黄酒用脲酶产生菌的分离与选育

从２２批土样中分离到２７０余株能以尿素为唯一氮源的细菌，经变色圈法初筛，摇瓶复筛，获得产眠酶水平较高的菌株９０４３，初步鉴定为肠杆菌属菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｓｐ．）．采用紫外线和亚硝基胍进行诱变育种，得到产酶水平为０．３４Ｕ／ｍｌ的脲酶产生菌株９０４３Ｃ１２．模拟黄酒中应用试验表明，该菌所产豚酶在２５℃，ｐＨ５．０条件下，只需向含乙醇２０％（ｖ／ｖ）和尿素３０ｍｇ／Ｌ的模拟酒中添加６．０Ｕ／Ｌ就可在３６ｈ内使尿素的去除率达９０％以上．     

产蛋鸡大肠杆菌病的诊断及致病性大肠杆菌O107的分离与鉴定

河北省某肉鸡场发生产蛋鸡突然死亡和腹泄的疾病，经尸体剖检、病原分离鉴定，确定为产蛋鸡的大肠杆菌病。此菌的血清型为O107。同时分离到阴沟肠杆菌，作者认为阴沟肠杆菌致病力差，但当机体抵抗力降低或有其它病原侵入后，它可继发感染协同致病。鸡致病性大肠杆菌很多，但由血清型O107大肠杆菌致病的报告尚少。通过药敏试验选择庆大霉素，卡那霉素等高敏药物很快使疫情得到平息。     

产气肠杆菌厌氧发酵产氢工艺实验

以产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)为纯菌种,葡萄糖(G)为发酵底物,分别选取25、30、35、38℃的发酵温度,初始pH值为3.5、4.5、5.5、6.5的酸碱度,葡萄糖与蛋白酶消化物的质量比为2、3、6的碳氮比的实验条件进行厌氧发酵产氢工艺及其代谢调控途径的实验。实验结果表明,产气肠杆菌具有一定的耐酸性,耐酸范围为pH值4.5~7.0;不同工艺条件下产气肠杆菌发酵产氢的周期在68~156 h之间。产气肠杆菌发酵产氢周期最短为68 h的最优化发酵工艺条件为温度35℃、pH值6.5、碳氮质量比3,其氢气产率达261.5 mL/g,氢气转化率为2.1 mol/mol。     

构建同源调节基因的广谱穿梭质粒

利用PCR方法扩增生防细菌成团肠杆菌（Enterobacter agglomerans,IC1270)基因组调节基因CrrS、GrrA、rpoD、rpoS，插入质粒pGEMT-easy中。切下目的片段与酶切穿梭质粒pJFF224-XN连接，经PCR及酶切鉴定，调节基因片段分别以正向或反向插入到质粒的T4启动子下。将带有调节基因的穿梭质粒导入IC1270的感受态细胞，得到带有同源调节基因不同插入方向的IC1270衍生物。抑菌实验结果表明，正向插入的调节基因未提高对病原真菌的生防效果，而反向插入的调节基因丧失对病原真菌的颉抗作用，推测与抑制调节基因的转录有关。     

阴沟肠杆菌UW4菌株ACC脱氨酶基因的克隆、序列分析及原核表达

从阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)UW4菌株提取细菌总DNA,根据已报道的阴沟肠杆菌ACC脱氨酶(1-aminocy-clopropane-1-carboxylicaciddeaminase)基因序列设计简并引物,通过PCR扩增获得1条约1.02kb特异片段,把该片段连接到pGEM-Tvector上进行测序。序列分析结果表明,该基因编码区全长为1017bp,共编码338个氨基酸残基,与报道的序列相比仅存在8个核苷酸的差异,同源性达99.1%;将其翻译成氨基酸序列后发现,仅引起了4个氨基酸残基的变化,氨基酸同源性为98.2%。利用DNASIS软件对蛋白质二级结构进行分析比较,发现其蛋白质二级结构及其单元与报道的序列完全一致。将其插入原核表达载体pET-28b进行诱导表达,发现其表达蛋白在分子量约39kD处比对照多出一明显条带;经Westernblot分析检测,发现此带即为His-ACDS融合蛋白。     

Using the spermosphere model technique to describe the dominant nitrogen-fixing microflora associated with wetland rice in two Egyptian soils

Summary This study is an attempt to describe the dominant N₂-fixing microflora associated with the roots of wetland rice. Rice cultivar Giza 171 was grown in a phytotron on two alluvial Egyptian soils for 8 days, a stage when the nitrogenase activity of undisturbed plants reached a level of 245 × 10^–6 mol C₂H₄ h^–1 g^–1 dry weight of leaf. The roots and rhizosphere soils were then used for counting and isolating dominant diazotrophs. Counts and initial enrichment steps were carried out on a selective medium made of an axenic rice plantlet, the spermosphere model, incubated under 1 % acetylene. The counts were very high, exceeding 10⁸ bacteria g^–1 dry weight of rhizosphere soil. Enterobacteriaceae were dominant; most isolates were Enterobacter cloacae belonging to different biotypes in the two soils. Enterobacter agglomerans, Citrobacter freundii and Klebsiella planticola were also present as members of the dominant microflora. Azospirillum brasilense and Azospirillum lipoferum were present as well, but less abundant.     

海南发现2株新德里金属β-内酰胺酶-1 阳性的阴沟肠杆菌

为了解临床分离的携带新德里金属β-内酰胺酶-1（NDM-1）基因的阴沟肠杆菌耐药性,笔者采用法国生物梅里埃公司的VITEK-2全自动细菌分析系统对临床分离的2株阴沟肠杆菌进行了鉴定,用IP／IPI E-test试纸条法协同试验检测了产金属酶类的碳青霉烯酶,用浓度梯度E-test条法进行药物敏感性试验,并对PCR产物进行电泳后纯化,测序比对确定基因型。结果表明,2株阴沟肠杆菌均携带β-内酰胺酶6如MDM-1基因,对美洛培南、亚胺培南、哌拉西彬他唑巴坦、头孢替坦、头孢吡肟、头孢曲松、头孢他啶、氨曲南、复方新诺明、阿米卡星等均有耐药性。由于分离出这2株携带NDM-1基因的阴沟肠杆菌的患者都是海南省居民,从未有国外旅行史,说明与国外报道的NDM-1肠杆菌科细菌没有流行病学关联,这对了解该基因在海南地区的流行情况具有重要意义。