小佛肚竹和螺节竹总RNA的提取

首次提出了一种适用于小佛肚竹(Bambusa ventricosa)和螺节竹(Pleioblastus gramineus)等竹类植物总RNA提取方法.用该方法提取叶片和笋尖的总RNA具有正常的光谱吸收,OD260/OD280比值为1.96～2.0,OD260/OD230比值为2.96～4.11;琼脂糖电泳后,28 SRNA的亮度基本为18 SRNA的亮度的2倍;这说明提取的RNA很完整,未降解,质量高.同时该方法操作简便、无DNA污染,且产率高;提取的RNA可用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA文库的构建等.     

吉氏巴贝斯虫mRNA的磁性分离及cDNA合成

从感染吉氏巴贝斯虫的摘脾犬的红细胞内提纯虫体,用异硫氰酸胍法提取虫体总RNA,再以Poly(A)~ mRNA磁性分离系统提取mRNA.最后以NotⅠPrimer-Adaptor为引物反转录出cDNA片段.琼脂糖凝胶电泳显示,所合成的cDNA分子量范围由100到6500bP,且绝大部分大于500bP.     

旋毛虫肌幼虫RNA的提取及目的基因的PCR扩增

用改进的ＡＧＰＣ法成功地提取出旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ。每０．１ｍｌ压积虫体可获得１００μｇ的ＲＮＡ，其Ａ２６０与Ａ２８０及Ａ２６０与Ａ２３０的比值均接近于２，变性琼脂糖凝胶电泳显示，旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ缺少大部分真核生物所具有的２８Ｓ ｒＲＮＡ．通过比较研究，筛选出理想的虫体处理方法。用聚合酶链式反应直接从总ＲＮＡ中进行目的基因的扩增，得到一分子量为０．７ｋｄ的ＤＮＡ。通过限制性内切酶对其消化鉴定，     

“复方生血灵”生血效果及对骨髓细胞中RNA、DNA合成影响的研究

应用“复方生血灵”对实验动物的生血效果进行观察,并与已知补血药“益血生”作药效学比较,结果表明,连续应用“复方生血灵”对失血性贫血、缺铁性贫血等具有生血作用。对实验动物骨髓细胞中RNA的合成具有促进作用。     

Nucleotide sequence and symptom modulating analysis of a Peanut stunt virus-associated satellite RNA from Poland: high level of sequence identity with the American PSV satellites

Two peanut stunt virus isolates from Poland (PSV-Ag and PSV-P) have been studied. The isolates produce similar systemic symptoms onNicotiana tabacum plants but the symptoms onN. benthamiana, Pisum sativum andDatura stramonium plants are much stronger for the PSV-P isolate. Analysis of the RNA extracted from purified virions by gel electrophoresis and RT-PCR amplification allowed the detection of a satellite RNA in the PSV-P isolate. The nucleotide sequence of this European PSV satellite was determined and found to have a high degree of identity with the sequences of the four American PSV satellites previously studied, which were found to have either no effect or ameliorate the PSV symptoms in tobacco plants (Collmer et al., 1985; Naidu et al., 1991). The possible role of the European PSV satellite in the modulation of viral symptoms has been studied but no effect was observed when the purified satellite was used with the PSV-Ag isolate as helper virus on any of the three hosts cited above.     

海岸植物许树和单叶蔓荆提取total RNA的简便方法

[目的]介绍海岸植物叶片组织total RNA提取的一种简单、便捷方法。[方法]取800~1 000 mg许树和单叶蔓荆的鲜叶,加液氮研磨后制成提取液,提取液加试剂4℃下离心,冰浴后室温下离心,依次添加试剂后室温下离心,即得total RNA样品。[结果]分光光度计测试提取的total RNA的A260/A230大于2.10,A260/A280在1.93左右;RNA溶液中RNA浓度约为4.0μg/μl。该方法用了较少试剂种类;每根柱只需洗4次便可获得较好质量的total RNA;一次研磨800~1000 mg材料可提取约700μg total RNA;电泳检查表明提取的totalRNA符合分子生物学研究要求,可直接用于各种分子生物学试验。[结论]该方法是一种以较少试剂、较小费用、短时间内提取较高质量与产量的海岸植物叶片组织total RNA的简单、便捷方法。     

竹笋适口性形成及其主要影响因素研究综述

竹笋是中国传统森林蔬菜，也是大宗出口农产品。适口性体现了竹笋经济价值和市场潜力，是高品质竹笋评价的重要指标，但竹笋适口性形成基础及提升技术研发相对薄弱，一定程度上限制了竹笋品质改良技术研发及生产应用。本研究综述了竹笋适口性评价的主要指标，总结了当前竹笋适口性的主要研究成果，并对未来研究提出展望。目前竹笋适口性的研究主要集中于:①竹笋适口性的种间差异；②环境因子对竹笋适口性的影响；③经营措施对竹笋适口性的影响。主要结论为:糖、酸、酚类、纤维类以及氨基酸类物质是竹笋适口性评价的主要指标，适口性的形成不仅取决于竹种自身遗传因素，同时也受到气候因素和土壤质地等的影响。通过覆盖栽培、施肥、林分结构调控和选择适宜的采笋时间等途径可以改良竹笋适口性，但其效应存在明显的种间差异。未来竹笋适口性的研究应该集中于构建适口性综合评价指标与方法，探究多因素互作对竹笋适口性的影响，从生态、生理、生化、分子等多学科层面揭示竹笋适口性形成机制。筛选适口性好、产量高、生态适应性强的优良笋用竹进行规模化栽培，并从栽培环境选择、土壤养分精准补充、笋芽萌发环境控制、竹笋器官处理等途径研发竹笋适口性改良技术。参66     

