贵州威宁黄牛线粒体DNA D-loop区全序列分析

为了解贵州威宁黄牛的遗传多样性及遗传背景，我们分析测定了19个个体线粒体DNA D-loop区序列。结果检测到8种单倍型，7种为普通牛血统的单倍型，1种为瘤牛血统的单倍型，表明威宁黄牛同时受普通牛和瘤牛的影响。本研究同时构建了19个威宁黄牛个体的系统发生树，结果发现它们明显分为普通牛血统单倍型组和瘤牛血统单倍型组两组。     

草原红牛及其杂交群体中微卫星DNA多态性研究

选用草原红牛及其与利木赞牛的杂交后代66头作为试验牛群体,提取血液及肝脏基因组DNA,设计8对微卫星引物进行PCR扩增,从分子水平上对草原红牛及其杂交群体8个位点的遗传多态性进行微卫星分析。结果表明,在草原红牛中,ETH225、IDVGA2、IDVGA46和IDVGA44等位基因数分别为5、4、3和4,多态信息含量(PIC)分别为0．5420、0．6736、0．5218和0．5750,这4个位点均为高度多态。而另4个位点BM2113、BM1824、IDVGA55和TGLA44等位基因数分别,2、2、2和5,多态信息含量分别为0．3698、0．3604、0．3538和0．4708,属于中度多态性位点。在杂交牛群体中,BM2113、ETH225、IDVGA2、IDVGA46、ID- VGA44、BM1824、IDVGA55和TGLA44这8个位点的等位基因数分别为4、5、4、4、5、4、4和6,多态信息含量(PIC)分别为0．6432、0．5943、0．6593、0．5794、0．7259、0．6121、0．6120和0．6204,杂合度为0．7034,均属于高度多态性位点。这些微卫星位点作为遗传标记应用于草原红牛遗传育种研究之中是可行的。     

表达禽流感病毒H5HA、H7HA基因DNA疫苗的免疫原性研究

为研究双顺反子DNA疫苗对禽流感病毒（AIV）的保护作用，将H5和H7亚型AIV的HA基因克隆到同一表达栽体上，构建了双顺反子HA基因表达质粒pCI—H5HA—H7HA。以此质粒肌注免疫4周龄SPF鸡，首次免疫后3周加强免疫，同时设pCI—H5HA和pCI—H7HA联合免疫组及空白对照组，每周采血用微量血凝抑制法检测HI抗体。加强免疫后3周分别以100LD50的高致病力禽流感病毒（HPAIV）A／Goose／Guangdong／1／96（H5N1）和A／FPv／Rostock／34〈（H7N1）进行致死性攻击。结果显示各免疫组均可刺激鸡体产生H5、H7特异性抗体，pCI—H5HA—H7HA诱导产生的抗体对H5N1和H7N1的攻毒保护分别为50%和10％，而pCI—H5HA和pCI—H7HA联合免疫的攻毒保护均为70％。表明双顺反子质粒可诱导鸡产生较好或一定的保护，但免疫效果不够理想，推测与DNA的摄取及其体内表达有关，可望通过调整DNA疫苗的多种因素提高免疫效果。     

EAV/DNA指纹图谱条带J与OPAY02型标记对新扬州鸡体质量和生长影响的联合研究

随机选择新扬州鸡大型系和小型系交后代48只，联合研究EAV／DNA指纹图谱带J与OPAY02型2种分子遗传标记与新扬州鸡体质量和生长的关系，结果表明，8、10、26周龄新扬州鸡体质量在2种分子标记的不同组合间比较均存在极显著的差异，尤其是J^-S1^-S2^＋产条带组合遗传标记，8、10、26周龄新扬州鸡体质量均显著或极显著地高于其他JS1S2组合，根据数量性状多基因假说，可以推测J、S1和S2可能是影响鸡增重的多基因，2种分子遗传标记组合J^-S1^-S2^＋遗传标记有望成为鸡体质量选择的遗传标记。     

A lost Sorraia maternal lineage found in the Lusitano horse breed

A common female founder individual of the Portuguese horse breeds Sorraia and Lusitano was found while conducting research on the variation of the Lusitano mitochondrial DNA lineages in relation to studbook information. We obtained 416‐bp control region sequences from 16 descendents of a female Sorraia founder (Pomba) still represented in the living population of the Lusitano, according to the most recent edition of this breed's studbook. The same haplotype was found for all analysed samples and belongs to the haplogroup described by several authors as having predominantly Iberian, South American and North African haplotypes bringing new insights on the relationship between the Sorraia and the other Iberian breeds. This work illustrates how weak the boundary of breed establishment can be, especially at the same geographical region. Using the same founders in different breeds is surely one of the explanations to frequently shared haplotypes among recent breeds, resulting in a lack of consistency between mtDNA sequences and breeds and/or geographical regions.     

