鸡传染性支气管炎(IB)诊断方法的研究

本试验用鸡胚大量繁殖鸡传染性支气管炎病毒（IBV）,收集尿囊液,用1％胰蛋白酶处理制备IBV血凝抗原,建立了血凝—血凝抑制（HA—HI）检测IBV抗体的方法,其特异性强、操作简便。另外,本试验建立Dot—ELISA方法用于检测IBV,病料经处理后,点样于硝酸纤维素膜,加兔抗IBV抗体,经PPA—DAB—H_2O_2系统显色,其检测结果与双抗体夹心ELISA的检测结果一致。两种诊断方法的建立为临床上检测病原和监测抗体提供了便捷的手段。     

斯氏艾美耳球虫重组表面抗原SAG13和SAG14对兔的免疫保护效果初步观察

本研究旨在观察斯氏艾美耳球虫裂殖生殖阶段特异性表面抗原Es-SAG13和Es-SAG14的原核表达产物对兔的免疫保护效果.利用相对荧光定量PCR分析Es-SAGs在未孢子化卵囊时期、孢子化卵囊时期、裂殖生殖时期和配子生殖时期的转录水平,并对裂殖生殖阶段特异性表达的Es-SAG进行原核表达;然后将40只45日龄无球虫幼兔...     

Molecular characteristics of an immobilization antigen gene of the fish-parasitic protozoan Ichthyophthirius multifiliis strain ARS-6

Ichthyophthirius multifiliis (Ich), a ciliated protozoan parasite of fish, expresses surface antigens (i-antigens), which react with host antibodies that render them immobile. The nucleotide sequence of an i-antigen gene of I. multifiliis strain ARS-6 was deduced. The predicted protein of 47 493 Da is comprised of 460 amino acids (aa's) arranged into five imperfect repeats with periodic cysteine residues with the structure: CX₍₁₉₎₂₀CX₂CX₁₆₋₂₇CX₂CX₂₀₍₂₁₎CX₃. The N-terminal aa's typify a signal peptide motif while a stretch of C-terminal aa's resemble a glycosyl–phosphatidyl–inositol (GPI)-anchor addition site. The degree of deduced i-antigen aa sequence identity of strain ARS-6 (GenBank accession # ACH87654 and # ACH95659) with other I. multifiliis i-antigen sequences present in GenBank ranges from 99% to 36% identity with 52 kDa i-antigens of I. multifiliis strain G5 (accession #s AAK94941 and AAK01661 respectively). Immunoblot analysis of i-antigens following exposure of I. multifiliis theronts to catfish anti- I. multifiliis immune serum did not show any appreciable alteration in i-antigen expression. The mechanism that regulates i-antigen expression in I. multifiliis remains a puzzling question.     

渔药恩诺沙星完全抗原合成方法及效果的研究

采用牛血清白蛋白（BSA）和鸡血清白蛋白（OVA）为免疫用载体蛋白,匙孔血蓝蛋白（KLH）为包被抗原用蛋白,采用不同的方法合成完全抗原,对BALB／C小鼠进行免疫,并通过紫外光谱特征、抗血清检测等手段对完全抗原的合成效果进行了分析。实验表明蛋白-恩诺沙星偶联物的紫外光谱特征可以较为准确、简便地提示完全抗原的合成效果,并能够与抗血清的酶联免疫吸附试验（ELISA）分析结果吻合。用乙二胺（EDA）对载体蛋白进行处理,可以明显提高完全抗原的合成效果;而偶联方法对于不同载体蛋白的影响也存在差异,OVA采用活化酯法效果较好,而BSA采用碳二亚胺法得到的血清效价较高。     

猪细小病毒血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清的制备与鉴定

猪细小病毒（Porcine Parvovirus,PPV）血凝抑制试验抗原、阳性血清和阴性血清在猪细小病毒制品的效力检验中不可或缺,对猪细小病毒相关生物制品的质量控制至关重要。试验采用PPV 7909株病毒同步接种PK-15细胞制备血凝抑制试验抗原,用制备的抗原乳化后免疫豚鼠制备阳性血清,同时用未免疫的阴性豚鼠制备阴性血清。对抗原、阳性血清和阴性血清进行鉴定,结果表明,制备的PPV血凝抑制试验抗原HA效价达1:512;阳性血清HI效价达1:1024;阴性血清HI效价＜1:8,且特异性均良好。利用制备的血凝抑制试验抗原、阳性血清与不同PPV疫苗株的灭活抗原、阳性血清进行交叉反应试验,结果表明,制备的抗原与阳性血清具备良好的血清学交叉反应性,可用于PPV制品的统一评价。     

植物增殖细胞核抗原与DNA复制关系的研究现状

为了更深入的对植物增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)进行研究，本研究归纳了PCNA的研究现状，总结了PCNA的结构特征和包括PCNA参与DNA复制、DNA损伤修复和细胞周期调控等在内的PCNA的功能特点。目前有关PCNA的研究以医学和动物体为主，有关植物PCNA研究的报道很少且相对落后，但已有文献指出，PCNA调控DNA复制，参与DNA复制以确保植物体正常生长发育，因此植物PCNA的功能值得继续研究。     

