杂色鲍原代细胞培养方法的优化及其在基因功能研究中的应用

优化了杂色鲍原代细胞的培养条件,并利用原代细胞进行了RNAi和外源基因表达。结果表明,较高的渗透压对血淋巴细胞培养起重要作用,淋巴细胞分离液分离血淋巴细胞更利于其生长。原代细胞培养至第5天,在细胞培养液中添加50μg My D88 dsRNA,能够显著降低My D88 mRNA的表达。p EGFP-N1转染培养5 d的鳃细胞,5 d后可以检测到绿色荧光。该研究表明可以成功培养杂色鲍血和鳃原代细胞,并且利用原代细胞可以进行功能基因表达量调低或调研究,为功能基因注释提供了便利条件。     

Discrimination and abundance estimation of wild and released abalone Haliotis diversicolor using stable carbon and oxygen isotope analysis in north-eastern Taiwan

The discrimination between wild and released Taiwan abalone Haliotis diversicolor was performed by stable carbon isotope analysis. Abalone samples were collected from Mao Aw Gulf in north-eastern Taiwan. Live abalone and dead shells were collected by divers with an 80 × 80 cm frame. The densities and amounts of wild and released abalone, as well as the survival rates of released abalone, in 1997 and 1998 were estimated. The age of the specimens was also determined from the specific temperature of each month and the inverse relationship between oxygen isotope values and temperatures. Results show that examining stable isotopic profiles proves to be a practical and feasible method for stock discrimination as well as density and abundance estimation. These data would be helpful in assessing the success of abalone culture and release programs, which aim to enhance this valuable marine resource.     

皱纹盘鲍4个群体与九孔鲍16S rRN A基因遗传差异分析

采用PCR方法扩增了皱纹盘鲍（4个群体）和九孔鲍（1个群体）共5个群体（53个样本）16S rRNA基因片段（16S）,测序获得了1000 bp核苷酸序列,其中669 bp核苷酸序列用于遗传差异分析,旨在评估我国皱纹盘鲍不同群体间及其与九孔鲍间的遗传差异。从52个序列中共检测到17种单倍型,其中皱纹盘鲍4个群体有13种单倍型,九孔鲍1个群体（9个样本）有4种单倍型。单倍型核苷酸序列比对显示,变异位点占比对位点的20．5％,基于单倍型的皱纹盘鲍4个群体间的遗传距离为0．002～0．011,平均为0．005;九孔鲍群体内的平均遗传距离为0．004,两种鲍间的平均遗传距离为0．218;两种鲍间的遗传分化系数 F‐统计量 FST平均为0．982,皱纹盘鲍4群体间的 FST值为0．0051～0．0065。本研究显示2种鲍群体内16S变异很小。系统发育分析鲍属11种鲍的聚类关系,显示皱纹盘鲍与盘鲍、日本鲍交叉聚为一支,九孔鲍与杂色鲍也交叉聚为一支,4个种类未聚成单系支。     

杂色鲍同种移植炎症因子1的克隆及其在应激下的表达

同种移植炎症因子AIF-1 (allograft inflammatory factor 1,AIF-1)是一种由干扰素γ诱导的含有EF-hand结构域的钙离子结合蛋白,其功能主要是参与移植排斥、免疫炎症反应、自身炎性和非炎性的损伤等.首次克隆了杂色鲍AIF-1基因cDNA全序列,命名为HdAIF-1,其全长为942 bp,开放阅读框为456 bp,编码151个氨基酸.实时荧光定量PCR结果表明:HdAIF-1在杂色鲍各组织中均有表达,其中在血淋巴和鳃中表达量最高.高温应激下,HdAIF-1在鳃组织中各时相表达均显著上调,并在温度升至31℃时达到最高.而血淋巴和肝胰腺中HdAIF-1在高温应激前4个时相表达无显著差异,到了96 h均显著上调.缺氧应激下,HdAIF-1在血淋巴中表达变化没有显著差异,而鳃中24 h显著下调,192 h显著上调.副溶血弧菌感染实验表明HdAIF-1基因在感染后3、24和48 h均检测到HdAIF-1的表达量显著上调.高温和缺氧应激以及弧菌感染均显示HdAIF-1基因表达量发生显著变化,说明HdAIF-1可能作为免疫因子在杂色鲍应激等状况下发挥重要作用.     

杂色鲍群体间杂交的杂种优势分析

杂色鲍（Haliotis diversicolor）是中国南方主要的鲍养殖种类,近年来“东优1号”杂色鲍因较高的成活率优势已在产业上得到越来越广泛的推广养殖.该研究采用3×3完全双列杂交的方式,对杂色鲍“东优1号”群体、杂色鲍古雷群体和杂色鲍越南群体3个群体自繁与杂交后代的养殖性能进行跟踪,并对其杂种优势进行评估.结果表明,3个群体自繁后代的生长速度和成活率上存在显著差异（P＜0.05）,同时3个组合的生长速度与成活率的双亲杂种优势率值均不高,且2个单亲杂种优势率值之间有显著差异（P＜0.05）.     