Molecular assessment of polymorphism among local Jordanian genotypes of the common fig (Ficus carica L.)

This research was conducted to assess polymorphism among local genotypes of common fig available in Jordan (one of countries of origin). Leaf samples were collected in spring for DNA isolation from 20 different local genotypes (5 cultivars and 15 landraces). Two more wild types and one foreign cultivar were included. The genotypes were assessed using the randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) technique. Six of the 19 screened primers showed reproducible polymeric profiles. Out of 62 amplified bands, 48 were polymorphic (77%). They generated 1104 data entries (591 for present and 513 for absent bands). After determining Jaccard similarity index, some genotypes showed high genetic similarity (90% between F20 and F22), while other were less similar (3–18% between F11 and all other genotypes). Moreover, the primers were evaluated for their discriminating power, where primer RAPD06 showed the weakest power (0.431), while highest values of 0.989 and 0.996 were achieved for primers RAPD02 and RAPD13, respectively.     

条斑型玉米圆斑病病原鉴定及其生物学特性研究

 本研究通过致病性测定、形态学和分子生物学鉴定方法,首次明确陕西省发生的玉米条斑型叶斑病是玉米圆斑病的一种症状类型,由玉米生离蠕孢(Bipolaris zeicola)3号生理小种引起。供试品种豫玉22、农大108、农大3138、东单7号、沈单10号、沈单16号、户单4号、新陕资1号、高农1号和陕单9号都对3号生理小种表现感病,品种间抗病性差异不显著。此菌在PDA、PSA、OMA、CMA、WA和Czapek上均可生长,最适生长培养基为PDA。菌落生长温度为5~35℃,最适菌落生长温度为25℃。分生孢子在5~40℃均可萌发,低于5℃高于40℃萌发率极低,萌发的最适温度为28℃。孢子在pH 3~11均可萌发,萌发最适pH为5。在自来水中分生孢子可以萌发,蔗糖和葡萄糖溶液可以明显促进孢子萌发。     

3种粒线虫多重PCR检测方法

 剪股颖粒线虫[Anguina agrostis (Steinbuch,1799) Filipjev,1936]、小麦粒线虫[Anguina tritici (Steinbuch,1799) Filipjev,1936]和维氏粒线虫[Anguina wevelli (Van den Berg,1985) Siddiqi,2000]都是重要的植物病原线虫,它们在成熟种子和虫瘿中的虫态通常是幼虫,而这3种线虫的幼虫形态非常相似,难以根据其特征对它们进行快速准确的种类鉴定。本研究根据这3种线虫的rDNA-ITS区域序列,分别设计筛选了特异性引物AgrF₁/AgrR1、TriF₁/TriR1、WevF₁/WevR1,构建了这3种线虫单条幼虫多重PCR检测体系,获得3个大小差异明显的片段,表明这些引物设计合理,适合这3种线虫的快速准确检测。     

苇状羊茅与多年生黑麦草内生真菌菌丝基因组DNA提取的优化及PCR初步检测

感染内生真菌的禾草在牧草和草坪业上具有重要的生态和经济意义，家畜采食感染Neotyphodium coenophialum和N.lolii的苇状羊茅和多年生黑麦草会发生中毒。本研究收集天津口岸1998年以来进境的部分苇状羊茅和多年生黑麦草种子，对经镜检确认带有内生真菌的种子进行分离培养，对疑似菌株的菌丝用改进的Moiler等方法进行基因组DNA抽提，测定浓度及纯度，对照原方法，DNA的纯度有较大提高，浓度略有上升。Tubulin2基因的引物IS1-IS3扩增结果显示为单一的条带，结合形态学和序列比对，分离培养得到的菌株可以基本确定为N．coenophialum和N。lolii。根据Genbank中N.coenophialum和N.lolii的NC25基因序列设计出引物F1-R1，扩增得到能区分开N.coenophialum和N．lolii的单一条带（相差160bp），建立了N．coenophialum和N．lolii的PCR检测方法，结果准确可靠。     

菠萝DNA的提取及AFLP反应体系的建立

为了应用AFLP分子标记对菠萝种资源进行种质鉴定、分类及亲缘关系等方面的研究,最重要的是要获得高质量的DNA,菠萝叶片革质化程度较高,且纤维、多糖、多酚等次生代谢物质含量较多,严重干扰DNA的抽提或影响其后的AFLP双酶切及其扩增反应,本研究以菠萝叶片为材料,利用改良CTAB法得到了39个高质量的菠萝分类群的DNA基因组,并进行了AFLP分析,得到了条带清晰、多态性好的菠萝品种指纹图谱,这为菠萝基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究提供理论依据。