奶山羊ACSL6基因克隆及表达调控分析

研究旨在获得西农萨能奶山羊长链脂酰CoA合成酶6（long-chain acyl-CoA synthetase 6，ACSL6）基因CDS序列，初步探究其对奶山羊乳腺上皮细胞脂质代谢的影响。以西农萨能奶山羊原代乳腺上皮细胞为试验材料，对ACSL6基因进行扩增和克隆，并利用实时荧光定量PCR方法对ACSL6基因进行组织表达分析，针对ACSL6基因的碱基序列利用在线软件进行生物信息学分析，采用RNA干扰技术改变奶山羊乳腺上皮细胞中ACSL6基因mRNA的表达水平。结果显示，ACSL6基因CDS区全长为2 169 bp，编码722个氨基酸；生物信息学分析表明ACSL6蛋白为碱性不稳定蛋白。组织表达分析显示，ACSL6基因在奶山羊乳腺组织中高度表达，其次为脾脏。将设计合成的siRNA转染乳腺上皮细胞，发现干扰ACSL6基因的表达使脂质代谢相关基因乙酰辅酶A羧化酶（acetyl CoA carboxylase，ACC）、硬脂酰辅酶A去饱和酶1（stearyl-CoA dehydrogenase 1，SCD1）、脂肪酸转运蛋白36（cluster of differentiation 36，CD36）、固醇调节元件结合蛋白1（sterol regulatory element binding proteins 1，SREBP1）的mRNA表达水平极显著下调（P<0.01）。本研究结果为从蛋白及个体水平上研究ACSL6基因对奶山羊乳腺脂质代谢的影响提供理论依据。     

蜜蜂球囊菌菌丝和孢子中长链非编码RNA的比较及潜在功能分析

【背景】蜜蜂球囊菌（Ascosphaera apis,简称球囊菌）是一种专性侵染蜜蜂幼虫的真菌病原,可引起成年蜜蜂数量和蜂群群势的急剧下降。长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）是一类新近发现的非编码RNA,在表观遗传、细胞周期、剂量补偿等众多生命活动中发挥重要生物学功能。【目的】明确球囊菌菌丝和孢子中lncRNA的数量、种类和表达谱差异,并探究共有lncRNA、特有lncRNA和差异表达lncRNA（differentially expressed lncRNA,DElncRNA）在菌丝与孢子中的潜在功能。【方法】利用基于链特异性建库的lncRNA-seq技术对球囊菌的纯化菌丝（AaM）和纯化孢子（AaS）分别进行测序。根据FPKM（Fragment Per Kilobase of per Million mapped reads）法计算lncRNA在AaM和AaS中的表达水平。通过Venn分析筛选AaM与AaS的共有lncRNA和特有lncRNA。按照P≤0.05且|log₂ fold change|≥1的标准筛选AaM vs AaS比较组中的DElncRNA。通过Blast工具将共有lncRNA、特有lncRNA和DElncRNA的上下游基因比对GO和KEGG数据库,以进行功能及通路注释。根据靶向结合关系构建共有lncRNA、特有lncRNA和DElncRNA的竞争性内源RNA（competing endogenous RNA,ceRNA）调控网络并利用Cytoscape软件进行可视化。利用RT-qPCR验证测序数据的可靠性。【结果】AaM和AaS分别测得108 614 646和105 675 408条原始读段（raw reads）,经严格过滤得到107 780 032和104 621 402条有效读段（clean reads）,Q20分别为98.76%和98.72%,Q30分别达到95.84%和95.78%。共鉴定到850个lncRNA。AaM和AaS的共有lncRNA为701个,二者的特有lncRNA分别为39和110个。上述共有lncRNA通过顺式作用调控3 992个上下游基因,它们涉及细胞进程、代谢进程和催化活性等42个功能条目,以及代谢途径、次生代谢物的生物合成和抗生素的生物合成等117条通路;AaM的特有lncRNA和AaS的特有lncRNA通过顺式作用分别调控243和672个上下游基因。AaM vs AaS比较组包含的255个DElncRNA通过顺式作用调控1 479个上下游基因,它们涉及代谢进程、细胞进程和催化活性等41个功能条目,以及代谢途径、次生代谢产物的生物合成和抗生素的生物合成等107条通路。从共有lncRNA、孢子特有lncRNA和DElncRNA中分别预测到41、5和13个微小RNA（microRNA,miRNA）的前体序列。调控网络分析结果显示,菌丝lncRNA、孢子lncRNA形成较为复杂的ceRNA调控网络;菌丝lncRNA可靶向结合8个miRNA,进而调控77个mRNA;孢子lncRNA可靶向结合7个miRNA,进而调控87个mRNA;2个DElncRNA（TCONS_00008630与TCONS_00009302）可靶向结合miR-4968-y,进而调控10个mRNA。RT-qPCR验证结果显示4个DElncRNA的差异表达趋势与测序结果一致,表明测序数据真实可靠。【结论】共有lncRNA、特有lncRNA和DElncRNA可能通过调控上下游基因的表达,作为miRNA的前体,以及充当ceRNA影响菌丝和孢子的物质和能量代谢、自噬、转录、MAPK信号通路、泛素介导的蛋白水解、蛋白酶体以及次生代谢产物的生物合成等生物学过程,从而调节球囊菌的生长、发育、生殖和致病性。