长枝木霉菌株GAAS L3-1-0.8对玉米形态学指标影响及其生物学特性

采用不同浓度长枝木霉菌株悬浮液处理玉米种子,研究长枝木霉菌株GAAS L3-1-0.8对玉米的促生作用及其生物学特性。结果表明,与对照相比,1.0×10~6CFU/m L处理对玉米发芽率、芽长、根长、根数和根鲜重呈显著差异(P0.05),有明显促生作用。菌株GAAS L3-1-0.8生长温度范围为10℃~35℃,菌丝最适宜扩展温度为25℃~30℃,最适产孢温度为25℃;菌落在p H值为5.0~10.0的培养基上能够迅速扩展,菌丝最适扩展的pH值为6.0~9.0,产孢最适酸碱度为6.0~7.0;营养生长较好的碳源为葡萄糖、麦芽糖和乳糖,最适宜菌丝扩展的碳源为葡萄糖和麦芽糖,在含有葡萄糖碳源的培养基上产孢量最高;营养生长和产孢量最适氮源为酵母膏;24 h黑暗条件下营养生长最快,12 h光暗交替条件有利于产孢。     

短密木霉新菌株BF06对黄瓜土传病害的防治效果与促生作用

连作导致枯萎病等土传病害发生日益严重,已成为我国黄瓜生产的重要限制因素。采用化学防治和农业措施防治土传根部病害,操作都较为困难,迫切需要开发环境友好的生物防治技术。本研究从森林土壤分离鉴定一株短密木霉菌株BF06,通过对峙培养发现该菌株可以附着和缠绕病原菌的菌丝,对引起黄瓜枯萎病、茎基腐病、菌核病、根腐病和疫病的病原菌Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum,Rhizoctonia solani,Sclerotinia sclerotiorum,F. solani f. sp. cucurbitae,and Phytophthora cryptogea具有较强的拮抗作用。温室盆栽试验发现短密木霉菌株BF06可以迅速附着定殖于黄瓜根部表面,对上述5种黄瓜根部病害的防效达60%以上,对黄瓜枯萎病和茎基腐病的防效分别为90.4和88.8%。此外,利用植物组织培养基培养观察发现BF06显著地促进幼苗黄瓜侧根的形成和生长。本研究的结果表明短密木霉菌株BF06是一种可以有效防治黄瓜根部病害的新生防资源。     

纳他霉素与6种不同杀菌剂混配对平菇木霉M23的毒力比较

[目的]明确纳他霉素与6种杀菌剂对木霉毒力的差异并比较纳他霉素与6种杀菌剂混配对木霉M23的毒力。[方法]采用菌丝生长速率法测定纳他霉素和6种不同杀菌剂以及纳他霉素与6种杀菌剂混配对木霉M23的室内毒力。[结果]6种不同杀菌剂对木霉的毒力不同,其EC_(50)分别为0.448 4、0.709 9、1.390 8、8.648 3、12.448 1和18.185 6 mg/L;与6种杀菌剂相比,纳他霉素表现出较好的杀菌效果,其EC_(50)为1.551 1 mg/L,与百菌清相近。混配试验结果表明,纳他霉素与百菌清以3∶1比例、与多菌灵以1∶6比例、与苯醚甲环唑以1∶6比例混配均具有最高的共毒系数,其值分别为250.020 0、373.990 3和189.194 4。[结论]纳他霉素与百菌清(3∶1比例)、多菌灵(1∶6比例)、苯醚甲环唑(1∶6比例)混配均具有较好的增效作用,可进一步用于生产实践。     

长枝木霉菌株T05发酵液抑菌力参数筛选

为了得到抑菌活性更高的发酵液,研究了长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)菌株T05发酵液及发酵液乙酸乙酯提取物对灰霉病菌(灰葡萄孢(Botrytis cinerea))和杨树烂皮病菌(污黑腐皮壳(Valsa sordida))的抑菌活性,并以V.sordida作为指示菌对发酵液的培养时间、培养温度、初始pH值、接菌量这4项指标进行了筛选。结果表明:T05发酵液对B.cinerea和V.sordida都有一定的抑制作用,对B.cinerea的最高抑菌率为PDB发酵液过滤除菌后在48 h的55.48%,对V.sordida的最高抑制率为改良马丁培养基发酵液过滤除菌后48 h的48.68%;培养7 d的发酵液乙酸乙酯提取物对2种病原菌的抑菌作用更为显著,在24 h的抑菌率都为100%,在96 h时对2种病原菌的抑菌率分别为84.1%和82.6%,均表现出极强的抑菌活性。筛选后获得最高抑菌率的最佳发酵组合为:培养时间6 d、温度28℃、初始pH=6、500 m L的三角瓶装液量250 m L的条件下接菌量为0.5 m L。在该条件下T05发酵液的乙酸乙酯提取物在96 h对V.sordida的抑菌率从82.9%上升到99.0%。     

