杜仲EuGT2基因的原核表达及蛋白纯化

本研究以克隆所得杜仲(Eucommia ulmoides)EuGT2基因为基础,利用基因重组技术构建原核表达载体pMCSG19-EuGT2。重组载体转化到E.coli Rosetta(DE3)中,用0.05 mmol/L异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在37℃下诱导6 h。使用镍-亚氨基二乙酸(Ni-IDA)亲和层析柱进行纯化,并用15%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳进行检测。研究结果表明,杜仲EuGT2基因在E.coli Rosetta(DE3)中得到成功表达,重组蛋白表达形式为部分包涵体、部分可溶性蛋白。经SDS-PAGE凝胶电泳检测,在相对分子质量约56 kD处有1条特异性蛋白条带,经质谱鉴定该特异性蛋白条带确为杜仲EuGT2蛋白。以上研究结果为后续研究杜仲糖基转移酶的功能提供了科学依据。     

棉花S-腺苷蛋氨酸脱羧酶基因(GhSAMDC2/3/4)的克隆及其诱导表达分析

利用电子克隆结合RT-PCR技术克隆获得陆地棉(Gossypium hirsutum L.)S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,SAMDC)基因家族3个基因,分别命名为Gh SAMDC2、Gh SAMDC3和GhSAMDC4。序列分析显示,该基因c DNA包含的upstream ORF(u ORF)和main ORF(m ORF)为植物SAMDC基因特征ORF,其中m ORF长度分别为1068 bp、1110 bp和1032 bp,分别编码355、369和343个氨基酸。聚类分析表明,Gh SAMDC2/3蛋白与可可树(Theobroma cacao)SAMDC聚为一类,且Gh SAMDC2与GhSAMDC3蛋白亲缘关系最近;Gh SAMDC4与拟南芥At SAMDC4聚为一类。实时荧光定量PCR分析表明,Gh SAMDC2在茎中表达相对较高,随着纤维发育其表达量不断增加,在纤维发育后期其表达量达到最高;Gh SAMDC2/3/4在不同的胁迫条件下表现出不同的表达模式,Gh SAMDC2受低温和干旱胁迫诱导最强烈,Gh SAMDC3响应盐胁迫显著,Gh SAMDC4受ABA诱导强烈。上述结果为进一步研究棉花SAMDC基因功能奠定了一定基础。     

DNA甲基化与细胞分化

DNA甲基化与DNA遗传信息的传递及组织特异性基因的正确表达存在着十分密切的关系。DNA甲基化受组蛋白H 3和DNA甲基化转移酶的调控;甲基化的DNA与许多的蛋白质共同相互作用,调控基因转录,从而导致基因印迹和基因沉默,使细胞向特定方向分化。本文重点综述了DNA甲基化位点、甲基化转移酶及DNA甲基化相关的蛋白质;DNA甲基化与基因印记、基因沉默的关系及其对细胞分化的影响。     

洋葱深加工综合利用新技术(之一)

洋葱深加工综合利用概况1、洋葱的营养保健价值(1)洋葱的营养保健价值洋葱,原产于非洲,又名圆葱、球葱、玉葱、葱头等,属百合科植物的鳞茎,是东、西方居民皆喜食的调味蔬菜。洋葱具有较高的食用药用价值,每100 g洋葱含水分87～90 g、蛋白质1～1.8 g、碳水化合物6.3～     

冷诱导下毛百合甘油-3-磷酸酰基转移酶活性变化及其基因保守区的克隆

探讨了野生毛百合甘油-3-磷酸酰基转移酶活性在冷胁迫下的变化,用简并引物扩增了甘油-3-磷酸酰基转移酶基因保守区序列的结果表明,该保守区段长744 bp,推测编码247个氨基酸.在GPAT氨基酸序列中存在1个高度保守的区域(WIAPSGGRDRP),在NCBI上经过BLASTp比对分析,发现这段保守区序列为LPLAT基...     

