantis?T3色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5.0μm),流动相为0.01 mol/L乙酸铵(0.045%浓氨水)和乙腈,流速1.0 mL/min,梯度洗脱,色谱柱温度30℃,检测波长225 nm。检测12批苦参样品,建立指纹图谱,进行相似度评价、聚类分析和主成分分析。【结果】建立了苦参的高效液相色谱指纹图谱,苦参样品的相似度在0.940～0.998之间,共标定出23个共有峰,并通过标准品确认了其中5个,分别为氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、苦参碱和槐果碱。聚类分析将12批苦参样品分为4类,主成分分析后23个共有峰缩减为4个主成分。【结论】该方法快速可靠,稳定性和重复性好,可用于苦参的质量控制。     

嵌合猪圆环病毒对仔猪的免疫保护研究

为分析嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)对仔猪的免疫效力,检测了PCV1-2免疫诱导仔猪产生抗猪圆环病毒II型(PCV2)感染的保护性免疫。将10头28日龄健康普通仔猪随机平均分成两组,一组肌注免疫106.05TCID50 PCV1-2作为免疫组;另一组不予免疫作为对照。到免疫后28天,免疫组仔猪血清中PCV2 ORF2蛋白抗体全部转为阳性。在免疫后28天,所有仔猪经口鼻予以106.95TCID50 PCV2攻击。攻毒后,免疫组仔猪全部保持临床健康,而对照组仔猪全部出现了PCV2疾病的临床症状;免疫组血清和淋巴组织中PCV2 DNA载量均显著(P<0.05)减少;对照组仔猪淋巴组织普遍出现中度到重度的淋巴细胞减少与组织细胞浸润,而免疫组没有。研究数据表明：PCV1-2免疫诱发了仔猪对PCV2感染的保护性免疫,有望成为候选PCV2弱毒疫苗。     

猪圆环病毒1型北京株全基因组克隆及序列分析

参照GenBank上猪圆环病毒1型（PCV1）全基因组序列设计1对引物,用PCR技术从北京一猪场的临床发病猪病变组织中扩增和克隆获得1株PCV1全基因组序列,并进行序列测定和分析。全基因组序列结果显示,该株PCV1基因组全长为1759bp,与国内外其他各株PCV1的核苷酸同源性为99．4％。主要开放阅读框（ORF）序列结果显示,该分离株与国内外其他PCV1毒株间的ORF1与ORF2的核苷酸同源性分别在97．5％～99．8％和92．7％～100％。虽然各个PCV1分离株之间的全基因组与主要ORF的核苷酸同源性均很高,但仍然呈现出一定的地域相关性。