天津地区鸡大肠杆菌病病原分离及病原特性

从天津地区１０个区县、２３个养鸡场的２４１只疑似大肠杆菌病病例中,分离出病原菌９２株,所得菌株符合大肠杆菌的微生物学特性。致病性在各菌株间略有差异。分离菌对氟哌酸、庆大霉毒、氯霉素最为敏感。抗“Ｏ”血清型鉴定,结果表明,分离菌株分属２５个血清型,并以Ｏ１１１、Ｏ８９、Ｏ８６、Ｏ３０、Ｏ７８为主。从优势血清型中选取的菌株,均具有良好的抗原性。     

猪瘟病毒E0基因在CHO细胞中的表达

将EGFPE0融合基因插入哺乳动物细胞表达载体pCI-dhfr中,构建重组质粒pCI-EGFPE0。将重组质粒转染CHO(dhfr-),在荧光显微镜下观察到少数细胞呈现绿色荧光,表明转染成功。通过MTX加压筛选后,在荧光显微镜下观察到多数细胞呈现强绿色荧光,表明重组融合蛋白EGFPE0在CHO细胞中得到大量表达。高效表达重组融合蛋白细胞克隆的获得为进一步大量制备可溶性的猪瘟病毒E0糖蛋白、制备其单抗筛选抗原表位及研究E0蛋白的生物学功能奠定基础。     

梨火疫细菌实时荧光PCR和诱捕PCR-ELISA检测方法的建立

根据梨火疫细菌中独特而保守存在的质粒pEA29，设计了1对引物和3条探针，建立了实时荧光PCR检测方法和诱捕PCR-ELISA检测方法。实时荧光PCR采用带荧光标记的核酸杂交探针，边扩增边检测，步骤简单，不需PCR后处理，可避免假阳性和交叉污染；诱捕PCR-ELISA检测方法只需简单处理的样品就能检测，减少了核酸不纯出现的漏检，由于增加了核酸杂交探针，可不需凝胶电泳EB染色检测，不会出现假阳性问题。     

有机硒和维生素E对寿隐杂交鸡抗热应激性能的影响

通过向日粮中添加不同水平有机硒(0,0.15mg/kg)和维生素E(10,30,100IU/kg),测定热应激不同阶段试验鸡肝脏、肾脏及血清中丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果表明,日粮中添加有机硒和维生素E可明显降低肝脏、肾脏及血清中MDA的含量(P<0.05),提高GSH-Px活性,增强机体的抗氧化能力,提高试验鸡的抗热应激性能。     

维生素E对绵羊鲜精及冻精精液品质的影响

日粮中添加维生素E可以提高绵羊鲜精的活率 ,对照组和试验组的活率分别为 0 72± 0 0 7和 0 78± 0 0 6(P <0 0 5 ) ,显著改善鲜精精液品质。采用两步稀释法在绵羊冷冻精液稀释液中添加维生素E ,可以极显著降低冷冻对精子顶体的冷刺激损害程度 ,试验组的活率 ( 0 43 5± 0 0 2 0 )极显著高于对照组 ( 0 3 65± 0 0 2 6) (P <0 0 1) ,精子顶体的总异常率试验组 ( 3 3 72 % )极显著低于对照组 ( 4 4 3 5 % ) (P <0 0 1) ,其中试验组顶体膨胀率和脱落率与对照组分别为 1 2 8%±0 5 8%、2 3 0 8%± 1 45 %与 2 68%± 0 5 9%、2 8 96%± 3 14 %。冷冻精液品质显著改善。     

规模化猪场大肠杆菌的耐药性监测及血清流行病学调查

为了调查猪致病性大肠杆菌的耐药性及流行血清型 ,从湖北、河南、江西、安徽、浙江等省的 33个猪场采集 32 1份仔猪黄、白痢病料进行细菌的分离和生化鉴定 ,结果分离到大肠杆菌 30 2株 ,其中致病性大肠杆菌 2 76株。对 112株致病性大肠杆菌进行了 15种抗生素敏感性试验 ,发现分离菌株对 15种药物均有不同程度的耐药性 :青霉素 G对其完全没有抑制作用 ;先锋霉素 抑制作用最强 (97.3% ) ,其次为呋喃妥因 (78.6 % )、痢特灵 (71.4 % )、环丙沙星(6 8.8% )、诺氟沙星 (6 5 .1% )。 112株菌中 ,有 4 7种耐药谱型 ,多数为 6耐以上的菌株 (80株 ) ,占供试菌株的 71.4 %。应用微量平板凝集试验 ,对分离的 2 76株致病菌进行了血清型鉴定 ,鉴定共有 72种血清型 ,其中优势血清型 10种 ,占能定型分离致病菌株的 5 3.7%。     

鹅细小病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达及纯化

将鹅细小病毒 (GPV) VP2基因插入原核表达载体 p PROEX- HTb,获得重组表达质粒 p PROEX- HTb- VP2。将其转化大肠杆菌 DH5α,用 IPTG诱导表达 ,表达菌体蛋白中可产生与预期大小相符的约 72 0 0 0的蛋白。以光密度扫描对该表达产物进行定量分析 ,表达产物约占菌体总蛋白的 14 %。经 His- tag金属螯合层析纯化 ,获得纯度较高的 6 His- VP2融合蛋白。 Western- blot结果表明 ,所得蛋白与鹅抗 GPV高免血清有较好的免疫反应性 ,说明在 VP2的 N端融合 6个组氨酸不影响其与特异抗体结合的活性。     

大肠杆菌新型菌毛(F1987)的基因定位

对动物产肠毒素性大肠杆菌 (ETEC)的一种新型菌毛 (F1987)进行了相应基因的定位研究 ,通过对表达该新型菌毛 (F1987)相应 ETEC菌株的培养、质粒提取、对大肠杆菌受体菌株 DH5α的转化及阳性转化子筛选与相应菌毛表达的检定等 ,初步表明该新型菌毛 (F1987)的基因定位于质粒上     

鸡大肠杆菌iss基因的克隆测序及原核表达

本实验对鸡大肠杆菌O2血清型菌株进行iss基因克隆测序，并在此基础上设计出两对套式引物，分别对含信号肽Miss基因序列和不含信号肽Miss基因序列进行扩增，并与原核表达载体pGEX-6p-1连接进行原核表达。iss基因克隆测序的结果与两组国外发表Miss基因序列进行比对，其同源性达100％。SDS—PAGE鉴定显示融合蛋白获得了较理想的表达，融合蛋白分子量分别约为36kD和33kD。     

禽大肠杆菌高密度发酵与溶氧关系的研究

利用GUJS—10C小型发酵罐分批培养禽大肠杆菌，通过平板计数、比浊计数的方法，对大肠杆菌高密度发酵中细菌生长与溶氧的关系进行分析。结果表明：溶氧的规律性变化能够反映大肠杆菌生长的规律，即在细菌生长的适应期细菌数量较少，耗氧量少，溶氧曲线最高；随着发酵时间的增加，细菌不断增多，耗氧量也随之增加，溶氧曲线下降；达到对数生长期，曲线最低；进入稳定期，曲线趋于平稳；到发酵后期，细菌进入衰老期，溶氧曲线略有上升，这时可终止发酵。