四君子汤对脾虚北京鸭胃肠组织中血管活性肠肽和生长抑素mRNA表达的影响

为从分子水平阐明脾虚与胃肠激素之间的关系以及健脾中药四君子汤防治脾虚的机制，首次用北京鸭复制脾虚证模型，以半定量的RT—PCR方法检测其腺胃、十二指肠和空肠血管活性肠肽（VIP）和生长抑素（SS）mR—NA表达的变化。结果表明，脾虚组腺胃VIPmRNA表达显著高于对照组（P〈0．05），十二指肠和空肠VIPmR—NA表达有所升高（P〉0．05）；脾虚组腺胃（P〈0．01）、十二指肠（P〈0．05）和空肠（P〈0．01）SSmRNA表达显著低于对照组。经四君子汤预防和治疗后二者恢复到接近对照组水平。提示脾虚证与VIP和SS有一定关系，四君子汤对VIP和SS水平的影响可能是该方治疗脾虚证的作用机制之一。     

半胱胺盐酸盐对仔猪胃黏膜细胞H+-K+-ATPase活性和生长抑素表达的影响

将分离的仔猪胃粘膜细胞分为4组，在含10％胎牛血清的DMEM高糖培养液中培养24h后，分别在新鲜的基础培养液中添加0（对照组）、0．001（低水平组）、0．01（中水平组）和0．1（高水平组）g／L的半胱胺盐酸盐，继续培养20h后收集细胞。测定细胞H^＋-K^＋-ATPase活性，同时用相对定量RT—PCR法测定细胞H^＋-K^＋-ATPase和生长抑素（SS）mRNA的相对丰度。结果表明：（1）低水平的半胱胺盐酸盐对H^＋-K^＋-ATPase的表达和活性没有影响（P〉0．05），但中、高水平的半胱胺盐酸盐显著提高了H^＋-K^＋-ATPase的表达和活性（P〈0．05），其中H^＋-K^＋-ATPase mRNA的相对丰度分别提高了36％和44％，H^＋-K^＋-ATPase活性分别提高了57％和53％。（2）低水平半胱胺盐酸盐对SSmRNA的表达没有影响（P〉0．05），中、高水平的半胱胺盐酸盐显著提高了SSmRNA的相对丰度（P〈0．05），提高幅度均为52％。以上结果提示半胱胺盐酸盐可增强体外培养的仔猪胃黏膜细胞H^＋-K^＋-ATPase的表达及活性，而这一作用可能由SS所介导。     

生长抑素抑制剂--半胱胺对畜禽生长的影响与应用

生长激素释放激素(GHRH)、生长抑素(SS)、生长激素(GH)、类胰岛素生长因子(IGFs)、甲状腺激素(T3、T4)、胰岛素对动物生长起着非常重要的作用,其中生长激素一方面发挥直接促生长作用,另一方面通过IGFs促进组织细胞生长与分化.生长激素在动物体内新陈代谢过程中具有调节营养分配,促进蛋白质合成,减少脂肪沉积,提高动物生长速度和饲料报酬等功能.但是,其合成和分泌受下丘脑的生长激素释放激素(GHRH,在禽类为促甲状腺素:TSH)和生长抑素(Somatostain,SS)的双重调节,其中SS是由神经系统和胃肠道产生的肽类激素,对动物的生长激素、甲状腺素、胰岛素等起抑制性调节作用.为了提高动物的生产性能,人们曾用生长抑素免疫中和技术(包括生长抑素基因工程疫苗)来降低体内SS水平,或外源性注射GH、GHRH等来促进动物生长,虽已取得了较大突破,但由于此类技术费用高,目前尚未能在实际生产中推广.通过其它的物质来降低或消除SS的浓度,间接促进动物生长则成为新的研究热点.许多研究表明,半胱胺具有降低体内SS水平、促进动物生长功能,是一种比较理想的生长抑素抑制剂,无论在体内还是在体外,均可特异地与生长抑素结合,从而降低体内SS的含量,间接提高GH的浓度,促进畜禽的生长.本文主要就半胱胺在畜禽生产中的应用和作用机理作一阐述.     

