3种生境下克氏原螯虾与中华绒螯蟹竞争的研究

研究了洞穴、角落、空旷3种生境下,克氏原螯虾与中华绒螯蟹混养的存活率和残肢率,以探究两者的种间竞争情况;采集在室外池塘下,虾蟹混养和克氏原螯虾单养的克氏原螯虾收获量、回捕率,分析自然条件下两者的种间竞争情况。结果显示,混养时克氏原螯虾在洞穴型和空旷型生境下,存活率显著提高,残肢率显著下降;而中华绒螯蟹的存活率则显著下降,在洞穴型生境下残肢率显著提高;在角落型生境下,虾、蟹混养会导致克氏原螯虾存活率显著降低,对中华绒螯蟹的存活率无显著影响;在野外池塘条件下,虾蟹混养组最终的克氏原螯虾收获量和克氏原螯虾单养组并无显著性差异。     

硫酸锌慢性毒性胁迫下克氏原螯虾的组织病理

将克氏原螯虾(Procambarus clarkii)成虾在Zn2+质量浓度为0、0.40 mg/L、4.04 mg/L和40.37 mg/L的硫酸锌溶液中浸浴21 d,分别于第7、14和21天时每组随机抽取5只虾,采集肝胰腺、鳃、触角腺、性腺、肌肉及消化道组织,于Bouin′s液中固定24 h。采用石蜡切片和HE染色的方法,观察其组织的病理变化,从组织学水平研究硫酸锌对克氏原螯虾的慢性毒性作用。结果显示,浸浴时各Zn2+浓度组肝胰腺、触角腺细胞质中出现被染成红棕色的颗粒,且颗粒的数量与浸浴浓度及时间成正相关。0.40 mg/L组在浸浴期间各组织均未出现其他明显病变;4.04mg/L组及40.37mg/L组从浸浴第7天开始肝胰腺、触角腺、鳃组织出现出血、细胞坏死等病变,随浸浴浓度增大和时间延长坏死细胞比例增大。40.37 mg/L组第14天时精母细胞开始出现坏死;第21天时精巢、卵巢严重出血,精、卵细胞出现大面积坏死,肝细胞大量坏死脱落,肝小管结缔组织增生,大量脱落的细胞塞满管腔使肝胰腺表面形成肉眼可见的红棕色颗粒状斑点。结果表明在Zn2+质量浓度高于4.04 mg/L的硫酸锌浸浴21 d后,克氏原螯虾肝胰腺、触角腺、鳃、性腺组织均出现不同程度的病变,表明其代谢系统、呼吸系统、生殖系统等受到较严重的损伤,因此长期暴露在Zn2+质量浓度高于4.04 mg/L的环境中会严重威胁克氏原螯虾的生存和繁殖。     

Direct visualization of the novel pathogen,Spiroplasma eriocheiris,in the freshwater crayfish Procambarus clarkii (Girard) using fluorescence in situ hybridization

Spiroplasma eriocheiris is the first spiroplasma strain known to be pathogenic to freshwater crustaceans. It has caused considerable economic losses both in the freshwater crayfish Procambarus clarkii (Girard) and in some other crustaceans. The monitoring of the pathogen in crustacean populations and study of its behaviour in the laboratory require the development of reliable diagnostic tools. In this article, we improved microscopic identification of S. eriocheiris by combining in situ hybridization with specific fluorescently labelled oligonucleotide probes. The established fluorescence in situ hybridization (FISH) allowed simultaneous visualization, identification and localization of S. eriocheiris in the tissues of diseased crayfish P. clarkii and exhibited low background autofluorescence and ideal signal‐to‐noise ratio. With the advantages of better tissue penetration, potentially more specific and stable, we designed three species‐specific oligonucleotide probes utilizing the sequences of 16S‐23S rRNA intergenic spacer regions (ISRs) of S. eriocheiris. Positive hybridization signals were visualized in haemocytes and connective tissues of hepatopancreas, cardiac muscle and gill from diseased crayfish. This unique distribution pattern matched the pathological changes when diagnosed by H&E staining and indicated that S. eriocheiris probably spread throughout the tissues in P. clarkii by hemokinesis. This assay will facilitate our understanding of the pathogenesis of S. eriocheiris and enhance the early diagnosis of the novel pathogen.     

蛋白水解肽-Fe2+配合物对克氏原螯虾体内Cd2+的脱除效果

为探讨克氏原螯虾体内重金属Cd²⁺残留的脱除方法,采用基础饲料中添加制备的蛋白水解肽-Fe²⁺配合物(TPH-Fe²⁺)进行饲喂,检测螯虾不同组织器官中Cd²⁺含量变化情况。结果显示,染毒后螯虾不同器官中Cd²⁺富集量依次为内脏团>肠>鳃>腹部肌肉>螯足肌肉,且在0~12 d自然净化过程中,无显著性下降趋势。添加400、800和1 200 mg/kg TPH-Fe²⁺饲喂螯虾,内脏团、鳃、肠及腹部肌肉中Cd²⁺含量均有不同程度下降;饲喂12 d后,螯虾不同器官中Cd²⁺脱除率为肠>内脏团>鳃>腹部肌肉,脱除率分别为40.60%、36.13%、33.36%和10.15%;TPH-Fe²⁺对螯虾螯足肌肉中Cd²⁺含量无显著性影响。研究表明,蛋白水解肽-Fe²⁺配合物能有效脱除螯虾体内Cd²⁺残留,可作为一种螯虾养殖饲料添加剂在基础饲料中加以应用。     