陆地棉(G. hirsutum L.) N-乙酰氨基葡萄糖转移酶基因(GhGnT)的克隆及耐盐性功能分析

在耐盐相关基因芯片基础上,我们筛选到盐诱导显著上调表达(Ratio>2)的N-乙酰氨基葡糖转移酶基因.选取耐盐材料中9806为材料,根据耐盐性抑制消减文库EST序列设计引物,利用RACE及RT-PCR技术获得该基因cDNA全长1970 by,命名为GhGnT.通过Blast比对,发现该基因与蓖麻乙酞氨基葡萄糖转移酶基因...     

1-甲基环丙烯延长菠菜采后保鲜期的研究

分别对经0.1、1.0μL.L-1浓度的1-甲基环丙烯(1-MCP)处理和未经1-MCP处理的离体菠菜叶片的衰老特性进行研究。结果表明,与对照相比,经1-MCP处理的菠菜叶片在避光、23℃条件下贮藏6 d后,叶绿素含量和光系统Ⅱ最高光量子产量较高,溶质渗漏量较低,说明1-MCP处理可延缓菠菜叶片的衰老。贮藏3 d后,经1-MCP处理的菠菜叶片乙烯生成量增加,随后又下降至对照水平。经1-MCP处理的菠菜叶片中具有较高的抗坏血酸和谷胱甘肽含量及对于这两种物质较低的氧化还原比率。1-MCP处理还可以减少菠菜叶片中的铵盐积累及蛋白质的降解。综合上述结果可以得出,通过1-MCP抑制菠菜叶片对乙烯作用的敏感性可有效延长菠菜的采后保鲜期。     

三明市农科所选育的四个不育系通过省级技术鉴定

“华优桂99”是广西藤县种子公司1998年早季利用优质不育系“华农A”与优质恢复系“桂99”杂交配组而成，属优质杂交稻新组合。2000年通过广西自治区农作物品种审定，2001年通过广东省农作物品种审定，同年通过国家审定。该组合1999年由龙海市种子站引进、试验试种，2002年、2003年参加漳州市     

S-3307和PP333对高羊茅愈伤组织诱导分化效应

植物调节剂烯效唑与多效唑在高羊茅组织培养中的效应与基因型密切相关.一定浓度(0.01 mg/L和0.1 mg/L)的S-3307使供试品种佳美与翠碧A的出愈率提高,却降低了另两个品种迪斯绿与猎狗5的出愈率;PP333仅对迪斯绿有抑制作用,而对其它3个品种起一定的促进作用.除佳美以外,在其它3个高羊茅品种中,观察到S-3307和PP333有明显促进愈伤组织分化,其最佳分化浓度分别为0.01 mg/L和0.1 mg/L.高浓度的S-3307与PP333 (＞1 mg/L) 对4个高羊茅品种愈伤组织的诱导和分化有毒性.     

百脉根LjIPT3启动子的克隆及表达载体的构建

[目的]为深入研究LjIPT3的表达调控和功能奠定基础。[方法]利用TAIL-PCR技术克隆百脉根IPT基因LjIPT3起始密码子的上游序列,利用生物信息学手段对其序列特征和潜在的调控元件进行分析,并构建启动子表达载体。[结果]利用TAIL-PCR技术成功克隆了LjIPT3基因5′端上游调控序列。将目的片段连接到pMD18-T载体上,获长度为1 910 bp序列,其3′端有部分序列与LjIPT3的5′端相同,证明克隆的片段为LjIPT3起始密码子ATG的上游区域。该序列含有1个TATA-box和3个CAAT-box,还包含光响应元件、MYB结合位点、不同的激素反应元件以及各种胁迫元件,说明该基因的表达可能受多种因素的调控。成功构建了驱动报告基因GUS的植物表达载体。[结论]该研究为研究植物细胞分裂素的合成代谢和植物生长发育的调控奠定了基础。