拮抗菌株的筛选及其发酵滤液的抑菌活性

为了获得高效饲用益生菌,采用体外筛选培养法,从土壤中筛选出三株具有抑菌活性的菌株,初步鉴定为地衣芽孢杆菌。其中1#菌株对动物肠道中有害菌如金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌均有较强抑制作用,对其性质进行考察结果表明,在30℃,pH7.0,150 r/min的条件下,恒温振荡培养24 h,测其发酵滤液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌效价分别为2 000 IU/mL1、500 IU/mL、1 500 IU/mL。在以金黄色葡萄球菌作为指示菌的条件下,该菌株发酵滤液具有较强的热稳定性,60℃放置1 h,抑菌活性下降了29%;100℃放置30 min,抑菌活性下降了45%,放置1 h,抑菌活性下降了48%;121℃放置1 h,抑菌活性仍能保持40%;该发酵滤液抑菌作用的最适pH值为7.0,在pH3.0时能保持71%的抑菌活性,在pH11.0时,仍能维持67%的抑菌活性,此发酵滤液对蛋白酶K不敏感,并且蛋白酶K对该发酵滤液的抑菌活性也起一定的促进作用。     

钾细菌制剂对水稻生长发育的影响

描述了在速效钾缺乏的土壤上，施用钾细菌制剂对水稻生长发育的促进作用。通过钾细菌促进土壤矿物释放一定量的速效钾，抑制水稻前期无效分蘖的生长，促进后期植株上部功能叶片生长，提高植株光合效率及水稻对土壤中其它养分的利用率，协调养分平衡，导致水稻最终增产增收。     

添加枯草芽胞杆菌和营养物净化养殖污水的研究

利用室内试验,研究了加入营养物促进枯草芽胞杆菌净化养殖废水的方法。实验表明外源枯草芽胞杆菌比土著细菌对去除废水中溶解有机物和总氨氮有更强的能力,净化过程可以分为2个连续的阶段:溶解有机物的降解和总氨氮的去除。从起始日到第2d,细菌直接溶解有机物为碳源和氮源,48hCOD去除效率达(57.7±5.5)%,与对照组有显著性差异。在第2d到第5d,碳和磷相对于氮的不足限制了细菌增殖和去除总氨氮;葡萄糖和(或)磷酸盐的加入显著影响总氨氮去除效率,而加入复合维生素和(或)微量元素对其没有影响。同时加入葡萄糖和磷酸盐时,总氨氮去除效率大于85%,并形成悬浮的白色菌胶团。净化养殖废水时,水体中C∶N和N∶P质量比建议分别为5.4∶1和5￣7∶1。水中最高的细菌水平没有超过108CFU·mL-1,估计与细菌菌胶团的形成有关。     

农杆菌介导的优良玉米自交系遗传转化体系的建立

以杂交育种中广泛使用的优良玉米自交系340,4112为材料，用带有质粒pGBIL04(actin.Bt.35S.bar)的根癌农杆菌LBA4404转化其幼胚及其初始愈伤组织，经PPT抗性筛选后分化再生植株，PCR分子检测初步证明Bt基因已整合到再生植株基因组中，转化率为1.68%-4.44%。本实验利用转化受体的抗性筛选频率对转化体系进行了优化，结果表明：比较适宜的感染液浓度为OD600=0.5；预培养有利于幼胚转化，预培养时间以刚刚诱导出新鲜稳定的初始愈伤为宜。适当降低共培养温度到22℃可以提高农杆菌介导的玉米遗传转化的筛选频率和PCR阳性率。     

生防芽孢杆菌与扑海因混配对番茄早疫病菌的抑制作用

采用生长率法试验研究了对芽孢杆菌(Bacillusspp.)B1、B2、B6、B8与低毒化学农药扑海因混配后对番茄早疫病菌(Alternaria solani)的抑制作用进行了研究,结果表明:芽孢杆菌B1、B2、B6、B8与低浓度的扑海因混配对番茄早疫病菌有良好的抑制作用.当扑海因浓度为0.6μL/mL时与4种生防菌混配对番茄早疫病菌的抑制率提高了8.0%-13.89%;当浓度为0.3μL/mL时混配作用的抑制率提高了23.02%-35.7%;当浓度为0.15μL/mL时混配作用的抑制率仅为56.56%-61.03%;当浓度下降到0.08μL/mL以下时,4种生防菌分别和扑海因混配对番茄早疫病菌的抑制率与仅使用4种生防菌对番茄早疫病菌的抑制率无显著差异.表明扑海因在低浓度(0.08μL/mL)下与4种生防菌混配达不到良好的防治番茄早疫病菌的效果.扑海因浓度为0.3μL/mL时与4种生防菌混配,两者协同作用增强了抑制效果,对番茄早疫病菌有很好的抑制作用,为适宜混配浓度.     

PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究

 Bt菌株C0 0 2对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力 ,PCR RFLP鉴定含有cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知杀虫蛋白基因cryX等 ,其中cry1Ca位于染色体DNA 6～ 9kb的EcoRI片段。染色体和质粒DNA分别经EcoRI完全酶切和Sau3AI部分酶切、电泳回收 6～ 9kb片段。E .coli Bt穿梭载体pHT315分别与目的DNA连接、转化大肠杆菌感受态细胞后获得了相应的DNA文库。约 5 0个转化子合为一个转化子池 ,采用PCR RFLP方法快速检测 ,分别从约 2 0 0 0质粒DNA文库转化子和 4 0 0个染色体文库转化子中筛选获得了cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知基因cryX的阳性克隆 ,相应命名为pHT 1Aa、pHT 1Ca、pHT 2Ab和pHT X。限制酶切分析表明 ,含有cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab基因的克隆片段均含有相应基因的保守物理图谱。进一步将这些质粒分别导入Bt无晶体突变株CryB-,SDS PAGE分析表明 ,只有cry1Ca表达了约 130ku杀虫晶体蛋白。初步杀虫生测结果显示 ,cry1Ca对甜菜夜蛾具有高毒力 ,7d校正死亡率为 10 0 %。     

苏云金芽胞杆菌杀虫原粉对铬离子吸附热力学研究

通过静态吸附试验,研究了苏云金芽胞杆菌原粉对水溶液中铬离子(Cr6 )的吸附热力学特性。铬离子初浓度依次为50、100、150、200、250、300、400、500mg·L~(-1),菌体浓度固定为1g·L~(-1),pH值为2,分别在5℃、20℃、35℃、50℃条件下进行等温吸附,采用Freundlich方程和Langmuir方程进行拟合。结果显示,苏云金芽胞杆菌原粉对铬离子的吸附符合Langmuir(r>0.979)方程和Freundlich(r>0.977)方程。吸附焓△H为1.39￣2.33kJ·mol~(-1),吸附自由能ΔG为-3.75￣-2.84kJ·mol-1,吸附熵ΔS为15.2￣18.8J·mol~(-1)。苏云金芽胞杆菌原粉对铬离子的吸附是吸热过程,吸附能够自发进行。     

枯草芽孢杆菌C-36纤维索酶的纯化及酶学性质

枯草芽孢杆菌C-36纤维素酶经硫酸铵、SephadexG-75、SephadexG-100分离纯化后,得到一个电泳纯的葡聚糖内切酶。SDS-PAGE结果表明,该酶分子量约为35kD。最适反应温度和pH分别为65℃和pH6.8,Zn2+、Pb2+、Fe3+对酶有抑制作用,Ba2+、Fe2+对酶有激活作用,在50℃,pH6.8条件下,酶对CMC-Na的米氏常数Km为0.34g/L,最大反应速度Vmax为0.17mg/(min.mL)。     

由苏云金芽胞杆菌胞晶混合物直接提取原毒素的方法

采用室内实验技术,研究了直接从苏云金芽胞杆菌胞晶混合物提取原毒素的方法。胞晶混合物依次用0.5mol·L-1NaCl和无菌去离子水洗涤3次,洗涤后的沉淀物用0.05mol·L-1NaOH 0.1mmol·L-1PMSF溶液溶解10min,10000r·min-1离心15min去除不溶物。上清液以25%乙酸调至pH4.4,得原毒素蛋白沉淀,冷冻干燥。SDS-PAGE电泳扫描结果表明,原毒素分子量为130kDa,在提取过程中没有发生降解。该提取方法具有操作简便、成本低、效率高等优点。     

紫贻贝多糖脱除蛋白质方法的研究

探讨了酶法与Sevage法联用脱除紫贻贝（Mytilus edulis linnaeus）多糖蛋白。通过正交中心组合实验，应用响应面分析法考察酶法脱蛋白的工艺条件。结果表明，酶法脱蛋白的最优工艺参数为：pH7．1，枯草杆菌中性蛋白酶加入量0．5U／mg粗多糖，温度41℃，氯化钙加入量7．4mg／g，时间3h。在酶解的基础上应用Sevage法脱除游离蛋白，适宜的工艺条件为：氯仿：正丁醇=5：1，料液比4：1，振摇时间20min。酶法与Sevage联用法脱除贻贝多糖蛋白的脱除率为78．5％；与其它传统脱蛋白方法比较，该法适应范围广、样品损耗少、经济、快速、效果理想，为多糖的分离纯化研究提供了有益的参考。