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为了查清浙江省目前流行的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的基因型,我们收集了5个不同疫区的IBV(肾病变型J、W、X、N;腺胃病变型ZJ971)和参考株H120,分别对其S1基因cDNA进行HaeⅢ、StyⅠ、PstⅠ、Ksp632Ⅰ的RFLP分析。结果表明IBV-J、W、X、N株的RFLP基因类型相同,但与古老的肾病变型代表株(即T株、Gray株、Holte株)、国内外报道的肾病变型毒株及呼吸型H120株均不同,是一种新的RFLP基因类型;IBV-ZJ971株的基因型与H120相同。 相似文献
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家蚕成品卵微粒子病McAb-ELISA检测方法的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用纯化的微孢子虫抗兔多抗包被,做为捕获抗原,加入检测样品,然后用辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体作为检测抗原,并对各步实验条件进行优化,建立检测家蚕微孢子虫的双抗体夹心ELISA检测方法.试验结果表明,多抗最适包被浓度为10 ng/mL,最适包被条件为4℃过夜,酶标二抗工作浓度为1:2000,待检样品和酶标二抗的反应时间分别为37℃ 1.5h和1h,底物37℃显色15min.此方法对纯化孢子的检测量为3.125×105spores/mL,对体外"添毒"蚕卵的检测量为5×106spores/mL. 相似文献
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从浙江省某麻鸭养殖基地的产蛋下降病鸭生殖器官内分离到1株致产蛋锐减、不致鸭死亡的病毒,经鉴定该病毒属于禽副黏病毒1型,命名为YH99V株。该毒株经动物回归试验能成功诱导鸭发病并回收同样的病毒,通过SPF鸡胚盲传至第9代时致病性突然增强,第11代出现血凝特性,第15代血凝价趋于稳定,鸡胚半数致死量EF15ELD50为10-4.8。MDT、ICPI和IVPI毒力学指标测定以及毒力相关基因序列结构分析表明,分离株的MDT为112h,ICPI为0.225,IVPI为0.41;YH99 V株F0蛋白裂解位点(112~117位)区域氨基酸推导序列为Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu,与弱毒株相一致。证明该毒株为新城疫弱毒株。 相似文献
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鸭新城疫病毒和流感病毒多重RT-PCR鉴别诊断技术的建立和应用 总被引:1,自引:3,他引:1
对同样以引起鸭产蛋下降为主要特征的鸭流感病毒(AIV)分离株和鸭新城疫病毒(NDV)YH99V分离株,通过设计特异性引物和优化体系反应条件,建立了一种早期快速鉴别诊断鸭AIV和鸭NDV的单项RT—PCR方法和多重RT—PCR方法,AIV的扩增片段大小为483bp,NDV的扩增片段为310bp,电泳快速,易于区分。敏感性试验表明,该方法比HA敏感100倍以上;对AIV、YH99V、IBV、IBDV及正常鸡胚尿囊液的混合液检测显示,多重RT—PCR法具有很强的特异性。对鸭病毒性产蛋下降征侯群送检病料的检测证明,该方法能有效鉴别AIv和/或NDV单独感染或混合感染,阳性检出率明显高于HA方法。 相似文献
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基于为蚕种生产与流通贸易提供快速、灵敏、准确检测家蚕微孢子虫的方法,以家蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA基因66 bp片段作为靶标,设计特异性引物和TaqMan探针,用构建的重组质粒制备标准品进行荧光定量PCR扩增,通过优化PCR反应体系,测定线性范围,评价方法的特异性、灵敏度和重复性,成功构建了家蚕微孢子虫的荧光定量PCR检测方法,并研制出诊断试剂盒。该方法的检测线性范围为1×108~1×102拷贝/mL的7个线性梯度,检测家蚕微孢子虫的敏感度达1×102拷贝/mL,特异性高,3次重复性检测应用试验的批内变异系数为3.6%~7.2%,批间变异系数为5.2%~7.8%。结果表明,建立的家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法具有准确、灵敏、快速、特异性强的特点。 相似文献
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家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想。研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法,采用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析所得DNA的完整性和所得总蛋白的差异性,并对提取蛋白进行双向电泳试验。结果表明:使用玻璃珠破碎法对微孢子虫孢子壁的破碎率可达到90%以上,基因组DNA得率约为7.65 fg/粒,总蛋白得率约为788.3 fg/粒,均显著高于常用的发芽法和液氮冻融研磨法的得率。双向电泳结果显示玻璃珠破碎法能有效提取家蚕微孢子虫总蛋白,经考马斯亮蓝染色可检测到约350个蛋白点,蛋白信息丰富,可进一步用于质谱分析。 相似文献