半胱胺对动物的作用及应用效果

动物的生长受多种激素的调节,其中生长激素（GH）在动物生长中起核心作用。在哺乳动物体内,生长激素的合成、释放受下丘脑生长激素释放因子（GHRF）和生长抑素（SS）的双重控制,GHRF促进GH的分泌,SS抑制GH的分泌,机体内SS的浓度与生长速度间存在着显著的负相关（Spencer,1986）。在禽类中尚未发现GHRF的存在,一般认为是通过促甲状腺素（TSH）来调控GH,SS则同样具有抑制作用。GH在机体发挥生理作用,促进细胞生长,需有生长素介质（IGFs）的介导（Maurice,1988）。在动物神经系统和胃肠道内可广泛产生SS,它对机体…     

慢病毒介导的小鼠生长抑素shRNA序列的设计和筛选

生长抑素(SS)是一种多功能的脑肠肽,在动物生长轴中主要作为生长激素(GH)的负性调控因子。本研究通过慢病毒表达质粒介导shRNA,瞬时转染自身表达SS的BHK-21细胞,筛选出了靶向小鼠SS的最有效的siRNA序列。首先,分别在小鼠SS基因mRNA的246、433和539bp处找到潜在靶位点,合成3条siRNA转录模板的发夹结构以及1条阴性对照,体外退火后插入pshRNA-copGFP lentivector构建重组质粒。然后,通过对转染BHK-21细胞的荧光观察、Real-time PCR、免疫组化以及RIA等检测,转染细胞SS在mRNA水平及蛋白水平均检测到不同程度的抑制(P<0.05)。其中,psh2(SS 433～451)表现出了最高的沉默效率(转染效率68.9%时,mRNA水平的沉默效率达59.3%,P<0.05;蛋白质水平的沉默效率达55.6%,P<0.05)。本研究为降低SS在动物体内的分泌,相应提高GH的浓度,进而为促进动物生长的研究奠定了基础。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与生长抑素融合表达质粒对断奶仔猪生长及相关激素的影响

选择40头断奶的长大二元杂交仔猪,随机分为4组,每组10头,公母各半,其中Ⅰ组为对照组,Ⅱ～Ⅳ组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的DNA疫苗pcS/2SS、pGM-CSF/SS和pGM-CSF pcS/2SS,分析这些DNA疫苗对断奶仔猪的生产性能和相关激素分泌的影响.结果显示,与Ⅱ组和Ⅳ组相比,Ⅲ组平均日增重分别提高了8.37%(P＞0.05)和17.2%(P＜0.05),饲料利用率分别提高了14.8%和6.7%.Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组血浆中GH的含量有升高的趋势.Ⅱ组IGF-Ⅰ的含量一直处于较高的水平,Ⅲ和Ⅳ组在第2周后处于较低的分泌水平,Ⅲ组IGF-Ⅰ的峰值高于其他组.Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ组T3的含量呈下降的趋势,而Ⅲ组呈上升趋势,免疫后第8周,Ⅲ组的T3分泌水平显著高于Ⅱ和Ⅳ组(P＜0.05),而与对照组差异不显著.Ⅰ组T4的含量不断降低,而Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组有不断升高的趋势,Ⅱ组和Ⅲ组T4的分泌一直保持在较高的水平.上述结果表明,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对SS DNA疫苗有一定的免疫增强作用,pGM-CSF/SS的免疫效果要优于pGM-CSF pcS/2SS共免疫.     

生长抑素(SS)基因在pET-32表达系统中的高效表达

分别将SS基因克隆至pET 32a和pET 32c表达系统中 ,得到重组质粒SS N/X和SS N/S。实验结果表明 ,SS N/X Thioredoxin (硫氧还原蛋白 )和SS N/S Thioredoxin融合蛋白在IPTG (异丙基硫代 β D半乳糖苷 )诱导 3h后(37℃ )表达产量最高 ,约占菌体总蛋白的 30 %左右。 0 0 5～ 1mmol·L-1IPTG对SS融合蛋白表达产量的影响并不太大 ,0 0 5mmol·L-1IPTG即可达到有效的诱导效果 ,但单位体积内的表达产量以 0 5mmol·L-1时为最高。乳糖诱导 4h(37℃ )的效果明显低于IPTG ,但当培养时间延长至 8h时 ,2 0mg·mL-1的乳糖可达到与IPTG同样的诱导效果 ,10和 5mg·mL-1的乳糖也可接近IPTG的诱导效果。SS N/X融合蛋白在 2 6℃表达时 ,主要以可溶性形式存在 ,占75 8% ,包涵体仅占 2 4 2 % ;而SS N/S融合蛋白则主要以包涵体形式存在 ,占 6 0 2 % ,可溶性蛋白仅占 39 8%。SS可溶性融合蛋白具有良好的SS抗原性。     

