肿瘤坏死因子（TNF─α）对培养大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的作用

通过肿瘤坏死因子（ＴＮＦ─α）对培养大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的作用及机理的研究结果表明：ＴＮＦ─α可抑制培养２４ｈ的睾丸间质细胞的睾酮分泌，对培养４８ｈ和７２ｈ的间质细胞睾酮分泌表现出双相作用，低浓度的ＴＮＦ─α可刺激睾酮分泌，高浓度的ＴＮＦ─α抑制睾酮分沁．ＴＮＦ—α与ＬＨ同时处理时，对培养２４ｈ的睾丸间质细胞，ＴＮＦ─α抑制ＬＨ刺激的睾酮分泌，对培养４８ｈ和７２ｈ的睾丸间质的细胞低浓度的ＴＨＦ—α与ＬＨ协同促进睾酮分泌，而高浓度的ＴＮＦ—α则可抑制ＬＨ刺激的睾酮分泌。高浓度的ＴＮＦ─α对睾酮的抑制作用可能是通过抑制由孕酮向睾酮的转化过程实现的。     

玉米赤霉烯酮对大鼠子宫内膜细胞Caspase-3和Caspase-8表达的影响

探讨玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)对雌性大鼠子宫内膜细胞凋亡与Caspase-3和Caspase-8蛋白表达的关系,进而揭示其导致子宫损伤的作用机制。应用HE染色观察组织病理变化,免疫组化SP法检测注射玉米赤霉烯酮后6个时间点大鼠子宫内膜细胞Caspase-3和Caspase-8蛋白的表达。病理组织学观察发现,试验组子宫组织出现不同程度损伤,子宫内膜细胞发生凋亡。免疫组化结果显示,试验组子宫内膜上皮细胞与间质细胞Caspase-3和Caspase-8蛋白表达量均明显高于对照组(P0.05)。不同时间点相比,Caspase-3在内膜上皮细胞中12h表达量最高,而在内膜间质细胞中18h表达量最高;Caspase8在内膜上皮细胞中18h表达量达到峰值,而在内膜间质细胞中24h表达量最高,之后缓慢下降。结果表明,ZEA可能通过上调Casepase-3和Caspase-8的表达从而引起子宫内膜细胞凋亡。     

C-fos对体外培养仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

通过C-fos ASODNs诱导C-fos基因发生转录后沉默,用人绒毛膜促性腺激素(HCG)诱导体外培养的3周龄荣昌仔猪睾丸间质细胞(Leydig cells,LC)睾酮分泌,用酶联免疫分析方法检测基础状态下和HCG诱导下体外培养的仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的水平。结果显示,C-fos ASODNs以剂量依赖性方式抑制基础状态下和HCG诱导下的睾酮分泌(P0.01),这表明C-fos在基础状态下还是HCG诱导下均可促进仔猪睾丸间质细胞睾酮的分泌。     

成年小鼠睾丸间质细胞的分离、鉴定及功能检测

为建立成年小鼠睾丸间质细胞分离纯化方法,并对分离纯化的睾丸间质细胞进行睾酮分泌功能检测,对成年小鼠睾丸组织进行Ⅰ型胶原酶消化、Percoll分离液密度梯度离心,分离成年小鼠睾丸间质细胞.细胞纯度用3β-羟类固醇脱氢酶(3β-hydroxy-steroid-dehydrogenase,3β-HSD)染色鉴定.将分离纯化的睾丸间质细胞进行体外培养,在基础睾酮和人绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激培养条件下,用放射免疫分析法对培养上清中的睾酮含量进行检测.结果显示,通过该方法能获得高纯度成年小鼠睾丸间质细胞(＞95％),培养的睾丸间质细胞具有分泌基础睾酮以及对hCG刺激反应的能力.提示采用该方法对成年小鼠睾丸间质细胞进行分离纯化具有高效性、可用性,通过该方法获得的睾丸间质细胞是体外研究药物对睾酮分泌功能影响的良好模型.     

亚硒酸钠对绵羊睾丸间质细胞氧化应激及Keap1-Nrf2信号通路的影响

本试验旨在研究硒对绵羊睾丸间质细胞抗氧化能力及Keap1-Nrf2信号通路的影响。使用不同浓度亚硒酸钠（0、2、4、8μmol/L）处理绵羊睾丸间质细胞，采用试剂盒测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和活性氧（ROS）含量，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分析抗氧化相关基因及蛋白表达。结果表明：2μmol/L硒组ROS和MDA含量显著低于其他各组，SOD和GSH-Px活性显著高于其他各组，8μmol/L硒组呈相反变化趋势；且随着硒浓度升高，Keap1表达量显著降低；NQO1表达量显著升高；Nrf2和HO-1的mRNA表达量显著升高，蛋白丰度呈上升趋势。综上，硒能通过调控抗氧化酶活性，激活Keap1-Nrf2抗氧化信号通路，调节细胞内的氧化应激反应。     

