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参照GenBank中牛整合素α4基因序列,合成了牛整合素α4亚基753bp(192~944nt)的cDNA片段,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化入BL21,IPTG诱导表达。表达产物经Western blot鉴定,结果表明成功表达了相对分子质量约为30 000的α4蛋白。超声破碎细菌后,目的蛋白主要以包涵体形式存在。蛋白纯化后进一步复性,免疫大鼠获得多抗,间接ELISA检测多克隆抗体效价为1∶32 000。这为进一步研究牛整合素α4β7的功能奠定了基础。 相似文献
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Min Hee Park Jung Im Yun Eunsong Lee Seung Tae Lee 《Reproduction in domestic animals》2019,54(11):1497-1500
A previous study found that undifferentiated porcine spermatogonial stem cells (SSCs) did not adhere to tenascin C, indicating that the integrin α9 and β1 subunits are inactive on the surface of porcine SSCs. However, that study used recombinant tenascin C without FNIII‐like repeats. Therefore, this study re‐evaluated the existence of integrin α9β1 actively functioning on the plasma membrane of porcine SSCs using full‐length native tenascin C with FNIII‐like repeats. The localization and function of the integrin heterodimer were confirmed using immunocytochemistry, attachment and antibody inhibition assays. In undifferentiated porcine SSCs with integrin α9β1 on the cell surface, adhesion to native tenascin C was significantly higher compared with cells lacking native tenascin C and functional blocking of integrin α9β1 significantly inhibited the attachment to native tenascin C compared with no functional blocking. Accordingly, we confirmed that the integrin α9 and β1 subunits function as an active heterodimer on the surface of porcine SSCs in the undifferentiated state. 相似文献
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整合素对动物的生殖生理作用 总被引:1,自引:0,他引:1
整合素 (integrin)是一类广泛存在的细胞表面粘附受体 ,介导细胞与细胞以及细胞与细胞外基质的相互作用和细胞内外的信息传递 ,调节细胞粘附和通讯。在生殖过程中 ,卵细胞表面的整合素 α6β1 参与受精作用 ;部分整合素在子宫内膜的表达呈明显的周期性变化 ,并与子宫内膜“植入窗”的开放同步 ,其表达的异常可能干扰子宫内膜的容受性 ,导致流产和不孕 ;胚胎着床后 ,滋养层细胞能及时调整整合素的表达 ,调节胚泡滋养层与子宫内膜之间的细胞 -细胞及细胞 -细胞外基质相互作用 ,以利其入侵、胎盘形成和妊娠的维持。可见 ,整合素在机体的生殖生理过程中发挥着非常重要的作用。 相似文献
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病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的重要因素.利用原核细胞表达了猪口蹄疫病毒受体整合素β8亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后免疫兔,制备兔多克隆抗体.以含有猪β8亚基全长cD-NA的质粒为模板,经PCR扩增得到位于β8成熟肽氨基端的LBD基因片段,与带有GST标签的原核表达载体pGEX 4T-1相连,构建原核表达质粒pGEX/β8LBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达重组β8LBD融合蛋白.通过SDS-PAGE和Western blot鉴定后提取包涵体,以电泳分离纯化的重组融合蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,鉴定血清效价和特异性.结果显示,实现了重组猪β8LBD融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示分子量约为46 000,主要以包涵体形式存在于菌体中.制备的兔多克隆抗体效价达1∶12 800以上,该血清可与目的蛋白发生特异性反应.这将为进一步研究猪整合素β8亚基在宿主体内的分布及其在口蹄疫病毒致病过程中的作用奠定基础. 相似文献
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