深绿木霉1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶基因的克隆及表达

以深绿木霉(Trichoderma atroviride)ACCC30153为试材,应用聚合酶链式反应(PCR)技术克隆获得1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶ACCD基因的c DNA全长。结果表明:此基因的c DNA编码区序列全长1 083 bp,编码区可编码360个氨基酸。经Blast P相似性分析,其属于Try-synth-beta-Ⅱ家族,与里氏木霉(T.reesei)氨基酸序列XP-006967764的同源性最高,达到91%。在5种不同诱导条件下,ACCD基因的表达量均有明显变化。在C、N饥饿培养基中分别培养8 h与16 h时,ACCD基因表达量达到最大值,为未诱导时的22.7倍与22.4倍;在山新杨叶粉与茎粉的诱导下,ACCD的表达量分别在培养的24 h与2 h达到最大,为未诱导的22.6倍与27.3倍。     

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为丰富微生物降解菌资源应用于重金属污染土壤的生物修复,采用土壤平板稀释法结合28S rDNA序列测定与系统发育树构建等方法,研究重金属镉污染土壤中强耐镉性菌株种类及其对Cd2+的降解作用.结果表明:筛选到1株具有强耐镉性的菌株T61,该菌株为哈茨木霉菌(Trichoderma harzianum);在pH 4、温度28℃时,其对Cd2+的降解率最大,为58％.     

黄绿木霉T1010对樱桃番茄横向土壤环境性状改良效果研究

为了研究黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)T1010对土壤微生物群落、物理性状、化学性状的作用,评价T1010调整土壤环境性状生态效应的潜力,采用土壤稀释法测定土壤中微生物群落数,土壤称重法测定物理性状,无机化学反应法测定土壤中主要化学指标含量,结果表明:T1010促进土壤中细菌、放线菌、固氮菌的生长,与土壤处理前相比,固氮菌数量最大提高6.04倍,比对照提高58.02%;T1010抑制其他真菌的生长,比初始值下降52.99%,比对照下降79.47%;T1010改良物理性状,比重、容重比对照下降,总孔隙度趋近50%;水解氮、有机质比对照提高,与T1010的增殖正相关,有效磷比对照降低,与T1010的增殖负相关;T1010处理组侧根数比常规化肥处理组增加144%,立枯病感病指数降低36.36%。T1010具有改良土壤物理性状、提高微生物群体量、促进化学物质的可溶性等多种功能,是一种潜在、有效的土壤改良菌株。     

木霉菌形态学分类检索与分子生物学鉴定

木霉菌(Trichodermaspp.)为世界性分布,广泛存在与土壤、腐烂的木材及蔬菜基质中。某些菌株是重要的工业酶和抗生素的产生菌,并作为生防因子用于防治多种作物病害。近些年来,木霉的分类和鉴定主要参考形态学特征(Gams和Bissett)和核酸序列分析。本文就这两个方面进行了总结整理,以期对国内木霉菌的分类和鉴定工作提供便利和帮助。     

钩状木霉Th12菌株液体发酵条件的研究

[目的]研究钩状木霉Th12菌株最适的液体发酵条件,为研制和开发生物防治木霉制剂提供理论基础。[方法]采用稀释土壤平板法以及平板对峙法筛选、鉴定出钩状木霉Th12菌株,并考察了碳源、氮源、发酵时间、发酵温度、初始pH、接菌量、装瓶量、摇床转速对木霉菌丝体产量的影响。[结果]木霉Th12菌株的最适液体发酵条件为以葡萄糖为碳源、蛋白胨为氮源、发酵温度为25℃、初始pH为6、接菌量为0.8 ml、装瓶量为50 ml、摇床转速为180 r/min的培养液C中培养3 d,此时菌丝体产量最高。[结论]木霉Th12菌株在最佳液体培养条件中能最大限度地提供用于草坪镰孢枯萎病和褐斑病病害防治的菌丝体量。     

里氏木霉外源表达载体的构建

[目的]构建里氏木霉外源表达载体。[方法]以里氏木霉40359的CBHI启动子和终止子构建了里氏木霉40359外源表达载体,并用该表达载体成功表达了抗潮霉素B磷酸转移酶基因,得到6株可在含175 mg/L潮霉素的基础培养基上生长的抗性菌株;提取6株抗性菌株的DNA整合到里氏木霉菌株中,并对其进行潮霉素耐受性检测。[结果]6株抗性菌株的抗潮霉素能力比原始菌株提高了75%;转基因菌株的潮霉素抗性可以稳定遗传,证明表达载体构建成功。[结论]为开展里氏木霉分子生物学研究与遗传改造奠定了基础。