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【目的】探究咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)通过AMPK/FOXO3a信号通路缓解氧化应激对猪精液的影响及其分子机制。【方法】选取8头成年(1—2岁)、健康状况良好长白种公猪进行鲜精采集,将质检合格的样品混池待用。试验设计如下:首先,在常温基础稀释液中分别添加0、0.02、0.04、0.06、0.08和0.10 g·L-1浓度的CAPE,将精液样品与各个浓度组依次混合后放置室温平衡,随即转入17 ℃电子恒温冰箱进行常温保存。全自动精子分析仪(CASA)测定1—5 d精子运动学参数(总活率与渐进性活力),筛选出最佳适宜浓度为0.06 g·L-1。其次,将0.06 g·L-1 CAPE与400 μmol·L-1的H2O2建立氧化胁迫模型,在第1、3、5天分别采用CASA测定精子总活率与渐进性活力,荧光探针技术评估质膜完整性与顶体完整性,抗氧化试剂盒检测过氧化氢酶(catalase,CAT)与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,在第5 天利用实时荧光定量 PCR技术测定AMPK/FOXO3a信号通路下游靶向基因(AMPK、FOXO3a、SOD1、SOD2、CAT)及凋亡基因BAX的mRNA表达水平,蛋白免疫印记技术测定AMPK、p-AMPK蛋白表达。【结果】(1)浓度筛选试验中,0.06 g·L-1的CAPE在保存第3 天显著提高精子的总活率并维持至第5天(P<0.05),不仅如此,精子的渐进性活力在第1 天显著高于其他处理组(P<0.05)。(2)氧化胁迫试验中,H2O2处理组的精子质膜完整性、顶体完整性、总活率、渐进性活力、SOD与CAT活性在保存的第5天均极限显著低于空白组与CAPE+H2O2混合组(P<0.001),而空白组与CAPE+H2O2混合组的总活率、顶体完整性、CAT与SOD活性不存在显著差异(P>0.05)。与CAPE+H2O2混合组相比,H2O2处理组AMPK、FOXO3a、SOD1、SOD2、CAT的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),BAX的表达水平显著升高(P<0.05),而空白组与CAPE+H2O2混合组的AMPK、SOD1、CAT与BAX不存在显著差异(P>0.05)。在蛋白表达水平中,CAPE+H2O2混合组与H2O2组相比,AMPK、p-AMPK 与p-AMPK/AMPK比率显著提升(P <0.05)。【结论】在常温基础稀释液中添加0.06 g·L-1CAPE可通过促进磷酸化AMPK的表达,诱导AMPK/FOXO3a信号下游抗氧化分子的转录,继而缓解H2O2介导的氧化危害对精液品质产生的影响,延长精液的保存时间,但CAPE保护精子氧化损伤更为深入的分子机制仍需作进一步探究。 相似文献
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43.
Allison M. Kiser Steven P. Brinsko Charles C. Love Dickson D. Varner Kendrick Sudderth Terry L. Blanchard 《Journal of Equine Veterinary Science》2014
This study evaluated measures of sperm quality in relation to fertility achieved with fresh semen or semen cooled and stored. Semen from 1 stallion was collected and processed to provide 3 treatments: group 1 received fresh semen; group 2 received cooled semen containing 50% seminal plasma (SP) stored for 4 days; and group 3 received cooled semen containing 50% SP stored for 1 day, then centrifuged and resuspended in fresh extender containing 10% SP on days 1 to 3. Inseminates were evaluated for sperm motion characteristics and the percentage of sperm with intact membranes (SMI). Mares (n = 34) in estrus were treated with an ovulation-inducing drug and inseminated with 100 million membrane-intact sperm on the following day. Pregnancy status was determined via transrectal ultrasonography 2 weeks after ovulation. The mean percentage of SMI was higher in group 1 (81%, initial) than in group 2 (74%, day 4) or group 3 (74%, day 4) (P < .05). The median percentages of total sperm motility differed among the groups (77%, 5%, 59% for groups 1, 2, and 3 respectively; P < .05). Median values for the percentages of progressively motile sperm and curvilinear velocity for group 1 (55%, 216 μm/s) and 3 (37%, 186 μm/s) were higher than for group 2 (1%, 73 μm/s) (P < .05). Pregnancy rates did not differ among groups (5 of 11, 45% in group 1; 5 of 11, 45% in group 2; and 7 of 12, 58%, in group 3; P = .77). These data suggest that, at least for this stallion, sperm membrane integrity may be a more valuable means of assessing potential fertility of cooled-stored semen than sperm motion characteristics. 相似文献
44.
