四氢嘧啶提高中性蛋白酶热稳定性的研究

[目的]提高中性蛋白酶的热稳定性。[方法]在中性蛋白酶酶液中添加四氢嘧啶,考察四氢嘧啶对中性蛋白酶热稳定性的影响。[结果]四氢嘧啶对经热处理的中性蛋白酶有明显的保护作用。添加浓度3 mmol/L的四氢嘧啶可以使经过50℃处理的中性蛋白酶剩余的相对酶活提高12.7%;添加浓度5 mmol/L的四氢嘧啶可以使经过60℃处理的中性蛋白酶剩余的相对酶活提高51.8%。[结论]四氢嘧啶是一种有效的中性蛋白酶热保护剂。     

文蛤肉酶法水解条件的优化及最适蛋白酶的选择

以文蛤肉为原料,探讨了胰蛋白酶的加酶量、水解时间、水解温度、pH值及液固比对文蛤肉水解液总氨基氮含量和水解得率的影响规律,确定文蛤肉酶解的最优条件为酶解温度50℃,加酶量4000U/g原料,pH值为（8．00±0．05）,水解时间5h,液固比3：1。再以文蛤肉水解液的水解度、水解得率及风味评分值为指标对该酶解优化条件下获得的产品与精制中性蛋白酶水解优化条件下获得的产品进行比较。结果表明,胰蛋白酶为酶法水解文蛤肉最适宜的蛋白酶,其酶解所得文蛤肉水解液的水解度、水解得率及风味评分值分别为42．44％、82．86％及205．92。     

碱性蛋白酶Alcalase水解杏仁蛋白制备ACE抑制肽

采用Alcalase蛋白酶水解杏仁蛋白,以水解度(DH)及水解产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率为指标进行酶解工艺优化。结果表明,较大活性的ACE抑制肽的最佳水解条件为:pH值7.0,温度50℃,酶底比4%,底物质量分数为2%。该条件下经60min水解,其水解度为12.23%,得到ACE抑制肽的IC50值为0.85mg/mL。     

永川豆豉中高产蛋白酶菌株的筛选鉴定及液体培养条件的研究

从永川豆豉中筛选、鉴定高产蛋白酶菌株,并对菌株的液体培养条件进行了研究。采用酪蛋白平板法,从永川豆豉中初步筛选出68株产蛋白酶菌株,通过比较发酵后蛋白酶活力,筛选出1株蛋白酶活达1468.7U/mL的高产菌株A-4。依据菌种形态和其生理生化特征,将其鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。研究液体培养条件对菌株生长的影响,确定菌种液体培养的最佳条件为:温度34℃,pH值为8,接种量4%,菌龄12h。     

不同温度对两种泥鳅消化道蛋白水解酶活性的影响

研究了不同温度对泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)和大鳞副泥鳅(Paramisgumusa dabryanus)胃、肠蛋白水解酶活性的影响.结果表明,温度会影响泥鳅、大鳞副泥鳅小肠和胃蛋白水解酶活性.在DH值7.5时,泥鳅及大鳞副泥鳅的胃最适温度都为45℃,蛋白水解酶活性分别为1 005.23、975.6μg·min-1;泥鳅的肠最适温度为40℃,其酶活性为48.7μg·min-1,大鳞副泥鳅的肠最适温度为45℃.其酶活性为78.23μg·min-1.     

