AANAT基因在滩羊不同繁殖时期卵巢中的转录差异及DNA甲基化程度分析

试验旨在检测5-羟色胺-N-乙酰基转移酶（AANAT）基因在绵羊休情季节和繁殖季节（卵泡期和黄体期）卵巢组织中的转录差异,并分析转录差异是否由DNA甲基化修饰程度改变所导致。试验采用自然环境条件和饲养管理一致,且体重差异在0.5 kg范围内的空怀母滩羊作为试验动物,采集其休情期、卵泡期和黄体期（每个时期3只）的卵巢组织,采用SYBR染料法进行实时荧光定量PCR检测AANAT基因在滩羊不同繁殖时期卵巢组织中的转录水平。随后针对转录水平有差异的两个时期（休情期和卵泡期）的样本,利用MethPrimer 2.0在线软件预测AANAT基因启动子区和第一外显子区的CpG岛;用重亚硫酸盐测序法（BSP法）检测AANAT基因启动子区及第一外显子区的甲基化程度。试验结果显示,滩羊休情期卵巢组织中AANAT基因转录水平显著低于卵泡期的AANAT基因转录水平（P<0.05）,休情期与黄体期滩羊卵巢组织中AANAT基因的转录水平差异不显著（P>0.05）。滩羊卵巢组织中AANAT基因启动子区上存在着一个长度为173 bp的CpG岛,第一外显子区存在着一个长度为118 bp的CG岛。然而,两个甲基化岛区内的单个CpG位点甲基化程度在滩羊休情期和卵泡期之间均不存在显著差异,暗示AANAT基因的表达受甲基化修饰外的因素调控。本研究结果可为进一步探讨AANAT基因在季节性发情和卵泡成熟中的功能提供参考资料。     

发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立

建立依赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA）快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因,设计特异性引物,优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量,建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌,扩增其产物后进行电泳检测,验证方法特异性。结果表明：采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好,优化后反应体系体积50 μL时,UvrD解旋酶添加量为0.10 μg,T4 gp32添加量为5.0 μg,得到与设计序列长度（304 bp）一致的扩增产物,检出限为2.6×102 CFU/g;该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求,具有较高的灵敏度、易操作,可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。     

双表达去势DNA疫苗的构建及其稳定性研究

试验旨在构建一种更安全有效的新型免疫去势DNA疫苗,通过选取下丘脑-垂体-性腺轴（hypot halamic-pituitary-gonadal axis,HPG）的上游调控基因吻素1（KISS1）和促性腺激素释放激素（GnRH）作为靶标,借助2A肽的自剪切功能,引入平衡致死系统代替抗性基因筛选流程,成功将GnRH和KISS1转入非抗性筛选质粒pVAX-asd中,酶切验证和测序对比验证目的基因的插入方向和序列完全正确。重组质粒转染HeLa细胞,反转录后扩增目的基因结果显示,重组质粒在真核细胞内能够正常转录,保证重组质粒在导入机体后能够正常表达,从而引起特异性免疫反应。将构建成功的质粒转入减毒的猪霍乱沙门氏菌C500中,获得可直接口服免疫的活载体疫苗,酶切和测序结果表明,双表达重组质粒成功导入工程菌中。将活菌疫苗在体外连续传代50次,选取0、2、5、10、20、30、40、50代的菌株进行稳定性研究,生长曲线检测结果表明,工程菌在体外连续传代50次的过程中,其生长特性无明显变化,且与减毒猪霍乱沙门氏菌C500的生长特性一致,未因携带质粒发生明显变化;同时将各代菌液扩增沙门氏菌标志基因（invA）和毒力基因（crp）,结果表明多次传代后工程菌仍然具有沙门氏菌的特性,其减毒特性也无变化。各代菌液质粒酶切验证显示,多次传代并不影响质粒的稳定性,重组双表达质粒能够在沙门氏菌C500中维持正常拷贝功能。综上所述,该重组质粒和工程菌疫苗均具有良好的稳定性,可直接应用于动物免疫去势的研究。     

DNA barcoding for identification of cryptic species in the field and existing museum collections: a case study of Aethomys and Micaelamys (Rodentia: Muridae)

