猪戊型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法的建立及其分子流行病学

对已发表的戊型肝炎病毒(HEV)不同基因型毒株全序列进行分析,针对ORF3的保守区设计引物和探针优化建立了HEV荧光RT-PCR检测体系。分析表明该反应体系具有良好的扩增效率、特异性和稳定性,且检测灵敏度比普通RT-PCR方法高10～100倍。利用所建立的荧光定量PCR方法对采集自浙江及其周边上海、江苏等地区规模化猪场的样品以及HEV抗体阳性人血清样品进行了HEV核酸检测。其中,77份人血清样本仅有2份为HEV核酸阳性(2.6%)。而猪粪便样品阳性率则高达20.5%(56/273),且所调查的猪场均存在HEV感染。进一步的分子流行特征分析表明,浙江及周边地区的猪HEV毒株多为基因Ⅳ型,与其他地区的Ⅳ型HEV毒株同源性较高(83.4%～89.5%),但它们之间也存在较多的变异位点。猪源HEV毒株PJ-1则与多数Ⅲ型HEV毒株同源性较高(88%),进化分析也表明其为基因Ⅲ型。人血清样品中检测到的2份HEV毒株Human-1与Human-2与本地区Ⅳ型猪源毒株在分子进化关系上具有很高的亲源性,它们分布于同一分支内,而不构成独立分支。以上分析结果表明浙江及其周边地区猪HEV感染较为广泛,且以基因Ⅳ型毒株为主,但也存在...     

鸭Ⅰ型禽副粘病毒YH99V株F基因的克隆和序列分析

从患病鸭群中分离到一株引起鸭产蛋锐减而不死亡的病毒,经鉴定该病毒属于Ⅰ型禽副粘病毒,命名为YH99V株。以YH99V株的基因组RNA为模板,用RT-PCR一步法扩增出其F基因的cDNA序列,然后将其克隆至pMD18-T载体中,对其进行序列测定。结果表明,所克隆的基因片段长度为1 750 bp,含有1个1 662bp的开放式阅读框架(ORF),编码553个氨基酸。将YH99V株F基因序列和推导的氨基酸序列与国内外新城疫毒株的F基因相应序列比较后发现,它们的核苷酸序列同源性分别在82.7%-99.6%,氨基酸序列同源性为87.2%-99.3%。YH99V株在F蛋白裂解位点区的氨基酸序列与弱毒株在这一区域的序列完全相同,表明为弱毒株。根据F基因的全核苷酸序列,进一步绘制了Ⅰ型禽副粘病毒株F基因的系统发育树。分析结果显示YH99V株与Lasota等参考毒株同属于基因Ⅱ型,表明它们具有较近的亲缘关系。     

斑点金标免疫渗滤法诊断家畜血吸虫病的敏感性和特异性

研制成家畜血吸虫病斑点金标免疫渗滤法（DIGFA）诊断试剂盒可测出人工感染血吸虫14—42d的病牛、猪和兔的血清及血纸抗体，比病原体检查法提早28d查出病畜，达到早期诊断的要求；同时亦能检出仅感染1对血吸虫病牛抗体，证实DIGFA具有较高的敏感性。血吸虫与肝片吸虫、锥虫、蛔虫、囊虫和旋毛虫病之间未见交叉反应现象，说明本法具有较强的特异性。     