菜籽饼粕对土壤有机质和土壤酶活性的影响

通过在室内培养条件下研究菜籽饼粕对土壤有机质和土壤酶活性的影响,结果表明,将菜籽饼粕加入第四纪黄壤和中性紫色土之后,土壤有机质含量先增后降;土壤酶活性的变化因酶的种类而异：蛋白酶和脲酶活性在初始期显著提高,之后降低;过氧化氢酶同样在短时间内提高,然后保持恒定状态;而蔗糖酶活性则随着菜籽饼粕的加入受到了抑制,一直呈下降趋势,这可能与菜籽饼粕的用量和抗营养成分有关。     

中性蛋白酶与超声波结合分离稻米淀粉及其黏滞性研究

用中性蛋白酶与超声波结合提取稻米淀粉,并用快速黏度分析仪测定稻米淀粉的黏滞性。结果显示,用中性蛋白酶提取稻米淀粉时,稻米淀粉的提取率为62.3%～73.8%,淀粉中蛋白质含量为3.74%～4.88%;蛋白酶与超声波结合时稻米淀粉的提取率为72.1%～77.2%,蛋白质含量为0.68%～1.30%,破损淀粉含量显著降低,两者结合的最佳条件是酶先作用3h,再50%超声波作用40min。中性蛋白酶与超声波结合处理所得淀粉的黏滞谱中,峰值黏度、消减值和最终黏度都比单独酶解所得淀粉的高,而崩解值降低;与碱处理淀粉比,也是峰值黏度、消减值和最终黏度升高,崩解值降低,这说明超声波作用没有破坏淀粉性质。中性蛋白酶与超声波结合是提取稻米淀粉的有效方法。     

大豆乳清蛋白废水预处理及在饮料中的应用研究

为考察不同条件下大豆乳清蛋白废水预处理效果及在饮料中的应用,对不同温度下活性炭脱色、脱嗅效果、不同树脂交换流量下脱盐效果(进水中盐浓度为0.268%)以及大豆胰蛋白酶抑制剂活性(TIA,进水中含量为0.086TLU)进行研究,同时以酸度(以柠檬酸和苹果酸1:1的混合酸添加)、糖度、香料为因素进行正交试验,研究以乳清蛋白液为原料调配饮料的最优条件,得出该饮料的最佳配方。废水预处理结果表明,采用10%体积的活性炭在45℃水浴中30min时脱色脱嗅效果最好;采用离子交换脱盐法,流速选择4.28mL·min-1时效果最佳。TIA试验结果表明,黄桃味清型大豆乳清蛋白饮料所用的TIA低于市面上销售可食用商品的TIA。饮料最优配方为:2.0g·L-1的混合酸(苹果酸:柠檬酸=1:1)、8.0%浓度的蔗糖、0.01%的黄桃香精和0.004g·kg-1的柠檬黄色素为最佳配比。     

光照和黑暗条件下香果树种子萌发过程中蛋白酶及蛋白含量的研究

研究了光照和黑暗条件下香果树的萌发过程中种子的萌发率、蛋白酶活性及可溶性蛋白含量的变化。结果表明：香果树种子属于典型的光敏感性种子;在光照条件下萌发的香果树种子蛋白酶活性和可溶性蛋白含量的变化趋势都是先急剧上升后逐渐下降;在黑暗中香果树种子完全不能萌发,整个培养过程中蛋白酶活性和可溶性蛋白含量一直都很低,可能导致种子不能萌发。     

毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3的基因克隆和原核表达分析

为研究毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3的酶学特征和生理功能,本实验对PtCP3进行了基因克隆和原核表达分析。从毛果杨(Populus trichocarpa Torr.Gray)中克隆得到半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3,将其克隆至pMD-18T载体。进一步构建原核表达载体pET30a-PtCP3,并在大肠杆菌(Escherichia coli)中成功诱导表达重组蛋白,然后通过包涵体洗涤法对目的蛋白进行纯化。测序结果表明,PtCP3基因CDS序列全长1074 bp,含有木瓜蛋白酶的保守催化位点和组织蛋白酶B的保守结构域。序列分析结果显示,半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3编码357个氨基酸,预测N-末端含有长度为27个氨基酸残基的信号肽序列,去除信号肽后蛋白酶大小为36.515 kDa,理论等电点为7.44。SDS-PAGE电泳结果显示,可以检测到大小约为42 kDa的目的条带,并可通过包涵体洗涤法在体外得到了高表达量、单一的重组蛋白PtCP3。