c-Fos调节hCG诱导的仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的信号转导途径

睾酮是一种重要的类固醇激素,动物体内约95%的睾酮都由睾丸间质细胞合成并分泌。研究显示,原癌基因参与性腺功能调控,c-Fos作为原癌基因的1种,在生精细胞发育过程和睾丸内分泌功能中起着重要调控作用。本试验以荣昌仔猪为试验对象,探究c-Fos调节hCG诱导仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的信号转导途径,为进一步研究仔猪睾酮分泌的机理奠定基础。结果显示:(1)间质细胞cAMP在hCG诱导后显著增高,当二丁酰cAMP与hCG共同作用时,睾酮分泌达到最大,且当二丁酰cAMP与c-Fos ASONDs作用时,可明显逆转c-Fos ASONDs对hCG诱导仔猪间质细胞睾酮分泌的抑制作用。(2)维拉帕米(10-5 mol/L)对hCG诱导的间质细胞睾酮分泌未见明显作用,当维拉帕米和c-Fos ASONDs共同作用时也没有加强c-Fos ASONDs对hCG诱导的睾酮分泌的抑制作用。     

不同分离方法对绵羊睾丸间质细胞纯度的影响

旨在探寻一种分离纯度较高的绵羊睾丸间质细胞的分离方法。试验比较了3种不同的分离方法对绵羊睾丸间质细胞纯度的影响。结果表明,机械分离结合细胞筛过滤法,不仅操作简便,而且分离出的间质细胞纯度高于90%。     

HCG通过StAR蛋白快速调节睾酮的合成

以2~3周龄长白仔猪睾丸间质细胞为材料研究HCG对睾酮合成的快速调节作用。结果表明:(1)在2h内,对照组间质细胞分泌睾酮的量为(3.25±0.28)ng/mL,而HCG(浓度为50IU/mL)处理组睾酮的浓度为(8.79±0.54)ng/mL,增幅为4.54ng/mL,二者差异极显著(P<0.01);(2)在2h内,对照组细胞内cAMP的浓度为(13.13±1.12)pmol/mL,而处理组cAMP的浓度为(39.22±2.38)pmol/mL,二者之间差异极显著(P<0.01);(3)加入前体物后,胆固醇对照组睾酮浓度为(3.81±0.45)ng/mL,处理组睾酮浓度为(27.13±1.27)ng/mL,处理组睾酮的浓度明显高于对照(P<0.05),其它几种前体对照组与处理组差异不显著(P>0.05)。(4)在2h内,HCG增加了StAR蛋白和mRNA的表达。这表明在快速反应期,HCG通过促进StAR蛋白的表达,增强睾酮的生物合成。     

大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌对奶牛睾丸间质细胞炎症反应和睾酮分泌的影响

探讨不同数量大肠埃希菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)对奶牛睾丸间质细胞(LCs)炎性因子、类固醇合成快速调节蛋白(StAR)以及睾酮(T)分泌的影响。通过体外培养LCs,选取生长状态良好的第3代LCs进行试验。根据E.coli和S.aureus作用数量,试验各分为6组,即用不同数量的E.coli(0、10~4、10~5、10~6、10~7、10~8 CFU/mL)和不同数量的S.aureus(0、10~4、10~5、10~6、10~7、10~8 CFU/mL)感染LCs。通过实时荧光定量PCR检测相关炎性因子和StAR mRNA表达的变化;用牛睾酮(T)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒检测睾酮分泌水平的变化。结果表明,E.coli数量为10~8 CFU/mL和S.aureus数量为10~7 CFU/mL时,IL-6和IL-1βmRNA的表达量最高,与其他组相比较增加极显著(P<0.01);E.coli数量为10~4、10~5、10~6、10~7、10~8 CFU/mL时感染LCs后,StAR mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05);S.aureus浓度为10~6、10~7和10~8 CFU/mL时,StAR mRNA的表达量显著低于对照组(P<0.05);分别用E.coli和S.aureus感染LCs 12 h,睾酮分泌量与对照组相比无显著变化(P>0.05)。结果表明,LCs被E.coli和S.aureus感染12 h,能引起LCs的炎症反应,同时抑制StAR mRNA的表达,但对睾酮的分泌无显著影响。     

V_E,IGF-I和hCG对体外培养小鼠睾丸间质细胞增殖的影响

为了探究不同浓度维生素E(V_E)、胰岛素样生长因子(IGF-I)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)对睾丸间质细胞(LCs)增殖的作用,试验通过添加不同浓度V_E,IGF-I,h CG分别处理小鼠睾丸间质细胞24,48 h,采用四唑盐比色法(MTT法)检测细胞活力。结果表明,与对照组相比,24 h时V_E组细胞活力显著增加(P0.05),IGF-I,h CG组差异不显著(P0.05);48 h时,V_E,h CG组细胞活力差异显著(P0.05),IGF-I组差异不显著(P0.05)。说明在24,48 h的IGF-I对细胞的增殖变化没有明显促进作用,V_E和h CG对细胞增殖有一定的促进作用。