九孔鲍选择群体F1的选择反应与现实遗传力估计

以中国九孔鲍（Haliotis diversicolor aquatili）养殖群体与日本野生群体杂交子二代为选育基础群体,采用群体选育方法进行九孔鲍的选择育种研究,以估计该养殖群体的选择反应与现实遗传力。截断选择壳长最大的10％个体作为选择组亲本（SS）,从基础群体中随机抽取相同数量的个体作为对照组亲本（sc）,选择强度为1．755,结果表明,选择组与对照组在卵径、受精率方面无显著的差别（P〉0．05）,但选择组在幼体附着率、幼体变态率、幼体成活率及稚贝早期生长方面与对照组相比表现出不同程度的生长优势（P〈0．05）,选择组50日龄的稚鲍成活率达到35．07％,显著大于对照组23．62％（P〈0．05）,40—270日龄的选择组壳长选择反应和现实遗传力变化范围分别为13．64％～81．88％和0．21～0．53,平均为31．63％和0．36,选择组平均壳长显著大于对照组（P〈0．01）。研究初步显示,养殖群体的选择反应极显著,群体选育是养殖九孔鲍遗传改良的有效途径。     

中国海耳鲍成熟卵的超微结构

利用光学和电子显微镜对耳鲍排出体外成熟卵的形态及超微结构进行了观察。耳鲍成熟卵具有卵胶质膜、卵黄膜和细胞膜;卵质中含有线粒体、核糖体、内质网及高尔基体等细胞器;还含有高电子密度的分泌颗粒和吞饮小泡。皮层中含有皮质小泡,但未发现中心粒。耳鲍成熟卵没有明显的卵极标志,卵黄颗粒分布较均匀。     

皱纹盘鲍的遗传育种研究进展

皱纹盘鲍为我国北方的重要养殖品种,但随着养殖规模与密度的不断扩大,因种质退化等原因导致暴发性病害频发。因此,皱纹盘鲍的遗传改良研究对于皱纹盘鲍养殖产业的可持续健康发展十分重要。本文对我国皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）的生物学特征、微卫星标记、选择育种、杂交育种、多倍体育种、雌核发育的研究现状进行了综述,并对今后皱纹盘鲍遗传育种的方法和方向作了展望。     

低氧胁迫对九孔鲍免疫防御因子的影响

为了解低氧胁迫条件下九孔鲍免疫防御因子的变化及机体抗病力变化, 将九孔鲍置于不同的溶解氧环境中, 观测相关免疫因子变化。结果显示, 在水温为(22.1?1.3) oC, 盐度为30.72?0.54, pH值为8.20?0.14的海水环境中, 溶解氧含量由(7.49?0.14) mg/L下调至(2.53?0.16) mg/L后120 h内, 平均体质量为(14.25±2.21) g的九孔鲍未见死亡, 而每只鲍注射5.0?10⁵ CFU 副溶血弧菌后120 h内实验鲍的累计死亡率高达91.11%?7.70%, 比对照组(11.11%?3.83%)累计死亡率高出80%, 血淋巴抑菌清除率下降至?(3 340.47%?298.57%), 显而易见, 低氧胁迫使得九孔鲍拮抗副溶血弧菌感染的抵抗力显著下降。低氧(2.53?0.16) mg/L胁迫下, 九孔鲍血淋巴细胞数量(THC)下降30.62%?4.87%、血淋巴细胞吞噬率下降62.77%?5.79%、呼吸爆发产生的超氧阴离子数量下降22.21%?5.89%。低氧胁迫下九孔鲍血淋巴细胞内MPO活性上升(9.63%?7.59%)~(22.90%?13.73%)、CAT活性提高(7.68%?6.83%)~(56.28%?13.96%), 反映出低氧胁迫下九孔鲍体内应激反应产生的物质氧化加剧, 血淋巴细胞内产生大量的活性氧自由基。溶解氧含量由(7.49?0.14) mg/L下调至(4.51?0.12) mg/L后九孔鲍已明显处于低氧胁迫和应激反应状态, 120 h内的累计死亡率达到37.78%?3.85%, 血淋巴抑菌率下降至883.56%?123.22%; THC、血淋巴细胞吞噬率、呼吸爆发产生的超氧阴离子O₂^- 数量等最大降幅分别达到12.51%?6.59%、21.90%?15.84%、12.93%?5.74%; MPO活性在原有水平的?(10.61%?4.20%)~(7.13%?6.45%)之间波动, CAT活性在?(5.17%?18.08%)~(16.26%?10.85%)之间变化。     

低分子量岩藻聚糖酶法制备工艺

为了获得分子量集中,生物活性显著的岩藻低聚糖片断,该试验从九孔鲍肝胰腺中分离纯化出岩藻聚糖裂解酶裂解岩藻聚糖。通过等电点法、硫酸铵分布盐析法及Sephadex G-150柱分离纯化出2种底物酶(岩藻聚糖酶、α-L-岩藻糖苷酶),同时采用黏度和还原糖法作为酶活的评价指标评价酶的作用特点。结果表明:等电点法中pH值4.5、5.0时的沉淀物酶活最高,且pH值4.5的沉淀物在硫酸铵质量分数为30%时分离纯化出岩藻聚糖酶,而pH值5.0的沉淀物在硫酸铵质量分数40%时分离纯化出α-L-岩藻糖苷酶。此种工艺方法能得到2种岩藻聚糖裂解酶,底物降解率为8%～15%,获得硫酸基团破坏性小的低分子量岩藻聚糖。因此,九孔鲍岩藻聚糖裂解酶可作为酶法制备低分子量岩藻聚糖的工具酶,具有重要的开发应用价值。