生长抑素和皮质抑素双表达DNA疫苗免疫杂交水牛犊牛的促生长效果研究

试验旨在探究生长抑素（SS）和皮质抑素（CST）双表达DNA疫苗免疫杂交水牛犊牛的促生长效果及疫苗本身的安全性。将鉴定正确的pVGS/2SS-2A-S/CST-asd质粒电转入减毒猪霍乱沙门氏菌C500构建SS和CST双表达活载体疫苗,喷鼻免疫杂交水牛犊牛后观察其对犊牛生长性能的影响。选取体重相近的2~6月龄杂交水牛犊公牛24头,随机分为低（TL）、中（TM）、高（TH）剂量组和PBS对照组（NC）,每组6头,初次免疫（简称初免）持续3 d,间隔2周后用相同剂量加免一次。结果显示,初免后2周便可产生抗SS和CST抗体,以TL组最佳,表现为更高的抗体水平和阳性率,7周时各试验组阳性率呈下降趋势;TL和TM组的平均日增重在初免后2和7周均高于对照组,但各组间差异均不显著（P>0.05）,而抗体阳性组（P）的平均日增重在0~2周显著高于阴性组（N）（P<0.05）。相关激素的检测结果显示,在初免后2和7周,试验组生长激素（GH）和胰岛素生长因子1（IGF-1）的水平均高于对照组,且以TL组表现最佳,除初免后7周GH与对照组无显著差异外,其余均极显著高于对照组（P<0.01）;初免后2周抗体阳性组极显著高于阴性组（P<0.05）。细胞因子检测结果显示,在初免后2周,试验组白细胞介素4（IL-4）含量高于对照组,且TL和TM组均极显著高于对照组（P<0.01）,尤以TL组最高,免疫后7周TL和TH组均显著高于对照组（P<0.05）,而免疫后2周对照组免疫干扰因子γ（INF-γ）含量极显著高于试验组（P<0.01）,免疫后7周对照组INF-γ含量显著低于TL和TH组（P<0.05）;阳性组IL-4水平在免疫后2周、INF-γ水平在免疫后7周均显著高于阴性组（P<0.05）,其他各组间差异不显著（P>0.05）。对血清中血糖（GLU）、总蛋白（TP）、总胆固醇（CH）和尿素氮（BUN）水平进行测定发现,除免疫后2周总蛋白含量TL组显著高于对照组外（P<0.05）,其他指标各组间差异均不显著（P>0.05）。对免疫后的水样、土样和粪样进行目的基因扩增发现,在PCR灵敏度范围内均未检测到,证实了疫苗的安全性。由上述结果可知,疫苗免疫后能取得良好的免疫效果,使机体产生显著的免疫应答,以低剂量组效果最佳,且没有对环境产生不良影响。     

生长抑素基因疫苗对肉用鸡生长性能及相关激素的影响

将28日龄的150只肉鸡随机分为5个组,每组30只,A、B、C组分别口服以减毒沙门菌为载体的生长抑素基因疫苗pcS/2SS,剂量分别为8×109、4×109、1×109 CFU/只,D组口服生理盐水,作为对照组,E组口服减毒沙门菌CS022,2周后加强免疫1次。研究生长抑素基因疫苗对肉用鸡生长相关激素和抗生长抑素抗体的影响。结果显示,以减毒沙门菌为载体的生长抑素基因疫苗pcS/2SS口服疫苗免疫肉鸡后,各试验组日增重有升高趋势,C组日增重分别比D、E组提高了10.7%和9.5%(P<0.05),而且C组肉鸡饲料利用率较高,分别比D、E组提高了10.9%和15.4%。与对照组(D、E组)相比,C组血浆GH浓度明显升高(P<0.05),试验组血浆T3含量有上升趋势;而A、B组GH、T4、T3与对照组差异不显著(P>0.05)。各试验组抗SS抗体在加强免疫后2周时达到最高,各试验组P/N值均达到阳性,加强免疫后4周时,抗体水平有所下降,其中C组肉鸡抗体P/N值为阳性,A、B组肉鸡此时均值未达到阳性。结果表明,口服生长抑素基因疫苗可以提高肉鸡的日增重和饲料转化率,增加肉鸡血浆GH、T3浓度,提高生长抑素抗体P/N值,...