DNA barcoding has been proposed as a method for species identification. However, this method has been criticised for its over-reliance on a single mitochondrial gene. In this study, four mitochondrial gene regions and one nuclear gene region were used to investigate their different abilities to identify tissue associated with museum specimens of Aethomys chrysophilus, Aethomys ineptus and Micaelamys namaquensis. Aethomys chrysophilus and the more recently elevated A. ineptus are indistinguishable on morphological grounds; however, their ranges are largely parapatric with only one syntopic locality currently known. All of the mitochondrial gene regions were able to separate M. namaquensis from A. chrysophilus and A. ineptus, but they varied in their abilities to resolve differences between A. chrysophilus and A. ineptus. The sequence results identified a specimen from KwaZulu-Natal that was misclassified and should have been identified as A. ineptus. Seven specimens that had not been reclassified following the elevation of A. ineptus to species level were identified as A. ineptus. Individuals of A. chrysophilus from Malawi could not be classified as either A. chrysophilus or A. ineptus, and may be a hybrid or a new, distinct species. This study indicates that DNA barcoding may be used to separate M. namaquensis from A. chrysophilus and A. ineptus, and although it was not able to separate A. chrysophilus and A. ineptus, it did indicate specimens from Malawi may be a new cryptic species.     

青海东部农区引进燕麦品种各器官C、N、P生态化学计量学特征变化研究

以4个引种燕麦(Avena sativa)为典型代表,对其不同生育时期根、茎、叶中的C、N、P含量及其化学计量学特征进行测定,探讨不同生育时期燕麦C、N、P元素含量及其化学计量比的变化规律,为燕麦饲草的科学收获提供理论依据。结果表明：燕麦全株C、N、P含量分别为322.30～333.97、17.42～75.62、2.74～5.42 mg·g^-1,燕麦根C、N、P含量分别为298.42～317.92、11.47～73.71、2.82～3.42 mg·g^-1,燕麦茎C、N、P含量分别为311.25～338.86、10.15～75.16、2.44～5.06 mg·g^-1,燕麦叶C、N、P含量分别为330.80～372.47、30.64～113.80、2.59～8.65 mg·g^-1;各器官间C、N、P含量表现为叶>茎>根。此外,燕麦各器官C、N、P含量的积累过程具有一定季节特征,C含量积累过程受生育时期影响较小,表现出较强的稳定性;而N和P含量的积累过程受生育时期影响较大,其在拔节期～抽穗期均...     

棉花分子育种研究进展

本文主要综述了我国近２０年来棉花分子育种在理论基础、技术方法、育种机理以及新品种培育等方面研究取得的成就及新进展，并讨论了棉花分子育种的发展方向     

Avoiding Obstacle Planning for Robots on Molecular Optimization Algorithm

Interest in DNA computing has increased overwhelmingly since Adleman successfully demonstrated its capability to solve Hamiltonian Path Problem. This article introduces the improving method in virtue of the biological thery of DNA technology, a new molecular algorithm is advanced. After a numerical simulation, the result shows that it avoids the prematurely and lower convergent speed of the classic genetic algorithm, and inherits global search capability, the validity and the speed of the genetic algorithm have been increased. The best result can be obtained in few iterative times. It is fit for solving path planning problem.     

以冻融法快速纯化高活力基因工程Taq DNA聚合酶

用含有TaqDNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli DH5α菌株，IPTG诱导表达Taq DNA聚合酶，利用该酶的热稳定性，反复2次－70℃，75℃交替冻融以裂解细胞释放胞浆；以高速离心除去冻融变性的细胞碎片及核酸蛋白的复合物以达到快速纯化Taq DNA聚合酶的目的。PCR扩增反应和SDS－PAGE分析表明所制备的Tap DNA聚合酶的纯度，活力，敏感性，特异性均达到试验要求。该方法具有快速简便的优点。     

变铅青链霉菌DNA的研究——Ⅱ.位点特异性降解与DNA修饰的关系

变铅青链霉菌的DNA上存在着一种异常的修饰,使其在含有微量Fe~(++)的缓冲液中电泳时,双链DNA遭到降解。DNA的切割是位点特异性的。与已知修饰特征的DNA进行同步试验发现,变铅青链霉菌的这种特异性修饰与目前所发现的修饰系统(如DNA甲基化)均不相同,很可能是一种新的修饰系统。