Survival of Leptosphaeria maculans in soil on residues of Brassica napus in South Australia

The survival of Leptosphaeria maculans , which causes phoma stem canker (blackleg), on oilseed rape residues ( Brassica napus ) in South Australia was investigated. Using a quantitative polymerase chain reaction (PCR) assay for L. maculans DNA, the pathogen was mainly detected in the upper 5 cm of the soil profile, including residues on the soil surface. As the size of organic matter particles in the soil decreased, so did the quantity of L. maculans detected in them. To obtain representative data for a field, at least 30 subsamples needed to be collected over the 0·81 ha area studied. In a survey of 49 commercial fields in South Australia, most L. maculans was detected in fields 1 year after oilseed rape had been grown, with less detected after 2 years and negligible amounts 3 years or more after cropping. The diagnostic DNA-based assay for L. maculans reduced the time and cost of studying L. maculans survival in soil and increased the sensitivity and accuracy of results compared with estimates of propagule number of colony-forming units on a semiselective medium.     

牛皮肤成纤维细胞的体外培养与冻存

利用牛皮肤组织块直接培养法，得到牛皮肤细胞的原代培养物，再用酶消化法和反复贴壁法处理，能够纯化成纤维细胞。成纤维细胞的冻存是通过选用6种分别含有二甲基亚砜（DMSO）、甘油（GL）及乙二醇（EG）的保护液，以相同的冻前处理方法，对牛皮肤成纤维细胞进行缓慢冷冻，冰箱预冷平衡1－2h，逐步投入液氮（－196℃）中保存，再经37℃水浴解冻，Hanks液脱保护剂，以贴壁率评价冻存效果。结果表明，20％DMSO保护液对牛皮肤成纤维细胞表现出较好且稳定的冷冻保护效果，其平均贴壁率达87．9％。     

渭北旱塬油菜茎象甲药剂防治方法与效果

油菜茎象甲田间防治试验表明：５０％氧化乐果乳剂１０００倍液和２．５％溴氢菊酯乳剂４０００倍液喷雾对成虫的防治效果较好。春季始盛期喷药优于秋季。氧化乐果羊毛脂、久效磷羊毛脂和氧化乐果聚乙烯醇涂茎剂防治幼虫的效果较好。化学防治应以春季成虫出土始盛期药剂喷雾为主，辅以幼虫初期涂茎剂防治。     

Feline Ubiquitin Fusion Protein Genes

Using cDNA from a CRFK cell line as a template, PCR amplification was performed with the Ub1S and poly(dT) primers to isolate feline ubiquitin genes. Sequencing of the 495 bp PCR fragment revealed that the putative amino acids induced by this fragment gave a fusion protein consisting of a ubiquitin polypeptide (76 amino acids) and an extension protein of ribosomal proteins L40 (52 amino acids). The putative amino acid sequence of ubiquitin was identical to those of humans, rats and pigs.The recombinant glutathione S-transferase (GST)–feline ubiquitin fusion proteins were produced in Escherichia coli and purified. The fusion proteins had a molecular weight of about 42 kDa and were detected by immunoblot assay with rabbit anti-ubiquitin antiserum.The mRNAs from heat-shocked and non-heat-shocked cells were subjected to RT-PCR (Ub1S and poly(dT) primers) analysis. The molecular weights of the ubiquitinated proteins in heat-shocked CFRK cells were between 18 kDa and 24 kDa by immunoblot assay.These results suggested that there were more ubiquinated proteins in the heat-shocked CRFK cells than in the pre-heat-shocked cells.     

桑悬浮细胞原生质体培养的研究

采用继代培养三个月后的桑子叶悬浮细胞为材料,进行了原生质体的分离和培养。桑悬浮细胞在纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶的混合溶液中,酶解获得产量高、活力强的原生质体。原生质体在K8p(附加6—BA、NAA、2,4—D、LH)液体培养基中,再生细胞经多次分裂,得到肉眼可见的小愈伤组织。再通过增殖继代培养,获得浅黄色、具有明显颗粒结构的愈伤组织,转至各种激素含量的MSB固体培养基中,尚未获得绿苗分化。     

几种因素对培养小鼠精原干细胞的影响

探讨了小鼠胚胎成纤维细胞饲养层及干细胞因子(SCF)、白血病抑制因子(LIF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等对体外培养小鼠精原干细胞的作用.结果显示,在饲养层上,精原干细胞贴壁时间缩至8～12 h,饲养层具有促进其分裂增殖的作用;培养液中加入不同浓度的SCF、LIF及bFGF,可延长精原干细胞在体外的存活时间,其中加入30μg/LSCF后,其体外存活时间与对照组相比差异显著(P<0.05).     

