内含NDV核酸的耐核糖核酸酶病毒样颗粒作为荧光定量RT-PCR内标的制备与鉴定

为制备检测新城疫病毒的实时荧光RT-PCR病毒样颗粒内标,扩增MS2噬菌体的成熟酶蛋白和衣壳蛋白序列,将其定向插入pET32a载体的相应位置,双酶切和PCR鉴定,构建pET32a-MS2重组质粒;根据新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测的目标片段,采用化学合成和klenow酶连接技术制备内标片段,将内标片段插入pET32a-MS2重组质粒,构建pET32a-MS2-IC重组质粒,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,经RNase和DNase消化后,采用荧光RT-PCR检测耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标的含量。结果表明,制备了高表达量耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标,可用于新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立。     

应用SYBR Green I的Real-time PCR方法定量检测空肠弯曲杆菌

空肠弯曲杆菌(Campylobacterjejuni)被认为是人类主要食源性病原菌之一。由于空肠弯曲杆菌特殊的生长条件和容易进入不可培养但存活的状态(Viablebutnonculturable,VNC),所以传统的生化鉴定结果不一定可靠,并且是一项费时而繁琐的工作。核酸检测方法的出现为空肠弯曲杆菌的检测带来了方便。本文基于LightCycler为平台,利用SYBRGreenI染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性,建立一种Real-timePCR方法来定量检测空肠弯曲杆菌。用该方法检测时,发现所有空肠弯曲杆菌(11株)都呈阳性,所有其它弯曲菌(3株)和其它菌株(5株)都是阴性。整个检测过程60min内可以完成,检测限度为5CFU,标准曲线的相关系数为1。结果表明基于SYBRGreenI的定量PCR方法既为空肠弯曲杆菌提供了一种特异、敏感、快速和简洁的定量检测方法,又为研究空肠弯曲杆菌致病机理提供了一种重要方法。     

城市空间形态定量化研究进展

对国内外学者有关城市空间形态定量化的研究方法作了回顾与总结,主要介绍了基于GIS的定量分析法和分形维数法,并简要地对各种方法作了评论,使读者对目前在这一方面的研究情况有所了解,以便明确进一步深入研究的方向.     

甘蔗定量施用酒精废液前景广阔

1 前言 糖业是广西的一大支柱产业, 2005-2006榨季广西开榨糖厂 94家,平均日榨 43万吨,入厂原料蔗 4332万吨,年总产糖 537.69万吨,年生产酒精近 40万吨.酒精作为甘蔗加工的主要副产品,每年要排放酒精废液 500多万吨.根据有关资料分析,一个日榨 2500吨糖厂 ,排放酒精废液的污染物量,即相当于一座 35万人口的城市每日生活污水的污染物量.     

鸡传染性法氏囊病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用

采用vero细胞增殖的IBDV抗原建立了间接ELISA，用于定量检测IBDV抗体。对该方法进行了标准化研究，确立了该方法的最佳工作条件。在此基础上研制了相应的诊断试剂盒，并对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品的比较、保存期等进行了全面、详细的研究。结果表明，研制的试剂盒在-20℃保存至6个月时各项性能都很好。该试剂盒与进口试刺盒对同样血清样品检测，符合率为86．7％。间接ELISA试剂盒与琼扩试验的符合率为92，5％。该试刺盒可对大量血清样品进行检测，操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、快速，更适合于大型鸡场IBD免疫抗体水平的监测及现地疫病诊断等需要。     

植物病原荧光假单胞杆菌数值分类研究

 采用数值分类法研究了来自21种寄主植物96个病原荧光假单胞菌菌株(包括5株非荧光菌)的分类问题。结果表明,所有参试荧光菌菌株可分成两大组,第一组(组I)生长较慢,精氨酸双水解酶呈阴性,营养谱窄,多数菌株不利用DL-苯丙氨酸,L-苯丙氨酸,L-羟脯氨酸,L-异亮氨酸,L-色氨酸,L-瓜氨酸,DL-nor-缬氨酸,L-胱氨酸,单宁酸和鼠李糖作为唯一碳源,不能利用天冬氨酸作为唯一碳源和氮源,而第二组(组Ⅱ)的菌株可利用这些化合物。组I的菌株可分为10个亚组(I₁-I₁₀),亚组与致病变种或命名种基本对应,与寄主来源密切相关;亚组间的区别在于它们利用底物的能力不同。组Ⅱ均具有精氨酸双水解酶,营养谱广泛。     

用免疫荧光、酶标技术检测赭曲霉毒素A的研究

该项研究采用本课题组提纯的赭曲霉毒素A(Ochratoxin A·简称OA)和研制的兔抗OA抗体等,进行间接荧光法和ELISA间接法检测OA的试验。通过对不同浓度的OA纯品和含毒饲料浸提液及中毒死亡鸡内脏的间接荧光染色,均能检出分布均匀、大小有别的黄绿色荧光亮点;用OA为被检抗原和兔抗OA抗体与羊抗兔IgG-HRP进行ELISA间接法试验,对含不同浓度OA的试验孔和对照孔的检测,结果均正确稳定。研究结果证明,以上两种检测方法检测OA均具有灵敏、特异、快速等优点。     

生物染色剂和荧光染料做为对虾标志的评估（续）

1.双注射的标志方法双注射法是由两次单独的注射组成的,首先进行初级染色,然后进行次级染色。按前面所述的方法将初级染料的水溶液——固绿或台盼兰注射入实验对虾体内,次级染色物质用1或2ml结核菌素注射器25或27号针头注射。0.003～0.01ml的次级染色物质注射到中部背     

谈谈种用肉鸡限饲

种用肉鸡不同于商品肉鸡、以艾维菌肉鸡为例;7周龄父母代肉鸡,公鸡要求达到1000克左右,母鸡800克左右,而商品肉鸡可达到2000克以上。种用肉鸡要求在各个周期达到标准体重(见附表2—4)、才能多繁殖后代,达到高产的目的。因此要防止种鸡过肥过大,这就要采取限饲的技术。肉用种鸡既要满足营养需要,以保持健壮体