酵母源生物饲料的应用及其发展趋势

本文简述了酵母源生物饲料的种类及研究应用进展，同时指出了酵母源生物饲料研究及应用中存在的问题及今后的发展趋势。     

鸡蛋清溶菌酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达研究

研究从鸡输卵管组织提取细胞总RNA,根据Gene Bank中已发表的鸡溶菌酶基因序列,设计合成特异引物,合成cDNA序列,并以此为模版,PCR扩增鸡溶菌酶基因。用Xho I和Xba I对LYZ基因的PCR产物和真核表达载体pPIC6αA进行双酶切后转化到大肠杆菌(DH5α)中,构建成为真核重组表达载体pPIC6αA-LYZ。该载体经PstXI酶切线性化后,以电击转化方法导入到毕赤酵母宿主菌X-33中,经Blasticidin抗性筛选,得到鸡溶菌酶基因重组毕赤酵母菌株;甲醇96h(发酵罐诱导100h)诱导表达,经Wetern-blot检测分析,基因重组工程菌株摇瓶诱导表达溶菌酶的表达量约为4mg/l,发酵罐诱导表达的表达量约为10mg/l。     

禽传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的表达

根据GenBank已公布的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计1对IBV S1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1 566 bp IBV S1基因表达片段,5′端不含信号肽序列,3′端添加了终止密码子。用限制性内切酶SnaB和Not将S1基因和载体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1。用限制性内切酶Bgl将表达质粒pPIC9K-S1线性化,然后用电转化的方法导入毕赤酵母GS115,在MD平板上生长的转化子经过PCR鉴定和表型筛选后,获得了整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1 His Muts。将重组菌株在1%甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,IBV S1基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的分子量约为76 000,能与IBV阳性血清特异性结合,表达的蛋白占上清中总蛋白量的12.5%。     

重组牛皮蝇素A蛋白的免疫试验

用由毕赤酵母表达的皮蝇素A（Hypdermin A，HA）蛋白分别免疫新西兰大白兔和牦牛，了解该蛋白免疫效果。用两种不同分子量的重组HA蛋白分别免疫新西兰大白兔1次和2次，ELISA测其抗体消长规律。结果表明，3周后抗体水平达到峰值，后缓慢下降。50KD蛋白免疫效果较30KD蛋白好，差异非常显著（P〈0．01）。用其中50KD的重组HA蛋白分别在7月和9月免疫自然感染牛皮蝇蛆病牦牛，观察感染率和感染强度，ELISA测其抗体消长规律。结果表明，7月免疫组与9月免疫组感染率分别为83．3％和36．3％（对照组为55．5％）；平均感染强度分别为6．5和4．2（对照组为13．0），差异不显著（P〉0．05）。免疫后，抗体水平上升，3个月后缓慢下降。9月免疫组免疫效果较7月免疫组好，三组抗体水平差异非常显著（P〈0．01）。上述研究结果为防治牛皮蝇蛆病疫苗的深入研究和实践运用提供了参考依据。     

毕赤酵母表达皮蝇素A蛋白

建立了用毕赤酵母表达系统表达皮蝇素A（Hypodermotin A，HA）的技术，并对表达条件进行了优化筛选。将皮蝇素A基因连接到质粒pPIC9k上，构建了重组转移质粒pPIC9k—HA。重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后，用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选。重组酵母细胞在含0．5％甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白，培养3d后收取上清，用阴离子交换层析柱分离纯化。经SDS—PAGE检测，所表达的蛋白相对分子质量约为30000。Western—blotting表明，该蛋白能与兔抗HA血清特异性结合。明胶电泳检测显示，该蛋白具有酶活性。单因素改变表达条件的结果表明，甲醇浓度在0．5％～1％、溶氧量在70％以上、诱导2～3d的情况下表达产量最高，达1500mg／L左右。该研究结果对防治牛皮蝇蛆痛疫苗的深入研究及毕赤酵母在寄生虫领域的应用有一定价值。     