用单层分化法进行胚胎干细胞神经分化的研究

用单层分化法研究了 ES细胞从 0～ 316 h(第 14天 )的神经分化过程。无饲养层培养的 ES细胞在无血清的N2 B2 7培养基中开始神经分化。从 72 h开始 ,神经外胚层的特异性转录因子 Sox1表达 ,在克隆的边缘逐渐出现向外迁移的细胞 ,形状呈圆形或椭圆形 ,有 1～ 2个细胞突起。在 191h(第 8天 )之后 ,细胞可迁移至克隆边缘的 2 0 0 μm之外 ,这些有细长突起的细胞表达神经元特异性蛋白 Tau。以后 ,迁移细胞的突起开始交叠成网状。 316 h(第 14天 )时 ,细长的纤维可跨越在不同的克隆之间 ,长达上千微米。此时 ,免疫染色的结果表明 ,在克隆的中央有较多的圆形 Nestin阳性细胞 ,而克隆的边缘有大量的 β- tubulin 阳性细胞 ,它们交织成复杂的网状图像。阶段性表达基因的表达时序研究表明 ,ES细胞的特异性转录因子 Oct4开始减弱时 ,Sox1表达开始 ,此时细胞由全能状态进入早期神经分化状态 ;Tau的表达是 Sox1表达的下游事件。这一时序与胚胎发育中神经发生的时序相符。单层分化法能直观地展示 ES细胞的神经分化过程 ,可作为研究细胞分化、胚胎发育及药物筛选的体外模型     

TheEstimationofStemTaperCurvefromtheRadialInformationatThreeLocationsontheStem

该文探讨了不用编制削度表直接建立高精度立木干曲线的方法．当采用干曲线是３次多项式时，通常根据１０分法测定树干各部位直径，用最小二乘法求出该方程式的参数．从数学角度，只要知道树干任意３个部位的直径，就可以用最小二乘法或联立方程式求解干曲线参数．本文以樟子松为例，探讨用树干哪３个部位直径拟合的干曲线最接近实际干曲线，为建立立木干曲线提供有效方法．利用９个部位半径（方法Ⅰ）和利用其中３个部位半径（方法Ⅱ，２８种组合）分别拟合干曲线，结果表明方法Ⅱ的６种半径组合的精度良好，其中的３种组合，（ｒ１．３，ｒ０．３，ｒ０．７），（ｒ１．３，ｒ０．４，ｒ０．７）和（ｒ１．３，ｒ０．４，ｒ０．８）是拟合现实干曲线的有效方法．     

Development of Immune Response to Experimental Bovine Trichophyton vervucosum Infection