猪瘟病毒检测和猪瘟疫苗研究进展

猪瘟（Classical Swine Fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起的高度 传染性、致死性疾病，是公认对养猪业危害最严重的病毒性疾病之一。自 1810 年首次报告 CSF 疫情至今，CSF 给世界养猪业造成了重大经济损失，持续威胁着全球猪肉生产和人类的食品安全。世界动物卫生组织将 CSF 列 为最重要的法定报告传染病之一，在我国被列为一类传染病。现阶段 CSF 临床表现形式复杂多变，有死亡率很 高的急性型或死亡率变化不定的亚急性型、慢性型、隐性型及持续感染型等，且常与多种疫病混合感染。目前， 疫苗免疫接种仍然是全球大多数国家特别是发展中国家防控 CSF 的主要手段， CSFV 抗原 / 抗体试验室诊断和临 床检测技术的开发和应用对于 CSF 防控也起到非常重要的作用。随着生物技术的快速发展，更多的 CSFV 抗原 / 抗体检测技术和新型疫苗被开发和批准使用。综述 CSFV 抗原和抗体检测技术、CSFV 减毒活疫苗和亚单位疫苗、 载体疫苗等新型疫苗开发进展等，以期为更好地防控 CSF 提供参考。     

肝片吸虫免疫显性抗原基因的筛选及鉴定

为筛选出特异的肝片吸虫诊断候选抗原,拓展诊断靶标,利用肝片吸虫阳性血清筛选肝片吸虫cDNA表达文库,获得肝片吸虫特异性抗原基因,采用RT-PCR技术扩增目的基因,连接表达载体pET-32a(+),构建重组质粒,转化入感受态细胞BL21(DE3)中,利用IPTG对重组蛋白进行诱导表达,通过SDS-PAGE及Western blot技术对蛋白表达情况进行鉴定。结果显示:经筛选获得了17个肝片吸虫免疫显性抗原基因,其中假定蛋白Fh010935为肝片吸虫特异性抗原基因;扩增得到的Fh010935核苷酸序列大小为144 bp,编码48个氨基酸,A+T含量为55.56%;Fh010935蛋白由1个α-螺旋,2个β-折叠和3个β-转角构成,具有3个抗原表位,推测该蛋白可能具有较好的抗原性;重组蛋白主要以包涵体形式表达,分子量大小约24 ku,可以被肝片吸虫感染阳性血清特异性识别,具有较好的反应原性。提示:假定蛋白Fh010935可作为肝片吸虫病诊断候选抗原,为疾病诊断制剂的开发提供前期基础。     

弓形虫和新孢子虫交叉反应抗原MIC7A对小鼠的免疫保护效力分析

弓形虫和新孢子虫是两种亲缘关系接近的顶复亚门原虫，二者之间存在一定程度的交叉免疫保护作用，这种作用可能是基于交叉反应抗原产生的。本研究旨在表达并鉴定弓形虫和新孢子虫的交叉反应抗原TgMIC17A，通过将其应用于小鼠的免疫保护试验，评估该抗原对弓形虫和新孢子虫感染产生的交叉免疫保护作用。对TgMIC17A进行基因克隆和原核表达，通过免疫印迹试验鉴定其反应原性和交叉反应性。重组蛋白免疫小鼠后测定血清特异性IgG抗体水平，评价其免疫原性。二免后，分别用1×10³个弓形虫Pru速殖子、1.5×10⁷个新孢子虫Nc1速殖子攻虫，对小鼠的体重变化、存活率进行监测，并在攻虫30 d后检测各组存活小鼠的脑荷虫量，评价TgMIC17A重组蛋白免疫小鼠后对弓形虫和新孢子虫的交叉免疫保护效果。结果显示，rTgMIC17A可以被弓形虫和新孢子虫的阳性血清识别，相较于未免疫组小鼠，免疫组小鼠体内可产生高水平特异性IgG抗体(P＜0.01)，且感染弓形虫或新孢子虫的脑荷虫量均显著降低(P＜0.01)。本研究克隆并表达了TgMIC17A，鉴定其为新孢子虫和弓形虫的交叉反应抗原。该抗原可以刺激小鼠产生较好的体液免疫反应，并对弓形虫和新孢子虫的感染产生一定的交叉免疫保护作用，可以为弓形虫和新孢子虫共感染的防治，以及筛选具有交叉免疫保护力的重组疫苗提供可借鉴的研究资料。     

氯霉素抗体的制备

采用改进的混合酸酐法合成的免疫原氯霉素琥珀酸酯牛血清白蛋白（CAP－HS－BSA），经红外滤谱鉴定后，免疫5只家兔，3个月后，产生合格氯霉素抗血清，用双向琼脂扩散方法测定效价为1：16。此氯霉素（CAP）抗血清与氯霉素半琥珀酸酯和琥珀酸钠氯霉素的交叉反应率分别为850．0％、800．0％，与磺胺二甲嘧啶、磺胺－5－甲氧嘧啶、水溶性氟哌酸、青霉素、链霉素的交叉反应率均小于0．01％。