不同引物组合对中国杏品种资源S基因特异扩增效果比较

 利用已报道的5对蔷薇科李属通用引物组合对起源于我国的30个杏(Prunus armeniaca L.)品种进行了S等位基因的专一性PCR扩增（S-allele specific PCR），并依据扩增系数和扩增成功率两个指标对扩增效果进行了评价。结果表明：①不同的引物组合对参试杏品种的扩增系数和扩增成功率差异很大，其中引物组合EM PC2consFD+EM PC3consRD扩增系数和扩增成功率均为最高（66.7%和53.3％），效果最好；②引物组合EM PC2consFD+EM PC3consRD对‘华县大接杏’和‘猪皮水杏’未能扩增出任何条带，而PruC2+PruC4R和PaConsⅡ F+PaConsⅡ R两对组合却能对其扩增出两条带；此外，5对组合均没有对‘兰州大接杏’和‘白木杏’这两个品种扩增出任何条带，表明要对中国杏品种资源的S基因型进行全面、准确鉴定，除了采用不同的引物组合外，还需要根据中国杏的S基因序列进一步开发、设计新的专用引物；③ EM-PC2consFD+EM PC3consRD和PruC2+PruC4R两对组合对‘红丰’、‘新世纪’、‘红荷包’和‘二花槽’等4个品种的扩增结果表明，依据本试验所提出的扩增系数和扩增成功率两个指标评价不同引物组合的扩增效果是有效的。     

用磷指标法确定油菜磷肥施用量研究

本文研究了平衡时间对磷指标值的影响 ,并测定了主要类型土壤的磷指标值 ,对 3种施磷计量方法对照进行比较 .结果表明 ,加入磷量在 2 0 0 μg/ g以下时 ,平衡时间需 4～ 6天 ;安徽省主要类型土壤磷指标值变幅为 1 3 4～ 3 4 0 .在马肝土和青泥田两种土壤上 ,用磷指标法计算的油菜施磷量与田间试验结果基本一致 .     

重组酶聚合酶扩增技术在番茄黄化曲叶病毒检测中的应用

番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）是引起番茄黄化曲叶病毒病的病原，在生产中造成严重危 害，开发快速准确的检测方法对该病害的防控具有重要意义。依据番茄黄化曲叶病毒DNA-A 基因序列，设计用于重组酶聚 合酶等温扩增（RPA）检测的特异性引物，建立了TYLCV 的重组酶聚合酶等温扩增检测方法，并分析该方法的特异性和灵 敏度。结果表明，建立的TYLCV-RPA 方法可从TYLCV 阳性的番茄样品中扩增出343 bp 的特异性条带，反应条件为37 ℃ 恒温下40 min，扩增时间短，对设备要求低，且与番茄其他病毒无交叉反应，特异性好，灵敏度可达到PCR 方法的10 倍， 适用于TYLCV 的快速检测。     

锦鲤疱疹病毒单交叉引物等温扩增检测方法的建立

本文根据锦鲤疱疹病毒(Koi herpes virus,KHV)保守的DNA聚合酶(Sph)基因,设计一组单交叉扩增引物,以构建的Sph基因重组质粒作为标准DNA模板,采用单交叉引物等温扩增技术(Single cross priming amplification,SCPA)进行扩增及优化反应体系,并结合核酸试纸条技术(Nucleic acid test strip detection method),建立了快速可视化检测锦鲤疱疹病毒的单交叉引物等温扩增检测方法(KHV-SCPA)。KHV-SCPA法可在63℃下60min内实现循环扩增,扩增产物经凝胶电泳呈现梯形条带,可特异性地检测出KHV,灵敏度较之常规PCR方法提高约1000倍。结合核酸试纸条检测技术,在3~5min内可对反应产物进行可视化检测。KHV-SCPA检测方法不依赖昂贵的仪器设备与专业技术人员,可应用于锦鲤疱疹病毒的现场快速检测中,为锦鲤疱疹病毒病的准确快速诊断和有效防控提供了技术支撑。     

恒温扩增技术在动物疫病病原检测中应用现状及展望

介绍了链置换扩增技术、转录介导扩增技术、核酸序列依赖性扩增技术、环介导等温扩增技术、赖解旋酶恒温基因扩增技术、滚环扩增等六种恒温扩增核酸的技术的特点及其研究应用概况,并对恒温扩增技术的前景予以展望,以期为这些技术的应用提供参考。     