味精废液酵母代替进口鱼粉饲喂生长猪的试验

研究味精废液酵母饲喂生长猪的效果,选择2月龄杜长大生长猪60头,体重约25kg,随机分成4组,每组15头,对照组喂场内含进口鱼粉3%的常规饲粮;试验Ⅰ组用1.5%的味精废液酵母代替1.5%的进口鱼粉;试验Ⅱ组用酵母全部代替鱼粉;试验Ⅲ组为验证酵母的最大用量而将酵母用到5%(代替3%鱼粉和2%豆粕)。测定试猪的生产性能、饲料转化率和经济效益等指标,并用2mol/L盐酸不溶灰分法测定饲粮主要养分的消化率。经28天的饲养试验显示,3个试验组试猪日增重比对照组少25～56g,但差异不显著(P>0.05)。料重比从小到大顺序为试验Ⅱ组、对照组、试验Ⅲ组、试验Ⅰ组,分别为2.28、2.35、2.36、2.50,全期头均毛利从大到小顺序为试验Ⅱ组、试验Ⅲ组、对照组、试验Ⅰ组,分别为51.27、50.37、45.78、41.69元。消化试验表明,酵母代替鱼粉后,饲粮主要养分消化率略有降低但差异不显著(P>0.05)。由此证明,味精废液酵母代替进口鱼粉饲喂生长猪是可行的。     

饲料酵母的开发与应用

饲料酵母是利用工业废渣等生产的一种蛋白质饲料,其蛋白质含量为45～60％,各种必需氨基酸齐     

Effects of Yeast Culture on Growth Performance,Meat Quality and Intestinal Microflora of Broilers

The experiment was conducted to study the effects of yeast culture on growth performance, meat quality and intestinal microflora of broilers. A total of 432 1-day-old AA commercial broiler chicks with initial body weight of (41.73±0.15)g were randomly divided into 4 groups with 6 replicates per group and 18 broilers per replicate,receiving diets supplemented with 0,0.1%,0.2% and 0.3% yeast culture, respectively. The trial lasted for 42 days which was divided into two periods with 1 to 21 d and 22 to 42 d,respectively.The feed intake,body weight,death and culling rate were recorded in each period. At the end of the experiment,1 chickens in each replicate with the weight close to the average value were slaughtered after fasting for 12 h. The slaughter performance and intestinal microflora counts were determined.The results showed that compared with control group,the supplementation of 0.2% and 0.3% yeast culture significantly increased the body weight at 42 d and the average daily gain (ADG) during the whole trial (P< 0.05).The diet supplemented with 0.2% yeast culture significantly improved the ADG,decreased the F/G of broilers during 22 to 42 d (P< 0.05),and it also significantly increased the average daily feed intake (ADFI) and ADG (P< 0.05),decreased the F/G of the whole period (P< 0.05).Moreover,the supplementation of 0.2% yeast culture significantly decreased the drip loss of meat and the count of Escherichia coli (P< 0.05),and significantly increased the count of Bifidobacterium(P< 0.05). In summary, the supplementation of 0.2% yeast culture could significantly improve the growth performance and the muscle quality of broilers.The intestinal microflora in broiler cecum were effectively optimized after inclusion of yeast culture in the study.     

以酒糟代替鱼粉生产高蛋白鱼饲

日本千叶县水产联合体利用粮食酿酒以后的下脚料酒糟渣，加入1．5％-2．0％的鲜（干）酵母发酵后培养，再经过脱水、干燥、磨粉、制粒，生产出一种发酵高蛋白颗粒鱼饲料。与传统的直接将酒糟用作饲料原料相比，使用这种饲料，氨基酸的可利用率从8，8％提高到19，5％-22．5％，能量从原来的每千克10．504mJ提高到17．786mJ，     

酵母表达典型猪瘟E2亚单位疫苗对致死量攻毒提供保护

典型猪瘟（CSF）由典型猪瘟病毒（CSFV）引起，是一个高度传染的猪病，给猪业生产造成巨大的经济损失。病毒衣壳糖蛋白E（ms）和E2是感染该病毒后诱导产生CSFV抗体的主要靶向目标。毕赤酵母表达E2蛋白（yE2）可产生免疫保护．对抗CSFV攻毒。