Abstract— Cell mediated and humoral immune responses to experimental Trichophyton verrucosum infection were assessed by sequential cutaneous biopsies, antibody assessments and microscopic monitoring of fungal presence. Histopathologic examination showed the accrual of lymphocytes and other inflammatory cells in the dermis of infected sites. Immunoperoxidase staining of frozen sections with monoclonal antibody preparations revealed an influx of macrophages, BoCD4+ and B0CD8+ lymphocytes and γδ T cells from the 5th day to the 33rd day of infection. A moderate influx of B cells was observed. Protein G-colloidal gold staining revealed the presence of immunoglobulins in the dermis and superficial epidermal layers. Trichophyton specific serum antibodies appeared between days 33 and 55. Microscopic assessment of infected tissues revealed an increase in T, verrucosum elements (mycelium and ectothrix spores) from days 19 to 55. Fungal elements in infected areas did not decrease until after both humoral and cell mediated elements of the immune response were established. These responses imply a combination of cell mediated and humoral events were associated with T. verrucosum immunity and clearance in the calf. Résumé— Le réponse immunitaire humorale et cellulaire a une infection expérimentale àT. verrucosum a été appréciée par des biospsies cutanées successives, des dosages d'anticorps et la recherche microscopique de champignons. L'examen histopathologique a montré un afflux de lymphocytes et d'autres cellules inflammatoires dane le derme des sites infectés. Les marquages en immunopéroxydase par un anticorps monoclonal de coupes congelées a montré un influx de macrophages, lymphocytes BoCD4+ et BoCD8+ et des cellules T γδ, du 5e au 33e jour de l'infection. Un marquage par une protéine G—or colloidal a révélé d'immunogolglobulines dans le derme et les couches supéerficielles de l'épiderme. Les anticorps spécifiques de Trichophyton sont apparus entre 33 et 55 jours. L'examen microscopique des tissus infectés a révélé une augmentation du nombre d'éléments de T. verrucosum (mycelium et spores ectothrix) du 19e au 55e jours. Les éléments fongiques dans les zones infectées n'ont pas diminué avant que les réponses humorales et cellulaires ne solent établies. Ces résponses impliquent qu'une coopération des réponses humorales et cellulaires étaient associées dans l'immunité et la défense contre T. verrucosum. Zusammenfassung— Die zellvermittelten und humoralen Immunantworten auf die experimentelle Infektion mit T. verrucosum wurden durch eine Serie von Hautbiopsien, Antikörperuntersuchungen und mikroskopischer Untersuchung auf das Vorhandensein von Pilzen ausgewertet. Die histopathologische Untersuchung zeigte eine Ansammlung von Lymphozyten und anderen Entzündungszellen in der Dermis der infizierten Stellen. Die Immunperoxidasefärbung der Gefrierschnitte mit monoklonalen Antikörperzubereitungen zeigte einen Influx von Makrophagen, BoCd4-und BoCD8-Lymphozyten und gamma-delta-T-Zellen vom 5. bis zum 33. Tag der Infektion. Es wurde auch ein mäßiger Influx von B-Zellen beobachtet. Die Protein-G-kolloidale Goldfärbung zeigte die Anwesenheit von Immunglobulinen in der Dermis und den oberflächlichen epidermalen Schichten. Trichophyton-spezifische Serumantikörper traten zwischen Tag 33 und 55 auf. Die mikroskopische Untersuchung infizierter Gewebe zeigte eine Zunahme von T. verrucosum-Bestandteilen (Myzel und exktothrixe Sporen) vom Tag 19 bis 55. Pilzteile in infizierten Bereichen verminderten sich weder, nachdem humorale, noch nachdem zellvermittelte Elemente der Immunantwort auftraten. Diese Reaktionen deuten an, daß eine Kombination von zellvermittelten und humoralen Vorgängen im Zusammenhang mit T. verrucosum-Immumtät und Abheilung beim Kalb vorliegt. Resumen Por medio de biposias cutáneas secuenciales, medida de anticuerpos y exámen microscópico de presencia de hongos, se estudió la respuesta inmunitaria de tipo humoral y celular producida por la infección experimental con T. verrucosum. El exámen histopatológico reveló la presencia de agregación de linfocitos y otras células inflamatorias procedentes de la dermis de los puntos infectados. La tintura por medio de inmunoperoxidasa de las secciones congeladas, con preparaciones monoclonales de anticuerpos, demostró un aflujo de macrófagos BoCD4 + y BoCD8 + linfocitos y linfocitos, Tαδ, desde el quinto hasta el día 33 la infección. También se observó un aflugo moderado de linfocitos B. La tintura aúrica de proteina coloidal G reveló la presencia de inmunoglobulinas en al dermis y capas superficiales de la epidermis. Los anticuerpos específicos para la especie Trichophyton aparecieron entre los días 33 y 55. El exámen microscópico de los tejidos afectados demostró un incremento, de los elementos füngicos T. verrucosum (micelio y esporas exótricas) desde los días 19 al 55. Los elementos fúngicos en áreas infectadas no disminuyeron hasta después del establecimiento de ambos tipos de respuesta inmunitaria, humoral y celular. Estas respuestas implican que la combinación de ciertos fenómenos de inmunidad celular y humoral, están relacionados con la desaparición y la inmunidad de la infección producia por T. verrucosum en el ternero.     

胚胎干细胞及种系嵌合体的研究进展

胚胎干细胞是着床前的囊胚内细胞团或早期胎儿的原始生殖细胞经体外分化抑制培养建立的多能性细胞系 ,具有与胚胎细胞相似的形态特征和分化潜能 ,体外培养时保持未分化状态 ,可以传代增殖。改变维持胚胎干细胞不分化的培养条件 ,胚胎干细胞可自发分化成多细胞结构。在一定诱导下 ,胚胎干细胞可向多个方向分化 ,并生成多种功能细胞。胚胎干细胞注入到胚泡期胚胎或与桑椹期胚胎聚合 ,可以参与包括性腺在内的各种组织的嵌合体的形成。胚胎干细胞在细胞分化与调控 ,胚胎发育 ,遗传病 ,肿瘤 ,免疫和组织或器官移植等研究中显示着广泛的应用前景。而种系嵌合体的获得是实现 ES细胞途径的决定步骤 ,低的种系嵌合率则是制约 ES细胞应用的关键。提高供体 PGCs在受体生殖腺中的比例 ,缩短 ES细胞的体外培养时间 ,以及注入早期发育阶段的受体胚胎等都能提高种系嵌合率。文章从多个方面综述了胚胎干细胞的最新研究成果 ,并着重以禽类 ES细胞为例论述了种系嵌合体的检测方法 ,种系嵌合率的影响因素以及提高种系嵌合率的方法