45.
以长白猪精液为材料,采用经典的纯化方法获得N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC 3.3.1.52,NAGase)的2种同工酶,命名为:NAGaseⅠ和NAGaseⅡ。其中NAGaseⅡ的比活力为358.21U/mg,纯化倍数为6.37倍。以海藻糖、D-甘露糖、蔗糖、葡萄糖为效应物,研究其对该酶活性的影响。结果表明:在特定浓度范围内,海藻糖对酶活力基本没有影响;D-甘露糖、蔗糖、葡萄糖对该酶均有一定的抑制作用;D-甘露糖对酶的抑制作用表现为非竞争型,抑制常数KI为11.94mmo/L;蔗糖对酶的抑制作用表现为竞争型,抑制常数KI为0.56mmol/L;葡萄糖对酶的抑制作用表现为混合型,抑制常数KI和KIS分别为0.35mol/L和64.29mmol/L。 相似文献
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在鱼类人工繁育中,研究者主要关心的是卵子质量,长期以来对精子质量未引起足够重视.而精子质量同样会影响繁育效果的重要因素.鱼类精子质量的评价指标有多种,如精子活力、运动时间、密度、形态、受精率和生理功能等.其中最传统的评价指标是精子活力,其测定方便,能较准确地预测受精率.将精子运动时间和活力综合考虑可更好地反映精子的运动能力.而精子受精率则是精子质量的直接反映,但会受到卵质等因素的影响.质膜完整性、线粒体功能、染色质结构完整性等可体现精子的质量,但测定方法较繁琐.近年来,鱼类精子质量检测技术迅速发展,计算机辅助精子分析(CASA)、流式细胞术(FCM)分析、低渗肿胀(HOS)、单细胞凝胶单泳(SCGE)等技术的建立,使得测定指标更多样、客观、准确.本文逐一介绍了评价精子质量的各种指标,并对各指标的测定方法、测定原理、国内外研究情况进行详细叙述,旨为我国鱼类精子质量评价研究提供背景资料. 相似文献
47.
主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)是脊椎动物中发现的编码免疫球蛋白样受体(immunoglobulinlike receptors)的高度多态的基因群,其表达产物分布于各种细胞的表面,称为MHC分子。MHC是Snell等(1956)在研究小鼠的移植排斥反应时发现的,家禽中的MHC分子首先是有一种血型被识别的,随之被命名为B复合体(B complex),Schierman和Nordskog(1961)定义家禽的B基因座就是主要组织相容性复合体。 相似文献
48.
49.
研究按季节和品种对种公牛采精记录进行方差分析,分别比较了季节对夏洛来、西门塔尔、利木赞、红安格斯、荷斯坦种公牛和弗莱维赫6个品种鲜精液品质的影响以及相同季节下的6个品种精液品质间的差异。分析了在季节和品种的双重条件下,精液品质间的相关性。结果表明:(1)西门塔尔、夏洛来和荷斯坦种公牛的单次射精量随季节变化排序均依次是:夏季秋季春季冬季。(2)西门塔尔、夏洛来、利木赞和红安格斯的鲜精子密度随季节变化排序依次是:春季夏季冬季秋季,且这四个品种鲜精子密度在四季的排序均为:西门塔尔夏洛来利木赞红安格斯。(3)各品种种公牛四季鲜精子活力排序均依次是:冬季春季秋季夏季;各品种种公牛鲜精子活力在四季的排序均为:利木赞夏洛来弗莱维赫、西门塔尔荷斯坦红安格斯;各品种夏季鲜精子活力均极显著低于其它三个季节(P0.01)。(4)荷斯坦种公牛鲜精子活力夏季占春季活力比率最高为(0.54/0.59),利木赞次之(0.5/0.63),弗莱维赫第三(0.47/0.6),安格斯最低(0.34/0.49)。(5)红安格斯的单次射精量、精子密度和精子活力在相同季节下都低于其它5个品种。(6)在不同季节不同品种下,种公牛的射精量与鲜精子密度和鲜精子活力的相关系数分别是0.006和~0.019,鲜精子密度和鲜精子活力的相关系数是0.253。 相似文献
50.