针铁矿和针铁矿—胡敏酸复合体对Se(Ⅳ)吸附机制

研究了针铁矿和针铁矿—胡敏酸复合体对Se(Ⅳ)的吸附机制。结果表明:针铁矿和复合体对Se(Ⅳ)的最大吸附容量分别为0.202 mmol g-1和0.159 mmol g-1。针铁矿的等温吸附数据适合用Langmuir模型拟合,而Freundlich模型更适合描述复合体的等温吸附过程。针铁矿的等电点(IEP)在7.0附近,复合体的IEP3.0;当p H=4.0时,它们的表面电位分别为46.6 m V和-40.5 m V。X—射线光电子能谱(XPS)分析显示,针铁矿和复合体表面Fe2p3/2的电子结合能(B.E.)分别为711.4e V和711.5 e V,复合体表面C1s的B.E.值为284.8 e V。初始p H=4.0时,样品与Se(Ⅳ)相互作用后的主要变化体现在:(1)针铁矿和复合体的悬浮液p H分别升高至4.4和4.2,表面电位分别降低了39.08 m V和升高了1.8 m V;(2)针铁矿表面Fe(Ⅲ)的B.E.值降低了0.4 e V,但吸附态Se(Ⅳ)的B.E.值无明显变化;(3)复合体表面Fe(Ⅲ)的B.E.值降低了0.3 e V,表面C-O中C的B.E.值由285.7 e V升高至286.5e V,吸附态Se(Ⅳ)的B.E.值升高了0.6 e V。针铁矿和复合体吸附Se(Ⅳ)的主要机制包括表面配合反应(复合体表面铁羟基与HSe O3-之间存在双齿配位)、静电引力、氢键等作用。此外,复合体表面吸附态Se(Ⅳ)同时与针铁矿和胡敏酸发生了作用,形成了针铁矿—Se(Ⅳ)—胡敏酸三元体。     

保康野生蜡梅花与叶基因组DNA提取方法的研究

[目的]证实从蜡梅花基因组提取DNA等同于从叶基因组提取DNA。[方法]采用CTAB法,对保康野生蜡梅花与叶基因组进行遗传多样性研究。[结果]在用CTAB法提取DNA时,65℃水浴振荡并二次抽提后花基因组DNA在浓度和OD260/OD280上都与叶基因组DNA达到相近的水平。[结论]从性状表现更显著的蜡梅花基因组提取DNA进行遗传性分析能达到叶基因组的水平。     

Investigation of Natural Extracts and Sodium Bisulfite Impact on Thermal Signals and Physicochemical Compositions of Litopenaeus vannamei during Chilled Storage

This research work evaluates the impact of 1.2% pomegranate peel extract (Pp) (Punica granatum), 0.1% grapefruit seed (Gfs) (Citrus paradisi) extract, and synthetic preservative 1.25% sodium bisulfite on shelf life extension of Litopenaeus vannamei stored at 4 and 15°C. The application of isothermal titration calorimetry (ITC) for comparison of the extracts and chemical preservative on shrimp quality retention based on the overall heat production by microbial and enzymatic degradation was addressed. The occurrence of probable bioactive responsible for antimicrobial and antioxidant activity components in the extracts was examined through gas chromatography-mass spectrometry (GCMS). At 4°C, Pp-treated shrimps resulted in 6.73 logCFU/g, 6.93 logCFU/g, 5.31 mgN/100 g, and 0.58 mgMDA/kg for aerobic plate count, psychrotrophic bacterial count, trimethylamine, and thiobarbituric-acid reactive substance, respectively, on the 15th day. At 15°C, Pp-coated shrimps retained quality until day 4. Isothermal calorimetric analysis resulted in a rapid and sharp peak for fresh samples, whereas there was broad and delayed peak for shrimp treated with Pp and sodium bisulfite. These observations prove that Pp counterpart the chemical preservative and outperform Gfs on shrimp quality retention. Results also indicate that isothermal calorimetry can be a useful technique for shelf life predictions and comparative evaluation of extract impact on shrimp quality retention.     

应用响应曲面法优化萱藻丝状体扩增条件

为优化萱藻丝状体扩增条件,提高萱藻丝状体的扩增速率,本研究以实验室萱藻种质库保存的丝状体为实验材料,在单因素实验的基础上,应用Box-Behnken设计对萱藻丝状体扩增条件进行了响应曲面优化探索。以增重倍比为指标,确定了扩增萱藻丝状体的最佳条件：温度20.45℃, 光照强度78.13μmol/(m_².s),外加氮磷比16.19。在该条件下扩增10d,萱藻丝状体增重倍比为(299.21%±13.58%),显著高于单因素实验和Box-Behnken设计实验条件下获得的萱藻丝状体增重倍比。实验结果与理论预测值的相对误差小于5%,模型可靠。为评价优化培养后萱藻丝状体的发育情况,对丝状体进行了20d的诱导,结果显示：优化培养后的萱藻丝状体呈深褐色,细胞质充盈,孢子囊比例(26.37%±5.22%)比对照组的孢子囊比例(18.10%±3.51%)提高了45.69%；优化条件下的孢子囊直径平均为(19.75μm±0.21μm),高于对照组的孢子囊直径(16.91μm±0.36μm)。本研究结果表明,在萱藻丝状体扩增过程中,对扩增环境条件进行有目的性的调控,设置合适的营养盐浓度配比,不仅可以实现较高的扩增速率,还可以促进丝状体的孢子囊发育。