Dispersal of two freshwater invasive macroinvertebrates,Procambarus clarkii and Physella acuta,by off‐road vehicles

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克氏原螯虾不同生理时期肝胰腺和肌肉生化组成及能量的变化

研究分析了克氏原螯虾（Procambarus clarkii）雌性亲本在产卵和抱卵期间肝胰腺和肌肉生化组成的变化及能量变动。结果表明：（1）克氏原螯虾产卵前后肝胰腺与肌肉指数均无显著性变化（P>0.05）,而卵巢指数由6.14%降到0.40%（P<0.01）,产卵后至卵破膜阶段肝胰腺指数上升了13.29%,显著高于产卵前水平（P<0.05）。（2）克氏原螯虾产卵后肝胰腺和肌肉中3大营养物质均呈现下降趋势,其中肝胰腺中粗脂肪含量与肌肉中粗蛋白含量下降极显著（P<0.01）,至卵破膜阶段,肝胰腺中的蛋白质和碳水化合物含量快速恢复且极显著超过产卵前水平（P<0.01）。产卵前后肝胰腺能值下降最大,抱卵期间肌肉能值下降显著。（3）产卵后,多不饱和脂肪酸（PUFA）显著下降,C22∶6n-3(DHA)与C20∶5n-3(EPA)下降幅度最大,分别为44.33%,30.80%。在这3个阶段,C20∶4n-6(AA)一直呈上升趋势,饱和脂肪酸（SFA）和单不饱和脂肪酸（MUFA）较为稳定,略有上升。     

复方中草药饲料添加剂对克氏原螯虾非特异性免疫功能的影响

[目的]探讨复方中草药饲料添加剂对克氏原螯虾非特异性免疫功能的影响。[方法]在基础饲料中添加1%、2%的复方中草药制剂,连续投喂40 d,分别在养殖后的20、30、40 d测定克氏原螯虾的溶菌酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性。[结果]与对照组相比,添加1%和2%的中草药制剂对克氏原螯虾溶菌酶、超氧化物歧化酶的活性影响极显著(P<0.01),对碱性磷酸酶和酸性磷酸酶的活性影响显著(P<0.05)。2个试验组除酸性磷酸酶外,其他3种酶的活力均无显著差异(P>0.05)。[结论]复方中草药饲料添加剂可以显著提高克氏原鳌虾的非特异性免疫功能。从免疫力和经济角度方面考虑,建议中草药的添加剂量以1%为宜。     

里下河地区水生蔬菜+克氏原螯虾共(轮)作关键技术及效益分析

阐述了江苏里下河地区茭白[Zizania latifolia(Griseb.)Stapf]、莲藕(Nelumbo nucifera Gaertn.Fruct.et Semin.)、芡实(Euryale ferox Salisb.ex DC)和水芹[Oenanthe javanica(Bl.)DC.]等水生蔬菜+克氏原螯虾(Procambarus clarkia Girard)共(轮)作的田间工程、时空耦合农事年历、关键技术及效益分析,为发展生态种养循环农业,转变传统单一种植、养殖方式提供了新思路与技术支撑。     

克氏原螯虾泛素结合酶E2基因的克隆及其在卵巢中的表达分析

利用RACE技术获得了UB-E2基因c DNA全长,通过RT-PCR技术研究UB-E2基因在不同组织、发育时期的表达量和17α-羟孕酮激素刺激后UB-E2表达量及性腺发育情况。结果表明:该基因序列全长3 943bp,开放阅读框675 bp,编码224个氨基酸,相对分子量23. 93 ku,等电点8. 61,82～219位氨基酸序列为泛素结合酶家族特有的结构域。氨基酸序列比对发现,克氏原螯虾UB-E2基因与节肢动物UB-E2基因有较高的同源性;系统进化分析表明,UB-E2基因与凡纳滨对虾和斑节对虾聚为一支。荧光定量结果显示,UB-E2基因在克氏原螯虾卵巢组织中的表达量显著高于其他组织(P 0. 05);在卵巢发育初期表达量最低,随后逐渐升高,到产卵后期开始下降; 17α-羟孕酮刺激结果显示,试验组卵巢发育速度明显加快,同时UB-E2基因的表达量也显著上升,卵巢发育速度和UB-E2基因表现为受17α-羟孕酮刺激响应一致。推测UB-E2基因在克氏原螯虾的卵巢发育和配子发生中起着重要的作用,本研究为克氏原螯虾性腺发育分子调控机制提供一定的理论依据。     

雌雄克氏原螯虾染色体核型比较分析

克氏原螯虾（Procambarus clarkii）染色体数目众多、形态短小的特征,增大了染色体研究的难度。为了更深入地了解克氏原螯虾的细胞遗传学特征,采用一种改进的染色体制备方法,从克氏原螯虾的触角腺中获得了高质量的染色体中期相,并比较了雌雄克氏原螯虾染色体核型之间的差异。结果表明,雌雄克氏原螯虾在染色体数目、染色体配对及分组上是一致的,即雌雄克氏原螯虾的染色体数目均为2n=188,核型公式为n=94=61m+19sm+7st+7T。雌雄克氏原螯虾在染色体核型数据上有所差异,雌性克氏原螯虾的染色体相对长度范围为0.72%～1.61%,雄性克氏原螯虾的染色体相对长度范围为0.58%～1.89%;雌雄克氏原螯虾最大的染色体均是sm型,而雌雄最小的染色体不同型,雄性最小的染色体为T型,雌性最小的染色体为st型;雌雄克氏原螯虾的st型染色体的形态差别最大,但未发现异型性染色体。