一种非EDSV引起的鸭传染性减蛋症

自1999年5月以来，浙江省许多产蛋鸭发生了一种以产蛋率锐减为特征的新疾病，其中某地区67户养鸭专业户，共饲养蛋鸭15.7万羽，陆续进入产蛋高峰期后，有2375 羽鸭群的产蛋率突然下降，由原来的91.2%减到52.7%，同时伴有畸形蛋、沙壳蛋，蛋质低劣，蛋清稀薄，除少部分病鸭伴有烦躁不安和吵棚外，鸭群的精神体态基本正常，采食量略有下降，一般不引起死亡。起初养鸭户都误认为是当地饲料厂供应的饲料所致，后来发现该病具有传染性，疫病主要沿河流自上而下蔓延。在此后1个多月时间内，共有49户养鸭户12.3 万羽蛋鸭相继发病，产蛋率下降幅度为20%～80%，使用各种抗菌药物治疗无效，提高饲料营养也不起作用。该病发病急，传播迅速，通常在2～3天内产蛋率由80%～90%以上下降到30% ～40%，有的甚至更低，产蛋率越高，感染后下降幅度往往越大。病鸭从产蛋下降到康复需3 -7周时间，恢复后不能达到标准产蛋曲线，产蛋周期缩短。剖检病鸭主要表现为生殖器官病变，卵巢卵泡减少、萎缩，输卵管蛋白分泌部缩小，蛋白分泌腺减少，子宫萎缩，有的严重病例可见卵黄性腹膜炎，肝、心、肾和肺有斑点出血。该病的临床症状类似于减蛋综合征（ EDS）［1］，但是，用减蛋综合征灭活苗免疫预防不能有效保护。作者对病鸭体作无菌检查并分离了病毒（命名为YH99株），用0.2 μm滤器过滤后，经人工感染易感蛋鸭能成功诱导典型发病，再从病鸭中回收到同样病毒。将YH99株与鸡源减蛋综合征病毒（EDSV-AV127）［2～4］和鸭源减蛋综合征病毒［3］（EDSV-JE 1，由上海市畜牧兽医站周锦萍提供）进行比较，结果发现：     

几种鸡新城疫油佐剂灭活疫苗免疫效果的比较

比较研究了鸡新城疫(ND)二价灭活苗、ND灭活苗、进口ND灭活苗、ND强毒(CNDV)灭活苗和ND克隆-30弱毒苗的免疫效果。结果表明,不同ND疫苗首次免疫鸡所产生的抗体有差异,ND二价灭活苗免疫鸡的抗体上升最快,免疫后20 d左右可达到最高峰。1日龄免疫,14日龄攻毒,ND二价灭活苗、ND灭活苗的保护率分别为5/5,4/5;10日龄和10日龄以上免疫,免疫后7 d或7 d以上攻毒,ND二价灭活苗、ND灭活苗、进口ND苗的保护率分别为4/5~5/5,2/5~5/5,0/5~2/5。攻毒后ND二价灭活苗、进口ND灭活苗免疫的与对照鸡的肛棉拭子NDV阳性数分别为0/5,5/5,5/5。结果表明,ND二价灭活苗免疫效果优于进口ND灭活苗、ND强毒灭活苗,稍优于ND灭活苗。     

枇杷疏穗、疏蕾、疏果技术

枇杷疏穗、疏蕾、疏果技术枇杷疏穗、疏蕾和疏果的作用是调节树体负荷。减少养分消耗，促进穗、花、果正常生长发育，增大果实，提高品质，促进早熟和克服大小年。１疏穗．在冬季温暖的四川枇杷产区可疏迟穗、弱穗、侧穗，以及树冠外围和上部过多的花穗。多留主穗、强穗。...     

致麻鸭产蛋下降的副粘病毒的分离和鉴定

从浙江省某麻鸭养殖基地产蛋锐减的病鸭生殖器官分离到1株致产蛋下降、不致鸭死亡的病毒株(YH99V)。该病毒易感蛋鸭，经SPF鸡胚传至第9代时致病性突然增强，第11代出现对鸡红细胞的血凝特性，通常在42～80h致死SPF鸡胚，EF15EID50为10^1.8。经磷钨酸负染电镜观察，YH99V粒子呈现圆形、杆状形、葫芦状形等多形态，直径70～400nm不等，病毒外表有囊膜，囊膜外层有排列整齐的纤突。病毒粒子和包涵体位于细胞浆内。病毒抵抗力由弱到强依次为：0．2%甲醛、24h-56℃、45min→紫外线、1h→乙醚≈氯仿≈37℃、16h—pH9→pH5→1％Try。对人眼结膜易感，鸭眼结膜不易感。接种传代细胞BHK-21、IBRS-2均能引起细胞病变。YH99V株与同样引起鸭产蛋下降的AIV、鸭源EDSV无抗原相关性，而能被禽副粘病毒Ⅰ型阳性血清中和。根据试验结果，初步将YH99V判定为鸭副粘病毒。     

北缘茶区茶树秋季扦插育苗技术

通过引进茶树良种,在北缘茶区代表地一～宁强县进行秋季无心土短穗扦插育苗试验,从地块选择、土壤整理、短穗扦插、苗期管理等方面,总结出适宜在北缘茶区建圃繁育无性系良种茶苗的实用技术要点,为北缘茶区规模化建圃繁育无性系茶苗积累了实际经验。